侯芳潔 李春花 陳琳
人參強(qiáng)心滴丸由人參、丹參、生地黃、蟾酥等四味中藥組成,主治慢性心功能不全。方中生地黃的有效成分是梓醇,但因梓醇是環(huán)稀醚萜苷類,其結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定而易被破環(huán)[1]。為確保人參強(qiáng)心滴丸的質(zhì)量,本試驗(yàn)以生地黃有效成分梓醇的含量為指標(biāo),采用高效液相色譜法進(jìn)行測定,報告如下。
1.1 儀器 日本島津高效液相色譜系統(tǒng) SPD-10AVD,SPD-10A VP紫外檢測器,手動進(jìn)樣器,N2010色譜工作站(浙江大學(xué)),TD200/型電子天平(天津天平儀器有限公司),TG328B型分析天平(上海精科儀器廠),KQ-500DV型數(shù)控超聲清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司),DHG-9070A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司),1810-BC石英自動雙重純水蒸餾器(江蘇省金壇市白塔石英玻儀廠)。
1.2 試劑與藥品 乙腈(色譜純,德國Fisher Scientific,批號:061495-053786),雙蒸水(自制),梓醇對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110808-200508)。人參、丹參購自樂仁堂藥房,生地黃、蟾酥購于安國藥材市場,經(jīng)鑒定均符合2010版藥典規(guī)定,人參強(qiáng)心滴丸(本課題組自制,批號:20100301,20100302,20100303)。
1.3 方法
1.3.1 色譜條件:色譜柱:Kromasil C18(4.6 ×200 mm,5 μm)柱,流動相:水-乙腈(99.5:0.5),流速:1.0ml/min,檢測波長:210 nm,進(jìn)樣量:20 μl,柱溫:20℃。此條件下,梓醇保留時間在7.80min,梓醇色譜峰與其他色譜峰達(dá)到基線分離,且峰形穩(wěn)定。理論塔板數(shù):按梓醇峰計算不低于5000 。
1.3.2 對照品溶液的制備:精密稱取用五氧化二磷減壓干燥24 h的梓醇標(biāo)準(zhǔn)品10.12mg,置100ml容量瓶中,雙蒸水定容,溶解,備用。
1.3.3 供試品溶液制備:精密稱取人參強(qiáng)心滴丸4.00 g,研碎,加雙蒸水適量,超聲提取40min,待冷卻后定容至50ml。
1.3.4 陰性樣品溶液的制備:依處方比例,用人參、丹參和蟾酥三味藥材制備缺生地黃的滴丸,根據(jù)1.3.3項(xiàng),制備陰性樣品溶液。
2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 精密吸取已制備好的對照品、供試品和陰性樣品溶液,照1.3.1項(xiàng)下色譜條件,各進(jìn)樣20 μl。結(jié)果表明,供試品與對照品溶液均在相同保留時間內(nèi)出現(xiàn)梓醇吸收峰,陰性對照品液在該處無吸收峰。見圖1~3。
圖1 梓醇標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖
圖2 人參強(qiáng)心滴丸樣品色譜圖
圖3 人參強(qiáng)心滴丸陰性色譜圖
2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密移取對照品溶液1、2、4、6、8、10ml至10ml容量瓶中定容。將所配不同濃度溶液分別按色譜條件進(jìn)樣,測峰面積,并以梓醇的峰面積Y為縱坐標(biāo)對樣品濃度X(mg/ml)進(jìn)行回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:Y=4058433X+95959.7589(r=0.9996,n=6)。在上述色譜條件及 0.01012~0.1012mg/ml范圍內(nèi),梓醇的峰面積(Y)與濃度(X,mg/ml)呈良好的線性關(guān)系。
2.3 精密度實(shí)驗(yàn) 取對照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,按上述色譜條件進(jìn)行檢測,測定梓醇峰面積,RSD為2.89%(n=5),結(jié)果表明該方法精密度良好。
2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取上述同一供試品液和對照品溶液,分別于0、2、4、6、8、12 h 取樣,按上述色譜條件測定峰面積,RSD 分別為1.20%和2.87%。該結(jié)果表明,供試品液和對照品溶液在12 h內(nèi)均穩(wěn)定。
2.5 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批次的人參強(qiáng)心滴丸4.00 g,按上述方法分別制備6份供試品溶液,進(jìn)行含量測定,樣品中梓醇含量的RSD為2.38%(n=6)。結(jié)果表明,該測定方法的重現(xiàn)性良好。
2.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 稱取已知含量的同一批滴丸9份,3份為一組,按樣品含量的80%、100%、120%添加對照品,照供試品項(xiàng)下制備,測定,計算回收率。樣品的平均加樣回收率為99.04%,RSD 為1.69%(n=9)。見表1。
表1 人參強(qiáng)心滴丸加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.7 樣品含量測定 取三批人參強(qiáng)心滴丸(批號:20100301,20100302,20100303),依法制成供試品液,每批2份,測定滴丸中梓醇的含量,由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,人參強(qiáng)心滴丸中梓醇含量平均值為0.3704mg/g。見表2。
表2 人參強(qiáng)心滴丸中梓醇含量
3.1 檢測波長和流動相的確定 將標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行紫外掃描,選擇其λmax作為檢測波長(210 nm)。劉海洋等[2]流動相為:水-乙腈(99∶1),楊菁等[3]流動相為:0.1% 磷酸-乙腈(99∶1),經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn),本實(shí)驗(yàn)選擇流動相為:水-乙腈(99.5∶0.5),在該條件下梓醇峰能與其他峰基線分離,且保留時間較短(7.80min),大大提高檢測效率。
3.2 梓醇含量的確定 人參強(qiáng)心滴丸的平均丸重為0.05 g,本實(shí)驗(yàn)以梓醇計平均含量為0.3704mg/g??紤]到藥材來源、生產(chǎn)損耗、儲存等因素的影響,按平均值的80%計算,暫定本品每丸梓醇含量不小于0.0148mg/丸。
1 王宏潔,邊寶林,楊健.地黃中梓醇變化條件的探討.中國中藥雜志,1997,22:408.
2 劉海洋,李冀,雷勇,等.地黃中梓醇的含量測定及其提取分離工藝研究.中醫(yī)藥信息,2010,27:87-88.
3 楊菁,劉影,白劍,等.生地黃中梓醇純化工藝優(yōu)選.中成藥,2010,32:416-417.