趙樂萍，林蒙蒙，邵 拓，潘建春

(1.溫州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，浙江 溫州 325035;2.溫州醫(yī)學(xué)院附屬樂清醫(yī)院藥劑科，浙江 溫州 325600)

白藜蘆醇(resveratrol，REV)是一種多酚類化合物，是虎杖的主要化合物，也富含于紅葡萄皮及紅酒中;為脂溶性物質(zhì)，易通過血腦屏障，具抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老，預(yù)防神經(jīng)退行性疾病等作用，傳統(tǒng)中醫(yī)中用于精神緊張和躁狂-抑郁癥等疾病的治療，因此獲得廣泛關(guān)注［1-4］。胡椒堿(piperine，PIP)是“香料之王”胡椒的主要活性化學(xué)物質(zhì)，具抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等作用，對慢性應(yīng)激誘導(dǎo)的下丘腦-垂體-腎上腺軸(hypothalamic-pituitary-adrenal axis，HPA 軸)功能失調(diào)也有一定的調(diào)節(jié)作用。同時(shí)PIP是一種生物活性增強(qiáng)劑，與多酚類化合物合用時(shí)可明顯提高多酚類化合物的生物利用度，使低劑量的多酚類化合物表現(xiàn)出較強(qiáng)的藥理活性［5］。前期研究顯示，REV具抗抑郁作用，其機(jī)制涉及5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)系統(tǒng)［6］;有研究指出PIP具有較強(qiáng)的抗抑郁活性，其機(jī)制可能與腦單胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)活性有關(guān)［7］。此外，胡園等［8］認(rèn)為，PIP 抗抑郁作用可能與其對HPA軸的影響有關(guān)。

慢性應(yīng)激模型可模擬環(huán)境誘因，使動(dòng)物出現(xiàn)與抑郁癥患者相似的行為及生理學(xué)改變，是近年應(yīng)用最廣泛的抑郁動(dòng)物模型之一［9］。開野實(shí)驗(yàn)及穿梭箱實(shí)驗(yàn)是較經(jīng)典的抑郁行為學(xué)模型，常用于檢驗(yàn)和篩選抗抑郁藥物。此外，動(dòng)物穿梭箱實(shí)驗(yàn)中的行為缺失與HPA軸功能障礙相關(guān)［10］。

當(dāng)機(jī)體長期處于應(yīng)激狀態(tài)，HPA軸功能持續(xù)亢進(jìn)，其負(fù)反饋調(diào)節(jié)功能被抑制，機(jī)體就會(huì)出現(xiàn)抑郁癥狀。單胺遞質(zhì)神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是5-HT系統(tǒng)，是臨床抗抑郁藥物的主要作用機(jī)制。5-HT等遞質(zhì)減少時(shí)，下丘腦促腎上腺皮質(zhì)釋放因子的釋放減少，HPA軸功能降低，容易出現(xiàn)抑郁、自殺、各種慢性疼痛、強(qiáng)迫行為和焦慮驚恐發(fā)作等;而HPA軸亢進(jìn)時(shí)，可促使皮質(zhì)醇升高能誘導(dǎo)肝產(chǎn)生色氨酸吡咯化酶，降解血液中的色氨酸。色氨酸是5-HT的前體，其降低可導(dǎo)致5-HT合成不足［11-12］，從而引起抑郁癥及其相關(guān)癥狀。此外，皮質(zhì)類固醇可通過影響糖皮質(zhì)激素受體和鹽皮質(zhì)激素受體的比例來調(diào)節(jié)5-HT的功能［13］。

本研究首先比較了反式REV單用及與低劑量PIP 2.5 mg·kg-1合用在慢性應(yīng)激大鼠穿梭箱實(shí)驗(yàn)中的藥理學(xué)作用。然后采用開野實(shí)驗(yàn)及穿梭箱實(shí)驗(yàn)觀察REV合用PIP后的抗抑郁作用，神經(jīng)化學(xué)分析法檢測下丘腦中單胺類物質(zhì)水平及MAO活性，檢測血清皮質(zhì)酮含量，探討反式REV與PIP合用的抗慢性抑郁作用機(jī)制是否涉及HPA軸。

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑

反式 REV、PIP、氟西汀(fluoxetine，F(xiàn)LU)、二氫溴犬脲胺(kynuramine dihydrobromide)、4-氫喹啉(4-hydroquinoline)、司立吉林(selegiline;MAO-B抑制劑)、氯吉林(clorgiline;MAO-A 抑制劑)、5-HT、去甲腎上腺素 (norepinephrine，NE)、多巴胺(dopamine，DA)、5-羥 吲 哚 乙 酸 (5-hydroxyindoleacetic acid，5-HIAA)和二羥苯乙酸(dihydroxy-phenyl acetic acid，DOPAC)均購自美國Sigma公司。嗎氯貝胺(moclobemide，MAO-A特異性抑制劑)和羧甲纖維素鈉(carboxymethyl cellulose sodium)由中國藥品生物制品檢定所。皮質(zhì)酮試劑盒購自R＆D公司。反式REV和PIP溶于0.5%羧甲纖維素鈉。嗎氯貝胺和氟西汀溶于雙蒸水。預(yù)實(shí)驗(yàn)中，0.5%羧甲纖維素鈉和雙蒸水對大鼠行為學(xué)結(jié)果的影響沒有明顯差異。因此，正式實(shí)驗(yàn)選擇0.5%羧甲纖維素鈉作為空白對照。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

WH-966漩渦混合器，太倉市科教器材廠;動(dòng)物行為學(xué)分析系統(tǒng)，上海吉量軟件科技有限公司;BS-11OS型電子分析天平，北京賽多利斯天平有限公司;DY89-Ⅱ型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司;JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司;64R超速冷凍離心機(jī)，Beckman Coulter公司;超低溫保存箱，海爾公司;970CRT型熒光分光光度計(jì):美國PerkinElmer公司;Bio-Rad 680酶標(biāo)儀，美國伯樂公司;Agilent 1100高效液相儀，美國Agilent公司;ANTEC電化學(xué)檢測器，荷蘭安泰克公司;Anke 80-2C臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.3 動(dòng)物分組和慢性應(yīng)激模型的制備［14］

雄性SD大鼠，二級，體質(zhì)量200～250 g，購自溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心〔SYXK(浙2010-0150)〕，室溫21℃ ～23℃，濕度40% ～60%，自然光照，自由攝食飲水。所有大鼠先于飼養(yǎng)環(huán)境中適應(yīng)5 d。大鼠隨機(jī)分組，每組8只:即正常對照組，模型組，REV 5，10，20，40，80 mg·kg-1(ig)組，PIP 2.5 mg·kg-1(ip)+反式 REV 2.5，5，10，20，40 mg·kg-1(ig)組，F(xiàn)LU 10 mg·kg-1(ig)組和嗎氯貝胺 20 mg·kg-1(ig)組。嗎氯貝胺組用于MAO活性的測定，除正常對照組和嗎氯貝胺組外，其余各組大鼠均進(jìn)行造模，即每天給予大鼠1～2種應(yīng)激，包括禁食24 h，禁水24 h，室溫強(qiáng)迫游泳15 min，過夜光照(36 h)，傾斜45°，換籠孤養(yǎng)24 h，束縛6 h等。造模期間按照分組給予相應(yīng)藥物，正常對照組和模型組給予0.5%羧甲纖維素鈉，連續(xù)21 d。第22天進(jìn)行行為學(xué)檢測(開野和穿梭實(shí)驗(yàn))，檢測前禁食12～16 h，飲水自由。行為學(xué)結(jié)束后處死大鼠，取全血5～10 ml，室溫放置20 min后1000×g離心10 min，取血清，-20℃凍存?zhèn)溆?分離大鼠腎上腺，稱重并計(jì)算腎上腺指數(shù)，即腎上腺與大鼠體質(zhì)量的比值(mg·kg-1);分離大鼠下丘腦，稱重并置-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 大鼠開野實(shí)驗(yàn)［15］

正方形開野實(shí)驗(yàn)箱為80 cm×80 cm×75 cm，底板用筆畫成10 cm×10 cm的方格，其正上方距離底板90 cm高處有一60 W白熾燈泡。測試時(shí)將大鼠置于開野箱中央，適應(yīng)5 min，隨后觀察10 min內(nèi)大鼠爬格次數(shù)、探究次數(shù)(兩前肢離地1 cm以上的次數(shù))、理毛次數(shù)和糞便粒數(shù)。

1.5 穿梭箱實(shí)驗(yàn)記錄逃避失敗次數(shù)［16］

將大鼠置于穿梭箱的一端，適應(yīng)測試環(huán)境3 min。然后進(jìn)行30次回避實(shí)驗(yàn):每次實(shí)驗(yàn)前4 s均出現(xiàn)噪聲及光照信號，若此期間無回避反應(yīng)發(fā)生，大鼠將受到0.8 mA足部電擊;若電擊4 s后仍然無逃避反應(yīng)發(fā)生，則電擊和光照信號將終止。記錄大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中逃避失敗次數(shù)，即電擊出現(xiàn)4 s期間大鼠未到達(dá)另一端箱子的次數(shù)。逃避失敗次數(shù)抑制率(%)=(模型組逃避失敗次數(shù)-藥物組逃避失敗次數(shù))/模型組逃避失敗次數(shù)×100%，并采用Logit法計(jì)算ED50。

1.6 高效液相電化學(xué)法(HPLC-ECD)測定大鼠下丘腦單胺遞質(zhì)水平［17］

每100 mg腦組織中加入200 μl冰冷 A液(HClO40.4 mol·L-1)，冰浴中超聲勻漿，4℃ 避光靜置60 min，離心20 min(4500 × g，4℃)，取上清液，加入半量體積的B液(檸檬酸鉀0.2 mol·L-1，K2HPO40.3 mol·L-1和 EDTA 0.2 mol·L-1)，渦漩混勻 10 min，4℃避光靜置60 min，再次離心(4500 ×g，4℃)，取上清液過濾，HPLC-ECD測定其單胺遞質(zhì)水平。取20 μl自動(dòng)進(jìn)樣，色譜柱為Diamonsilim C18(長150 mm×內(nèi)徑4.6 mm，粒度5 μm)，流動(dòng)相組成:枸櫞酸-檸檬酸鈉緩沖液125 mmol·L-1(pH=4.3)，EDTA 0.1 mmol·L-1，辛烷基磺酸鈉 1.2 mmol·L-1，16% 甲醇。流速:1.0 ml·min-1。檢測器工作電壓分別為:50，100，200，300，400和500 mV。單胺及其代謝產(chǎn)物的含量以ng·g-1濕組織表示。

1.7 熒光分光光度法測定大鼠下丘腦單胺氧化酶活性

根據(jù)小鼠的檢測方法［18］進(jìn)行適度改良。分離出的腦組織稱重后加入冰冷磷酸緩沖液(pH=7.8，0.05 mol·L-1)2 ml制成勻漿液。然后在 2.5 ml磷酸緩沖液中加入0.4 ml 20%Triton和0.2 ml組織勻漿液，混勻后預(yù)孵育(37℃，10 min)，加入 1 μmol·L-1的司立吉林(MAO-B抑制劑)或氯吉林(MAO-A抑制劑)抑制相應(yīng)的 MAO，再加入 30 μl終濃度為22 μmol·L-1的底物，37℃孵育 30 min，反應(yīng)液中加入0.2 ml高氯酸 5 mol·L-1溶液終止反應(yīng)，冷卻并離心(1500 × g，10 min)，取上清液0.5 ml，加入2.5 ml氫氧化鈉 1 mol·L-1。通過熒光分光光度計(jì)在激發(fā)光318 nm，發(fā)射光380 nm處測定產(chǎn)物4-氫喹啉的熒光強(qiáng)度。MAO活性以nmol·g-1蛋白表示。采用Bradford法測定蛋白含量。該實(shí)驗(yàn)中用MAO-A特異性抑制劑嗎氯貝胺做為檢測藥物對MAO-A抑制功效的陽性對照藥。檢測當(dāng)天，嗎氯貝胺組大鼠ig給予嗎氯貝胺20 mg·kg-1，并在1 h后處死大鼠取下丘腦，檢測MAO活性。

1.8 雙抗體夾心ELISA法檢測血清皮質(zhì)酮水平

依照試劑盒說明書操作，即先將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品用樣品稀釋液倍比稀釋，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后將標(biāo)準(zhǔn)品與血清樣品加入包被有抗大鼠皮質(zhì)酮單抗的酶標(biāo)板上，每孔 100 μl，混勻，37℃孵育 2 h，使標(biāo)準(zhǔn)品與血清樣品中的皮質(zhì)酮與抗體充分結(jié)合;去液并甩干，加入生物素化的抗大鼠皮質(zhì)酮抗體，每孔100 μl，混勻，37℃孵育 1 h，形成連接與板上的免疫復(fù)合物;去液并甩干，洗板3次，甩干，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗生鏈親和素(streptavidin)，每孔100 μl，混勻，37℃孵育 1 h;去液并甩干，洗板 5 次，甩干，然后每孔加入酶底物90 μl，37℃避光顯色至標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度藍(lán)色(15～30 min)，每孔加50 μl硫酸 2 mol·L-1終止，顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，在450 nm處測吸光度(A)值，皮質(zhì)酮濃度與A值成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中皮質(zhì)酮濃度。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 反式白藜蘆醇及與胡椒堿聯(lián)用對應(yīng)激大鼠在開野實(shí)驗(yàn)中行為表現(xiàn)的影響

開野實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常組相比，模型組的爬格數(shù)(圖1A)和探究活動(dòng)次數(shù)(圖1B)顯著降低，理毛次數(shù)(圖1C)及糞便粒數(shù)(圖1D)增加。給予PIP 2.5 mg·kg-1+反式REV 20 和40 mg·kg-1組爬格數(shù)和探究活動(dòng)次數(shù)增加，理毛次數(shù)及糞便粒數(shù)降低，與FLU 10 mg·kg-1作用效果相當(dāng)。

Fig.1 Effect of trans-resveratrol(trans-REV)combined with piperine on stressed rats in the open field test.Rats were exposed to the various stresses for 21 d except the ones in the normal control group，and all of the rats were provided with drugs once a day for 21 d.REV 2.5-40 mg·kg-1(ig)and piperine 2.5 mg·kg-1(ip)were given in combination.Fluoxetine(FLU)10 mg·kg-1was given ip.And on the 22nd day，rats were exposed to the open field test.The number of crossing，rearing，grooming and dejection amounts were recorded.，n=8.*P＜0.05，compared with normal control group;#P＜0.05，##P ＜0.01，compared with model group.

2.2 反式白藜蘆醇單用及合用胡椒堿后在穿梭箱實(shí)驗(yàn)中的ED50值

在穿梭箱實(shí)驗(yàn)中，單獨(dú)ig給予反式REV 5，10，20，40 和 80 mg·kg-1的抑制率分別為 8.1%，18.0%，25.7%，33.2% 和 38.7%，ED50為192.0 mg·kg-1，而 反 式 REV 2.5，5，10，20 和40 mg·kg-1與 PIP 2.5 mg·kg-1聯(lián)合給藥后的抑制率分別為11.7%，21.8%，28.8%，36.6% 和48.6%，ED50降低到49.1 mg·kg-1(見表 1)。

Tab.1 ED50value of trans-REV alone and its combination with piperine(PIP)on stressed rats in shuttle-box test

2.3 反式白藜蘆醇與胡椒堿聯(lián)用對應(yīng)激大鼠在穿梭箱實(shí)驗(yàn)中逃避失敗次數(shù)的影響

圖2結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型組大鼠的逃跑失敗次數(shù)顯著增加，分別給予PIP 2.5 mg·kg-1+反式REV 10，20和40 mg·kg-1后可顯著降低逃避失敗次數(shù)，作用類似于經(jīng)典抗抑郁藥FLU。

Fig.2 Effect of trans-REV combined with piperine on number of failure escape of stressed rats.See Fig.1 for the treatments.And on the 22th day，rats were exposed to the shuttle-box test，and the number of failure escape was recorded.，n=8.＊＊P＜0.01，compared with the normal control group;#P ＜0.05，##P ＜0.01，compared with model group.

2.4 反式白藜蘆醇與胡椒堿聯(lián)用對應(yīng)激大鼠下丘腦單胺遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物含量的影響

如表2中顯示，與正常對照組相比，模型組大鼠下丘腦中5-HT水平顯著降低，5-HIAA/5-HT水平相對提高，給予 PIP 2.5 mg·kg-1+反式 REV 40 mg·kg-1后，5-HT 水平增加，而 5-HIAA/5-HT 水平則下降。其作用與FLU相當(dāng)。各組多巴胺及其代謝產(chǎn)物二羥苯乙酸的水平均無顯著差異。

Tab.2 Effect of trans-REV combined with piperine on concentrations of monoamines and their metabolites in hypothalamus of stressed rats

2.5 反式白藜蘆醇與胡椒堿聯(lián)用對應(yīng)激大鼠下丘腦單胺氧化酶活性的影響

與模型組比較，給予反式 REV 40 mg·kg-1+PIP 2.5 mg·kg-1，大鼠下丘腦中 MAO-A 和 MAO-B活性被明顯抑制(表3)。MAO-A特異性抑制劑嗎氯貝胺 20 mg·kg-1顯著抑制 MAO-A的活性，對MAO-B的活性無影響。而經(jīng)典抗抑郁藥FLU對MAO活性無明顯影響。

Tab.3 Effect of trans-REV combined with piperine on monoamine oxidase(MAO)activities in hypothalamus of stressed rats

2.6 白藜蘆醇與胡椒堿聯(lián)用對應(yīng)激大鼠腎上腺的影響

如表4所示，與正常大鼠相比，大鼠在經(jīng)歷21 d慢性應(yīng)激后，腎上腺指數(shù)明顯提高，聯(lián)合給予PIP和反式REV可以顯著逆轉(zhuǎn)這個(gè)趨勢，尤其以反式REV20 和40 mg·kg-1組顯著(P ＜0.01)，效果類陽性對照藥FLU。

Tab.4 Effect of trans-REV combined with piperine on adrenal gland index in stressed rats

2.7 反式白藜蘆醇與胡椒堿聯(lián)用對應(yīng)激大鼠血清皮質(zhì)酮含量的影響

如表5所示，模型組大鼠的血清皮質(zhì)酮含量明顯高于正常對照組，而聯(lián)合給予反式REV和PIP可以降低皮質(zhì)酮含量，REV 10，20和40 mg·kg-1組差異顯著(P＜0.05)。與模型組相比，陽性對照藥FLU也可顯著降低大鼠血清皮質(zhì)酮含量(P＜0.01)。

Tab.5 Effect of trans-REV combined with piperine on blood serum corticosterone level in stressed rats

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，反式REV和PIP聯(lián)用后的ED50值顯著下降，從192.0mg·kg-1降到49.1 mg·kg-1，說明 PIP 2.5 mg·kg-1可以提高反式REV的藥理學(xué)活性，這可能與PIP抑制肝藥酶活性的作用相關(guān)。因而本研究進(jìn)一步探討反式REV與PIP 2.5 mg·kg-1合用的抗抑郁功效及其可能作用機(jī)制。

本研究結(jié)果顯示，大鼠經(jīng)21 d慢性不可預(yù)知性應(yīng)激后，在開野實(shí)驗(yàn)中的爬格數(shù)和探究次數(shù)明顯降低，理毛次數(shù)及糞便粒數(shù)顯著增加;穿梭箱實(shí)驗(yàn)中的主動(dòng)逃避電擊失敗次數(shù)增加。說明慢性應(yīng)激使大鼠食欲減退、活動(dòng)能力下降、緊張程度增加、興趣喪失、認(rèn)知和記憶能力減退，這些表現(xiàn)與抑郁癥患者表現(xiàn)出的精神運(yùn)動(dòng)性抑制、興趣改變等具有相似性。給予PIP+反式REV 20和40 mg·kg-1可改善應(yīng)激引起的大鼠在開野實(shí)驗(yàn)和穿梭實(shí)驗(yàn)中的行為改變，證明了反式REV合用PIP可能具有抗抑郁樣作用。

下丘腦被認(rèn)為是情緒的軀體反應(yīng)和內(nèi)臟反應(yīng)的整合部位，具有直接或間接影響情緒表達(dá)的功能，調(diào)節(jié)愉快反應(yīng)和快感行為，其功能障礙與抑郁癥患者快感缺失、動(dòng)力下降相關(guān)［19］。

5-HT是一種重要的中樞神經(jīng)遞質(zhì)，參與多種行為、情緒活動(dòng)的調(diào)節(jié)，在抑郁癥的病因以及抗抑郁藥物的機(jī)制研究中至關(guān)重要。增強(qiáng)5-HT的神經(jīng)傳遞是抗抑郁藥治療不同類型抑郁癥的共同機(jī)制。本研究結(jié)果顯示，PIP+反式REV 40 mg·kg-1顯著逆轉(zhuǎn)應(yīng)激引起的下丘腦中5-HT水平的下降及5-HT轉(zhuǎn)換率5-HIAA/5-HT水平的提高。MAO-A主要氧化降解去甲腎上腺素和5-HT;而MAO-B主要氧化降解多巴胺和兒茶酚胺等;MAO特異性抑制劑可用于一些神經(jīng)精神疾病的治療，如抑郁癥等。結(jié)果顯示，反式REV在劑量為40 mg·kg-1時(shí)可抑制MAO活性，其藥理功效類似MAO-A特異性抑制劑嗎氯貝胺。嗎氯貝胺可抑制MAO-A活性，使5-HT含量增加，5-HT轉(zhuǎn)換率呈下降趨勢。因此，REV合用PIP可能通過抑制MAO活性，尤其是抑制MAO-A活性，提高下丘腦中5-HT水平而發(fā)揮作用。這與已有報(bào)道指出的反式REV［6］和PIP［7］具有MAO活性抑制作用而發(fā)揮抗抑郁作用一致。

穿梭箱實(shí)驗(yàn)中的行為缺失與HPA功能障礙緊密相關(guān)［10］，本研究中反式REV和低劑量PIP合用顯著改善應(yīng)激大鼠在穿梭箱實(shí)驗(yàn)中的行為缺失，促使我們進(jìn)一步探討其抗抑郁作用是否涉及HPA軸。臨床研究表明，抑郁癥患者的HPA軸功能亢進(jìn);抑郁癥患者的唾液、血漿及尿液等代謝產(chǎn)物中皮質(zhì)酮水平增高，失去夜間自發(fā)性分泌抑制的節(jié)律;垂體和腎上腺的體積增大［20］。而這種功能亢進(jìn)和抑郁癥具有一定的依賴性，隨著抑郁的恢復(fù)，HPA軸的功能也逐步恢復(fù)正常［21］。Rubin等［22］研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥患者的腎上腺皮質(zhì)增生約38%，增生的程度與皮質(zhì)醇有關(guān);隨著抑郁癥狀的緩解，這種增生也似乎隨著皮質(zhì)醇的正?；鸩较В@與HPA軸的慢性或持續(xù)活躍有關(guān)［23］。也有報(bào)道指出不管是臨床抑郁癥患者還是慢性應(yīng)激大鼠，都表現(xiàn)出HPA軸負(fù)反饋功能抑制［24-25］，并且這種HPA軸功能異常以血清皮質(zhì)酮升高和腎上腺增生為特征［26］。本研究結(jié)果顯示，大鼠經(jīng)21 d慢性綜合性應(yīng)激后，腎上腺指數(shù)上升，說明慢性應(yīng)激對HPA軸活動(dòng)產(chǎn)生影響并致使腎上腺皮質(zhì)出現(xiàn)增生;此外，本研究中慢性應(yīng)激引起的HPA軸亢進(jìn)，還表現(xiàn)為血清皮質(zhì)酮水平的顯著增加，而反式REV合用PIP可顯著逆轉(zhuǎn)這些現(xiàn)象。因此，推測本研究中大鼠腎上腺的增生與大鼠血清皮質(zhì)酮含量增加緊密相關(guān)，且均由慢性應(yīng)激引起的HPA軸失調(diào)導(dǎo)致。

HPA軸與5-HT系統(tǒng)間存在著廣泛的相互作用。5-HT等遞質(zhì)減少時(shí)，下丘腦促腎上腺皮質(zhì)釋放因子的釋放減少，HPA軸功能降低;HPA軸亢進(jìn)時(shí)，則促使皮質(zhì)醇升高而誘導(dǎo)肝產(chǎn)生色氨酸吡咯化酶，降解血液中的色氨酸而導(dǎo)致5-HT合成不足［11-12］，從而引起抑郁癥及其相關(guān)癥狀。此外，HPA軸系統(tǒng)紊亂導(dǎo)致的皮質(zhì)激素水平升高，可以通過海馬中糖皮質(zhì)激素受體調(diào)節(jié)縫核-海馬系統(tǒng)5-HT神經(jīng)元活性，引起5-HT傳導(dǎo)系統(tǒng)，尤其是5-HT1A受體傳導(dǎo)功能受損，而5-HT1A受體與抑郁癥密切相關(guān)。徐英等［27］指出，姜黃素的抗抑郁作用很可能與增加海馬中糖皮質(zhì)激素受體和5-HT1A受體的表達(dá)，維持應(yīng)激狀態(tài)下HPA軸的穩(wěn)定有關(guān)。單胺神經(jīng)遞質(zhì)水平降低是抑郁發(fā)生機(jī)制中的第一步，也是抑郁癥首先導(dǎo)致的結(jié)果之一;HPA軸功能異常是應(yīng)激及情感障礙性疾病導(dǎo)致整個(gè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂的生理基礎(chǔ)。單胺遞質(zhì)水平的降低與HPA軸功能異常可相互影響而進(jìn)一步加重單胺遞質(zhì)的減少和HPA軸負(fù)反饋障礙，最終導(dǎo)致嚴(yán)重抑郁癥［28］。

綜上所述，反式 REV 和 PIP 2.5 mg·kg-1合用可抑制MAO活性，尤其是MAO-A活性而提高下丘腦中5-HT濃度，降低其轉(zhuǎn)換率，同時(shí)改善因應(yīng)激引起的HPA軸失調(diào)而表現(xiàn)的腎上腺增生及血清皮質(zhì)酮異常升高。因此，推測反式REV合用PIP在慢性不可預(yù)知性應(yīng)激抑郁模型中的抗抑郁樣作用涉及調(diào)節(jié)下丘腦中的5-HT遞質(zhì)系統(tǒng)和HPA軸功能，但其確切的作用靶點(diǎn)需在生物分子及基因水平上對該信號通路進(jìn)行檢測。此外，本研究中指出，PIP 2.5 mg·kg-1可以提高反式REV的藥理學(xué)活性，但本研究并沒有研究反式REV和PIP合用是否具有協(xié)同抗抑郁作用，但不排除兩藥合用具有協(xié)同作用，若要進(jìn)一步研究反式REV和PIP聯(lián)合作用的性質(zhì)需采用等效線法進(jìn)行檢驗(yàn)。

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