凌曉午，曾強武，安邦權(quán)△，周湘紅，許 筑，孫 輝，譚 燕，李鳳宇

（1.貴州省人民醫(yī)院檢驗科，貴陽550002；2.貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗科，貴陽550002；3.貴陽醫(yī)學(xué)院檢驗系，貴陽550004；4.遵義醫(yī)學(xué)院檢驗系，貴州遵義863003）

陰道病為女性多發(fā)?。?］，分特異性和非特異性陰道炎，多由真菌、加德納菌、滴蟲引起。在臨床上，3者所導(dǎo)致的炎癥癥狀及白帶性狀無太大差別，但在治療方面卻差異明顯，所以為能更好地治療患者，對其病因的準確檢測非常重要。國內(nèi)多用簡便、快速的懸?。衿┓z查滴蟲、真菌等，但漏診率高、檢出率低，且不利于建立質(zhì)控［2］。采用瑞氏染色法雖耗時稍長，但便于建立質(zhì)控以提高準確性。本文采用懸浮法、瑞氏染色法對396份陰道分泌物標(biāo)本同時進行鏡檢，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 2009年8月6日至10月25日在貴州省人民醫(yī)院婦科門診就診的患者，共396例，年齡6～81歲，取陰道或?qū)m頸分泌物。

1.2儀器與試劑 日產(chǎn)OLYMPUS普通光學(xué)顯微鏡。生理鹽水和2.5mol/L KOH 溶液（KOH 140g溶于1 000mL蒸餾水中）自制。瑞氏染液為重慶醫(yī)學(xué)檢驗試劑研究所生產(chǎn)。

1.3方法 將采集的陰道分泌物制成一張厚薄均勻的大小為（1.0～2.0）cm×（2.0～4.0）cm的涂片，自然干燥后進行瑞氏染色，剩余標(biāo)本用于懸浮法檢查。瑞氏染色嚴格按試劑使用說明操作，懸浮法嚴格按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》［3］進行操作。

1.3.1瑞氏染色法 （1）清潔度檢查：參照《全國臨床檢驗標(biāo)準操作規(guī)程》標(biāo)準［3］并結(jié)合實際工作進行判斷（表1）。其中“－”即陰性表示50個高倍視野（細胞內(nèi)腎形雙球菌即淋球菌以油鏡為準）以上未發(fā)現(xiàn)陰道桿菌、其他桿菌、球桿菌、球菌、上皮細胞或有關(guān)病原體（如滴蟲、真菌、線索細胞）等有形成分，白細胞（主要為中性粒細胞）偶見或0～5個/HP；“＋”即少量表示約1/3以下視野發(fā)現(xiàn)其有形成分，中性粒細胞5～15個/HP；“＋＋”即中量表示約1/2視野發(fā)現(xiàn)其有形成分，中性粒細胞15～30個/HP；“＋＋＋”即多量表示約2/3以上視野發(fā)現(xiàn)有形成分，中性粒細胞多于30個/HP；“＋＋＋＋”即大量表示幾乎滿視野發(fā)現(xiàn)其有形成分、中性粒細胞等。介于兩者如少量至中等量之間則報告“＋～＋＋”，包括清潔度類推可報Ⅰ～Ⅱ、Ⅱ～Ⅲ、Ⅲ～Ⅳ等。（2）病原體檢查：取瑞氏染色標(biāo)本片，先低倍鏡粗掃，見梨形、圓形、橢圓形或不規(guī)則形疑為滴蟲者，再高倍鏡細查，必要時換油鏡仔細辨認，具有整個胞體似粒細胞等大或為其2倍、胞漿均勻淡藍、核小橢圓紫色、有的可見鞭毛等特征為滴蟲［2－3］。同時在高倍鏡和油鏡下查找真菌和可疑淋球菌。（3）線索細胞檢查：線索細胞為鱗狀上皮細胞覆蓋大量的藍色小短桿菌或球桿菌，上皮細胞表面粗糙、混濁、透明度減低，出現(xiàn)斑點核、大量細小顆粒，核模糊不清，細胞邊緣常呈鋸齒狀，甚至細胞趨向溶解或已溶解，背景以球桿菌為主，乳酸桿菌很少或缺如。

表1 清潔度判斷標(biāo)準

1.3.2懸浮法 （1）清潔度檢查：與瑞氏法相同。（2）病原體檢查：取陰道分泌物涂于玻片上生理鹽水中，低倍鏡下觀察，可見波狀或螺旋狀運動的蟲體將周圍白細胞或上皮細胞推動，在高倍鏡下可見蟲體呈頂寬尾尖倒置梨形，大小約為白細胞的1～2倍者為滴蟲。取陰道分泌物涂于玻片上10%KOH溶液中，顯微鏡下查見菌球、芽孢及假菌絲者為真菌。（3）線索細胞檢查：與瑞氏法相同。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS11.0處理，通過χ2檢驗進行數(shù)據(jù)處理。其中，檢測項目陽性率為“該方法該項目陽性例數(shù)÷總例數(shù)（396）×100%”；清潔度只統(tǒng)計Ⅲ～Ⅳ度（異常）標(biāo)本例數(shù)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

396例婦科門診患者陰道分泌物懸浮法、瑞氏染色法同時進行鏡檢結(jié)果見表2，經(jīng)χ2檢驗，瑞氏染色法清潔度（Ⅲ～Ⅳ）、真菌、線索細胞陽性率均明顯高于懸浮法（P＜0.05），兩法滴蟲檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。兩法均未發(fā)現(xiàn)可疑腫瘤細胞。瑞氏染色法發(fā)現(xiàn)中性粒細胞內(nèi)腎形相對雙球菌3例，經(jīng)革蘭染色檢查為陰性雙球菌。

表2 瑞氏染色法與懸浮法檢測陽性率對比［n（%）］

3 討 論

真菌、滴蟲及細菌性陰道病是婦科常見病、多發(fā)病。國內(nèi)統(tǒng)計不同人群細菌性陰道病的患病率為11.0%～46.0%，真菌、滴蟲感染率因時間、地點、人群、生活水平、檢測方法等不同而出入較大［4－8］。由于患者臨床表現(xiàn)和陰道分泌物性狀常無明顯區(qū)別，但在治療上及引起的后果均存在差異［9］，所以檢驗人員及時準確發(fā)出白帶常規(guī)報告對臨床診治患者尤其重要。

本研究發(fā)現(xiàn)雖然懸浮法簡便、快速、易掌握、對鮮活滴蟲檢查有優(yōu)勢而被常用，但其檢出陰道分泌物清潔度（Ⅲ～Ⅳ）、滴蟲、真菌、線索細胞陽性率（60.10%，5.56%，25.51%，21.97%）低于瑞氏染色法（70.70%，5.81%，32.32%，29.04%），尤其清潔度、真菌、線索細胞的陽性檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)懸浮法可因?qū)嶒炇疑睇}水污染（真菌、滴蟲等）、標(biāo)本中粗大球桿菌及患者婦科用藥后的藥物殘渣等的影響而出現(xiàn)其假陽性；還可能因生理鹽水對標(biāo)本的稀釋作用、細胞或雜物的掩蓋導(dǎo)致在視野下未發(fā)現(xiàn)病原體，或冬春季無保溫措施下查滴蟲等而出現(xiàn)其假陰性。國外學(xué)者也認為生理鹽水涂片法因人為影響，檢驗結(jié)果離散度極大，準確性和重復(fù)性較差，不能客觀反映真實情況，嚴重制約了相關(guān)臨床疾病的診治［10］。進一步證明瑞氏染色法替代懸浮法可以提高陰道分泌物檢測準確性，有利于患者早日康復(fù)。

本研究分析396例陰道分泌物中，瑞氏染色法發(fā)現(xiàn)中性粒細胞內(nèi)腎形相對雙球菌3例，經(jīng)革蘭染色檢查為陰性雙球菌，可能是淋球菌，因（包括可疑腫瘤細胞）例數(shù)太少，懸浮法無法檢測而未行單獨統(tǒng)計。但對腎形相對雙球菌陽性標(biāo)本，建議有條件的實驗室進一步做細菌培養(yǎng)與藥敏試驗以確診，瑞氏染色法對淋球菌檢查只有篩選作用［11－12］。

瑞氏染色法操作步驟少、用時短、費用低、查滴蟲時更易識別其形態(tài)，可觀察有無惡性細胞，發(fā)現(xiàn)可疑淋球菌時加做操作步驟和用時稍多的革蘭染色，兩法結(jié)果一致報告之更能保證其檢測質(zhì)量。尤其針對懸浮法而言，瑞氏染色法有如下優(yōu)點：一張涂片多項目檢查；冬春季節(jié)查滴蟲時不受保溫措施的限制；涂片送到實驗室即可染色鏡檢，做到隨到隨查方便了患者；標(biāo)本染色后病原體基本被消滅，大大降低了環(huán)境污染［2］；染色標(biāo)本可較長時間保存以便復(fù)查監(jiān)督質(zhì)量；另外還可挑選染色良好、病原體典型的標(biāo)本作為教學(xué)片及送往各家醫(yī)院臨檢室進行交流，以提高對清潔度、滴蟲、真菌、線索細胞等整體檢驗水平。

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