侯芳潔 李春花 陳琳

人參強(qiáng)心滴丸由人參、丹參、生地黃、蟾酥等四味中藥組成，主治慢性心功能不全。方中生地黃的有效成分是梓醇，但因梓醇是環(huán)稀醚萜苷類，其結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定而易被破環(huán)［1］。為確保人參強(qiáng)心滴丸的質(zhì)量，本試驗(yàn)以生地黃有效成分梓醇的含量為指標(biāo)，采用高效液相色譜法進(jìn)行測定，報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器 日本島津高效液相色譜系統(tǒng) SPD-10AVD，SPD-10A VP紫外檢測器，手動進(jìn)樣器，N2010色譜工作站(浙江大學(xué))，TD200/型電子天平(天津天平儀器有限公司)，TG328B型分析天平(上海精科儀器廠)，KQ-500DV型數(shù)控超聲清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)，DHG-9070A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)，1810-BC石英自動雙重純水蒸餾器(江蘇省金壇市白塔石英玻儀廠)。

1.2 試劑與藥品 乙腈(色譜純，德國Fisher Scientific，批號:061495-053786)，雙蒸水(自制)，梓醇對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110808-200508)。人參、丹參購自樂仁堂藥房，生地黃、蟾酥購于安國藥材市場，經(jīng)鑒定均符合2010版藥典規(guī)定，人參強(qiáng)心滴丸(本課題組自制，批號:20100301，20100302，20100303)。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件:色譜柱:Kromasil C18(4.6 ×200 mm，5 μm)柱，流動相:水-乙腈(99.5:0.5)，流速:1.0ml/min，檢測波長:210 nm，進(jìn)樣量:20 μl，柱溫:20℃。此條件下，梓醇保留時間在7.80min，梓醇色譜峰與其他色譜峰達(dá)到基線分離，且峰形穩(wěn)定。理論塔板數(shù):按梓醇峰計算不低于5000 。

1.3.2 對照品溶液的制備:精密稱取用五氧化二磷減壓干燥24 h的梓醇標(biāo)準(zhǔn)品10.12mg，置100ml容量瓶中，雙蒸水定容，溶解，備用。

1.3.3 供試品溶液制備:精密稱取人參強(qiáng)心滴丸4.00 g，研碎，加雙蒸水適量，超聲提取40min，待冷卻后定容至50ml。

1.3.4 陰性樣品溶液的制備:依處方比例，用人參、丹參和蟾酥三味藥材制備缺生地黃的滴丸，根據(jù)1.3.3項(xiàng)，制備陰性樣品溶液。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 精密吸取已制備好的對照品、供試品和陰性樣品溶液，照1.3.1項(xiàng)下色譜條件，各進(jìn)樣20 μl。結(jié)果表明，供試品與對照品溶液均在相同保留時間內(nèi)出現(xiàn)梓醇吸收峰，陰性對照品液在該處無吸收峰。見圖1～3。

圖1 梓醇標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 人參強(qiáng)心滴丸樣品色譜圖

圖3 人參強(qiáng)心滴丸陰性色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密移取對照品溶液1、2、4、6、8、10ml至10ml容量瓶中定容。將所配不同濃度溶液分別按色譜條件進(jìn)樣，測峰面積，并以梓醇的峰面積Y為縱坐標(biāo)對樣品濃度X(mg/ml)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:Y=4058433X+95959.7589(r=0.9996，n=6)。在上述色譜條件及 0.01012～0.1012mg/ml范圍內(nèi)，梓醇的峰面積(Y)與濃度(X，mg/ml)呈良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn) 取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，按上述色譜條件進(jìn)行檢測，測定梓醇峰面積，RSD為2.89%(n=5)，結(jié)果表明該方法精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取上述同一供試品液和對照品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h 取樣，按上述色譜條件測定峰面積，RSD 分別為1.20%和2.87%。該結(jié)果表明，供試品液和對照品溶液在12 h內(nèi)均穩(wěn)定。

2.5 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批次的人參強(qiáng)心滴丸4.00 g，按上述方法分別制備6份供試品溶液，進(jìn)行含量測定，樣品中梓醇含量的RSD為2.38%(n=6)。結(jié)果表明，該測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 稱取已知含量的同一批滴丸9份，3份為一組，按樣品含量的80%、100%、120%添加對照品，照供試品項(xiàng)下制備，測定，計算回收率。樣品的平均加樣回收率為99.04%，RSD 為1.69%(n=9)。見表1。

表1 人參強(qiáng)心滴丸加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.7 樣品含量測定 取三批人參強(qiáng)心滴丸(批號:20100301，20100302，20100303)，依法制成供試品液，每批2份，測定滴丸中梓醇的含量，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，人參強(qiáng)心滴丸中梓醇含量平均值為0.3704mg/g。見表2。

表2 人參強(qiáng)心滴丸中梓醇含量

3 討論

3.1 檢測波長和流動相的確定 將標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行紫外掃描，選擇其λmax作為檢測波長(210 nm)。劉海洋等［2］流動相為:水-乙腈(99∶1)，楊菁等［3］流動相為:0.1% 磷酸-乙腈(99∶1)，經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)選擇流動相為:水-乙腈(99.5∶0.5)，在該條件下梓醇峰能與其他峰基線分離，且保留時間較短(7.80min)，大大提高檢測效率。

3.2 梓醇含量的確定 人參強(qiáng)心滴丸的平均丸重為0.05 g，本實(shí)驗(yàn)以梓醇計平均含量為0.3704mg/g?？紤]到藥材來源、生產(chǎn)損耗、儲存等因素的影響，按平均值的80%計算，暫定本品每丸梓醇含量不小于0.0148mg/丸。

1 王宏潔，邊寶林，楊健.地黃中梓醇變化條件的探討.中國中藥雜志，1997，22:408.

2 劉海洋，李冀，雷勇，等.地黃中梓醇的含量測定及其提取分離工藝研究.中醫(yī)藥信息，2010，27:87-88.

3 楊菁，劉影，白劍，等.生地黃中梓醇純化工藝優(yōu)選.中成藥，2010，32:416-417.