崔廣智，金樹梅

芍藥的醇提物具有一定的抗抑郁作用，其中芍藥苷是其主要成分。本研究旨在初步探討芍藥苷的抗抑郁作用及其可能作用機(jī)制。采用小鼠強(qiáng)迫游泳實驗，觀察芍藥苷7 d連續(xù)給藥對小鼠不動時間的影響及對中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的作用[1]。

1 材料

1.1 藥品 芍藥苷（天津中新藥業(yè)中藥現(xiàn)代化技術(shù)工程中心提供，純度>80%）；鹽酸氯米帕明（諾華制藥公司產(chǎn)品，批號X0026）；去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）（購自 Sigma公司）；其余試劑為國產(chǎn)色譜純或分析純。

1.2 動物 雄性SPF級ICR小鼠，體質(zhì)量18～21 g[北京維通利華實驗動物中心提供，許可證編號SCXK（京）2007-0001]。飼養(yǎng)溫度為（23±1）℃，12 h人工循環(huán)光照（光照時間 7∶30-19∶30），自由攝食飲水。實驗前，于飼養(yǎng)環(huán)境中適應(yīng)1周。

1.3 儀器 1100高效液相色譜系統(tǒng)（美國Agilent公司）；DECADEⅡ電化學(xué)檢測器（荷蘭Antecleyden公司）；Allegra-64R高速離心機(jī)（美國貝克曼公司）；Waters C18色譜柱[（150 mm×4.6 mm，5 μm），美國Waters公司]；電子體溫計（美國強(qiáng)生公司）。

2 方法

2.1 小鼠強(qiáng)迫游泳實驗 按隨機(jī)數(shù)字表法將小鼠隨機(jī)分5組，每組12只。即對照組、鹽酸氯米帕明40 mg/kg組、芍藥苷 50、100和 200 mg/kg組，均按0.1 mL/10 g體質(zhì)量給藥。灌胃給藥，每日1次，連續(xù)1周。末次給藥1 h后將小鼠放入高20 cm、直徑10 cm的圓柱型玻璃缸中，每缸1只，水深10 cm，水溫25℃，觀察6 min，累計后4 min內(nèi)的不動時間[2]。

2.2 小鼠腦內(nèi)NE、DA、5-HT含量的測定 在末次給藥后8 h斷頭處死動物，在冰盤上剝離大腦，去掉小腦和嗅球，保留剩余的全腦組織。每小鼠腦組織精密稱質(zhì)量后加入1 mL的0.1 mol/L高氯酸（HClO4）溶液。冰浴條件下電動勻漿（10秒/次，數(shù)次）后，4℃12 000 r/min 離心 15 min，取上清液 20 μL，采用高效液相色譜-電化學(xué)法[3]測定大鼠腦內(nèi)NE、DA、5-HT的含量。

2.3 統(tǒng)計方法 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件分析，計量數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，組間比較用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 芍藥苷對強(qiáng)迫小鼠游泳不動時間的影響 見表1。

結(jié)果可見，給予動物氯米帕明40 mg/kg，芍藥苷100和200 mg/kg，可顯著縮短強(qiáng)迫游泳小鼠的不動時間（P<0.05和P<0.01),結(jié)果表明上述劑量芍藥苷具有抗抑郁作用。

表1 芍藥苷對小鼠游泳不動時間的影響(s)

表1 芍藥苷對小鼠游泳不動時間的影響(s)

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 劑量（mg/kg）不動時間（秒）對照組 12 - 148.3±34.6芍藥苷組 12 050 131.0±35.6 12 100 99.0±22.3*12 200 88.6±31.0**氯米帕明組 12 040 86.9±43.3*

3.2 芍藥苷對強(qiáng)迫游泳小鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì)的影響 見表2。

表2 芍藥苷對強(qiáng)迫游泳小鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量的影響（s，n=12）ng/g

表2 芍藥苷對強(qiáng)迫游泳小鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量的影響（s，n=12）ng/g

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 劑量（mg/kg）NE DA 5-HT對照組 - 151.36±30.92 65.75±14.21 110.53±23.90芍藥苷組 50 157.08±28.02 70.39±21.08 108.31±19.71 100 168.89±35.28 78.50±30.43 126.53±26.32 200 175.73±25.81*85.79±18.12**135.07±19.28*氯米帕明組 40 180.88±30.73*90.65±25.37**141.82±23.22**

結(jié)果表明，與對照組相比，芍藥苷200 mg/kg劑量組小鼠腦內(nèi)的NE、DA和5-HT的含量明顯升高（P<0.05或P<0.01）。氯米帕明組小鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì)的含量均明顯升高（P<0.05或P<0.01）。

4 討論

強(qiáng)迫游泳實驗（forced swimming test）是Porsolt等建立的一種評價抗抑郁劑的動物實驗[4]。該實驗利用動物不能逃逸出惡劣環(huán)境，導(dǎo)致動物行為絕望而設(shè)計出的一種模型。許多抗抑郁藥如三環(huán)類、四環(huán)類和單胺氧化酶抑制藥等均可明顯縮短動物的不動時間。此實驗簡便、可靠，廣泛用于抗抑郁藥的篩選和評價。本研究采用強(qiáng)迫游泳實驗考察芍藥苷的抗抑郁活性。在該實驗上，芍藥苷100、200 mg/kg組能不同程度縮短小鼠強(qiáng)迫性游泳的不動時間，與模型組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。其中,以高劑量組最為明顯,體現(xiàn)出較好的抗抑郁活性。

在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制研究中，腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)，如NA、5-HT和DA等功能不足，早已得到普遍公認(rèn)[4]。抑郁癥患者普遍存在5-HT、NE等功能低下，且在臨床上抗抑郁治療有效的藥物幾乎都能夠增加細(xì)胞突觸間隙5-HT和NE的水平，這些現(xiàn)象在一定程度上證明了抑郁癥“單胺類神經(jīng)遞質(zhì)”假說的合理性。在探討芍藥苷行為藥效學(xué)作用的基礎(chǔ)上,采用高效液相色譜法（HPLC）測定了芍藥苷對小鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量的影響。研究顯示，對照組小鼠腦內(nèi)NE、DA和5-HT等單胺遞質(zhì)含量明顯下降，芍藥苷連續(xù)給藥7 d可使小鼠腦內(nèi)的NE、DA和5-HT的含量明顯升高。提示芍藥苷具有一定增強(qiáng)單胺遞質(zhì)的作用。

[1]Mao Q,Huang Z,IP S,et al.Antidepressant-like effect of ethanol extract from Paeonia lactiflora in mice[J].Phytother Res,2008,22(11):1496-1499.

[2]Porsolt RD,Anton G,Blavet N,et al.Behavioural despair in rats:a new model sensitive to antidepressant treatments[J].Eur J Pharmacol,1978,47(4):379-391.

[3]張 瀟，張德芹.高效液相色譜-電化學(xué)法測定大鼠不同腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的方法學(xué)研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，11（6）：255－257.

[4]Prins J,Olivier B,Korte S M.Triple reuptake inhibitors for treatingsubtypesofmajordepressivedisorder:themonoamine hypothesis revisited[J].Expert opinion on investigational drugs,2011,20(8):1107-1130.