謝 艷 朱太詠 秦 娜

（河南省正骨研究院，河南省洛陽(yáng)市啟明南路82號(hào)，471002）

中藥研究

益氣生骨顆粒劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

謝 艷 朱太詠 秦 娜

（河南省正骨研究院，河南省洛陽(yáng)市啟明南路82號(hào)，471002）

益氣生骨顆粒劑；薄層色譜鑒別

益氣生骨顆粒劑是我院的一項(xiàng)新藥開發(fā)制劑。本方由黃芪、黨參、木香、紅花、赤芍等中藥組成，具有益氣生骨，去瘀生新，通脈止痛的作用，用于嚴(yán)重跌打損傷、創(chuàng)傷性骨折。為了有效地控制其產(chǎn)品質(zhì)量，本課題采用薄層色譜法對(duì)方中黃芪、木香、紅花及赤芍進(jìn)行了定性鑒別，對(duì)黃芪甲苷的含量進(jìn)行了測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 日本島津CS-9301型薄層掃描儀。

1.2 對(duì)照品及對(duì)照藥材 黃芪甲苷、芍藥苷均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，木香、紅花對(duì)照藥材由我院藥劑科提供。

1.3 試劑與樣品 化學(xué)試劑均為分析純，益氣生骨顆

粒劑及各味藥的陰性對(duì)照樣品均由我院制劑科提供。

2 定性鑒別

2.1 木香的鑒別 取9g顆粒劑，用30mL水溶解，用乙醚萃取兩次（30mL，20mL），取乙醚層，加入4% NaOH溶液40mL洗滌，乙醚液加入無(wú)水硫酸鈉2g，振搖，濾過(guò)，殘?jiān)靡颐?0mL分兩次洗滌，濾液與洗滌液合并，揮干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取木香藥材1g，加水提取1h，同法制成對(duì)照藥材溶液。取木香陰性藥液，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述木香藥材對(duì)照溶液1μL，供試品和陰性對(duì)照溶液各6μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。噴以5%香草醛硫酸液顯色，電吹風(fēng)吹至顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)此斑點(diǎn)。

2.2 紅花的鑒別 取顆粒9g，用水飽和的正丁醇提取3次，每次15mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，加入已處理好的中性氧化鋁柱上（100 -200目，2g，內(nèi)徑1.5cm），以甲醇10mL洗脫，收集洗脫液，揮干，殘?jiān)?mL甲醇溶解為供試品溶液。另取紅花對(duì)照藥材1g，加水煎煮1h，上清液同法制成對(duì)照藥材溶液。取紅花陰性制劑同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲苯-甲醇（75∶25∶5）為展開劑，單向展開兩次，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇液，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)此斑點(diǎn)。

2.3 赤芍的鑒別 稱取9g顆粒，加氯仿20mL，超聲處理20min，棄去濾液，藥渣加70%乙醇30mL，超聲處理20min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次（30mL，30mL，30mL），合并正丁醇液，蒸至少量。上中性氧化鋁柱（100-200目，內(nèi)徑10～15mm，4g）用乙醇-乙酸乙酯（1∶1）30mL預(yù)洗，繼以甲醇40mL洗脫，收集洗脫液，蒸干。殘?jiān)蛹状?mL使溶解為供試品。取芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品制成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。另取赤芍陰性制劑同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液2μL，供試品和陰性對(duì)照溶液各8μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，電吹風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)此斑點(diǎn)。

3 黃芪甲苷的含量測(cè)定

3.1 對(duì)照品溶液的制備 取黃芪甲苷對(duì)照品精密稱定2.25mg，置2mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得1.125mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3.2 供試品溶液的制備 取本品12g，研細(xì)。置具塞錐形瓶中，精密加入水60mL溶解，稱重，超聲提取30min，放冷，稱重，加水補(bǔ)足減失重量，離心，將上清液轉(zhuǎn)出。精密吸取濾液45mL，用乙醚提取3次，每次20mL，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，用1%NaOH洗滌2次，每次30mL，再用飽和正丁醇的水洗至中性，正丁醇液水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

3.3 陰性對(duì)照液的制備 取陰性對(duì)照顆粒，同法做成陰性制備液。

3.4 色譜條件 層析板為硅膠G板。展開劑：氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展距10cm。顯色劑為10%硫酸乙醇溶液。

3.5 掃描參數(shù) 采用單波長(zhǎng)反射鋸齒形掃描法，測(cè)定波長(zhǎng)λs=520nm。光束狹縫：0.4×0.4mm，線性參數(shù)SX=3。

3.6 線性關(guān)系的考察 精密吸取濃度為每1mL含1.125mg的黃芪甲苷對(duì)照品溶液1，2，3，4，5，6μL，分別點(diǎn)于同一薄層板上，展開，顯色，按上述色譜條件測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=648.26X+108.1，r=0.995（n=6），表明黃芪甲苷在1.125～6.75μg濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

3.7 精密度試驗(yàn) 儀器精密度實(shí)驗(yàn)：對(duì)薄層板上同一斑點(diǎn)連續(xù)掃描8次，平均峰面積積分值為2781.1，RSD =1.9%。同板精密度實(shí)驗(yàn)：取同一濃度的黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液6份各4μL，分別點(diǎn)于同一薄層板上，展開，取出，晾干，顯色后依法操作，薄層掃描測(cè)定吸光度峰面積積分值，平均峰面積積分值為3337.9，RSD= 2.06%。異板精密度實(shí)驗(yàn)：取同一黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，上樣3μL，分別點(diǎn)于5塊薄層板上，依法測(cè)定，平均峰面積積分值為2035.7，RSD=1.98%。

3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液點(diǎn)樣，依法操作，對(duì)同一斑點(diǎn)每隔20min掃描1次，記錄峰面積積分值，結(jié)果表明在2h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD=1.65%。

3.9 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品5份，按上述測(cè)定條件重復(fù)測(cè)定5次，平均含量為0.66mg/袋，RSD= 2.6%。

3.10 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，精密稱取已知含量的益氣生骨顆粒，樣品6份，分別精密添加黃芪甲苷對(duì)照品溶液（1.125mg/mL）100μL，按上述方法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.38%，RSD= 2.3%。結(jié)果見表1。

3.11 樣品測(cè)定 精密吸取供試品溶液6μL，對(duì)照品溶液2μL和4μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，依法展開和測(cè)定。共測(cè)定樣品5批，結(jié)果見表2。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表2 含量測(cè)定結(jié)果 （n=5）

4 討論

其中木香的鑒別中NaOH提取時(shí)要充分分離，才可以取乙醚層。黃芪甲苷含量測(cè)定時(shí)，在樣品的制備過(guò)程中，以前有報(bào)道用水飽和的正丁醇提取后，用氨水提取，與黃芪甲苷緊鄰的上方有一紅色干擾。需上中性氧化鋁柱才能除去，此方法可以省去這一步。

［1］倪艷，劉霞，李先榮，等.男康片的薄層色譜鑒別研究.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2002，13（7）：409.

［2］陳家進(jìn)，劉俊怡，蘇娟，等.復(fù)方益芪顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.中成藥，2005，27（2）：167.

（2010-09-13收稿）

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