袁仕偉 鄭衛(wèi)東 吳宏杰

湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)部，湖北十堰 442000

嗜酸性粒細(xì)胞是體內(nèi)抗寄生蟲感染以及參與過敏性疾病（如支氣管哮喘）的主要效應(yīng)細(xì)胞。在支氣管哮喘的發(fā)生過程中，上皮細(xì)胞或者其他炎癥細(xì)胞釋放的炎癥相關(guān)分子能誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞趨化至感染部位，隨后進(jìn)一步釋放炎癥介質(zhì)如花生四烯酸代謝物（如血小板活化因子，半胱胺酰白三烯）、氧自由基、細(xì)胞因子/趨化因子、細(xì)胞毒性顆粒蛋白等物質(zhì)[1]。后者包括主要堿性蛋白，嗜酸性粒細(xì)胞過氧化物酶以及嗜酸細(xì)胞陽離子蛋白（eosinophil cationic protein，ECP）和嗜酸粒細(xì)胞衍生神經(jīng)毒素等[2]。有研究顯示，嗜酸性粒細(xì)胞以及其產(chǎn)物ECP是哮喘急性發(fā)作期的重要特征性標(biāo)志物。此外，多種細(xì)胞因子/趨化因子也參與哮喘的發(fā)生過程[3]。因此在本研究當(dāng)中，筆者將探討哮喘急性發(fā)作期ECP、IL-5和IP-10的變化情況，以此評價(jià)嗜酸性粒細(xì)胞的活性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

80例支氣管哮喘患兒來自我院兒科2009年1月～2010年4月所收治。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不同意進(jìn)入本研究的患者；②各種細(xì)菌感染；③先天性心臟病患兒；④伴有各種慢性呼吸系統(tǒng)疾?。虎菝庖吖δ墚惓?；⑥治療依從性差，不能堅(jiān)持用藥和配合觀察者；⑦急性支氣管炎、心源性哮喘等疾病患兒；⑧合并有心肝腎等嚴(yán)重功能障礙者。所有急性發(fā)作其患兒和穩(wěn)定期患兒均符合中華醫(yī)學(xué)會兒科分會呼吸學(xué)組所制訂的《兒童支氣管哮喘防治常規(guī)》標(biāo)準(zhǔn)[4]。急性發(fā)作期42例，其中男24例，女 18 例；年齡 3.5～12.0 歲，平均（7.5±2.5）歲；病程 0.5～4.0年。穩(wěn)定期患兒38例，男20例，女18例；年齡3.3～12.5歲，平均（7.3±2.8）歲；病程0.6～4.5年。選取同期健康普查的18例健康兒童為對照，對照組無過敏性相關(guān)疾病且各種無寄生蟲和病毒感染。三組在年齡、性別等一般資料上比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 治療方法

輕至中度哮喘發(fā)作患兒，霧化吸入舒喘靈和色甘酸二鈉，3次/d。重度發(fā)作者吸入異丙腎上腺素，若SpO2≤95%則給予吸氧。除輕度患兒外，其他患者均靜脈注射潑尼松龍3～5 d。

表1 急性發(fā)作哮喘患兒體內(nèi)ECP與細(xì)胞因子/趨化因子變化情況（x±s）

1.3 ECP、IL-5以及 IP-10檢測

采用熒光酶免疫測定法檢測ECP的濃度，期操作按試劑盒（法瑪西亞）提供的步驟進(jìn)行。主要包括：50μL血清加入ECP包被的ImmunoCAP中，37℃孵育后，洗滌并加入酶標(biāo)抗ECP抗體，洗滌加入底物、終止液后，測定熒光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算ECP含量。IL-5、IL-10和IP-10采用ELISA檢測，試劑盒由美國RapidBioLab公司提供，操作方法與ECP檢測類似。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，配對資料采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，非配對資料用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 哮喘急性發(fā)作期各指標(biāo)變化情況

血清ECP、IL-5、IL-10和IP-10的水平測定顯示，與穩(wěn)定型哮喘組比較，急性發(fā)作期患兒ECP、IL-5、IL-10和IP-10明顯增高，嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)有所降低。而與對照組比較，急性發(fā)作期患兒ECP，IL-5和IP-10顯著增高，但ECP水平僅輕微增高。見表1。

2.2 糖皮質(zhì)激素治療前后對各指標(biāo)的影響

急性發(fā)作期患兒經(jīng)糖皮質(zhì)激素治療后，ECP、IL-5、IP-10顯著降低，但I(xiàn)L-10無明顯變化。見表2。

表2 糖皮質(zhì)激素治療對ECP，IL-5，IL-10以及IP-10的影響（x±s）

3 討論

有研究顯示，哮喘急性發(fā)作期血清ECP和多種細(xì)胞因子均有不同程度增高。在本研究當(dāng)中筆者也發(fā)現(xiàn)血清ECP水平顯著高于穩(wěn)定型和對照組，與國外報(bào)道一致[5-6]。這表明在哮喘急性發(fā)作期能顯著增強(qiáng)嗜酸性粒細(xì)胞的脫顆粒活性。Oymar等[5]發(fā)現(xiàn)哮喘急性發(fā)作期患兒體內(nèi)IL-5顯著增高，隨后分析嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)與IL-5相關(guān)性后發(fā)現(xiàn)其相關(guān)系數(shù)為0.541（P＜0.01）。而ECP與IL-5相關(guān)分析后發(fā)現(xiàn)，r=0.310（P＜0.01）。這表明哮喘急性發(fā)作期嗜酸性粒細(xì)胞的激活很大程度上是由IL-5介導(dǎo)的。

變異性喘息等相關(guān)過敏性炎癥反應(yīng)主要為Th2型免疫應(yīng)答。但Th1相關(guān)趨化因子IP-10是變異性肺遲發(fā)相過敏反應(yīng)的主要細(xì)胞因子。在本研究中也發(fā)現(xiàn)，急性發(fā)作期患兒血清IP-10也明顯高于穩(wěn)定型哮喘和對照組。有研究顯示血清IP-10在哮喘急性期增加，尤其是伴有鼻病毒感染患兒更常見。這也表明IP-10可能是鼻病毒感染所誘導(dǎo)的哮喘急性發(fā)作重要的標(biāo)志物。但其機(jī)制尚未明了。

糖皮質(zhì)激素治療是治療哮喘的有效藥物，然而有研究顯示吸入糖皮質(zhì)激素后，并不能改善鼻病毒引起的炎癥反應(yīng)。另一方面，口服糖皮質(zhì)激素能改善肺功能，并降低血清IL-6和可溶性ICAM-1以及ECP水平[7]。在本研究當(dāng)中，全身性激素治療后，血清ECP、IL-5、IP-10明顯降低，但對IL-10無明顯影響，這與其他研究結(jié)果一致[8]。與穩(wěn)定型哮喘比較，激素治療也能降低IL-5基因表達(dá)和血清ECP濃度。這表明全身性使用激素治療能通過抑制IL-5的產(chǎn)生而減低嗜酸性粒細(xì)胞活性。然而，由于本研究關(guān)于激素治療并非病例對照研究，因此其更詳細(xì)的效應(yīng)還有待進(jìn)一步研究。

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