李 陽 孫中華 奚樹剛 高 影 (吉林大學第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，吉林 長春 130021)

2004年美國糖尿病(DM)協(xié)會年會提出了DM及其慢性并發(fā)癥的共同發(fā)病機制，即高糖損傷的共同基礎-氧化應激〔1〕。DM狀態(tài)下，一些病理因素通過促進機體內(nèi)活性氧簇(ROS)生成，使機體抗氧化物如超氧化物歧化酶(SOD)活性降低，組織中氧自由基及氧化產(chǎn)物如丙二醛(MDA)含量升高，引起組織損傷，進一步加重DM及其慢性并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展。單純胰島素治療，并不能根本解決DM的氧化應激狀態(tài)。黃芪作為一種抗氧化劑，在臨床治療DM中已有應用。本實驗通過黃芪聯(lián)合胰島素治療DM大鼠，觀察其對大鼠血糖、體重以及氧化應激的影響，為黃芪聯(lián)合胰島素療法治療DM提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料及主要儀器 健康成年 Wistar雄性大鼠，6周齡，體重(200±10)g，購于北京華阜康生物科技有限公司。鏈脲酶菌素(STZ)。黃芪注射液(黑龍江珍寶島制藥公司)，購于吉大三院。魚精蛋白鋅胰島素購于江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司(批號:國藥準字H10890001)，置于冰箱中4℃保存。大鼠實驗過程均在吉林大學衛(wèi)生監(jiān)測中心實驗室內(nèi)進行。大鼠SOD、MDA試劑盒購南京建成生物公司。血糖儀(FreeStyle)由美國雅培生物科技有限公司提供。

1.2 動物模型制作與分組 健康成年Wistar雌性大鼠30只，適應性喂養(yǎng)7 d后，禁食12 h稱重。STZ溶液現(xiàn)用現(xiàn)配，給藥劑量為60 mg/kg，溶劑為0.1 mol/L，pH=4.5枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液。再選取10只大鼠給予等劑量的枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液腹腔注射，隨機取5只作為對照組。2 d后尾靜脈采血測血糖值，血糖≥16.7 mmol/L作為大鼠建模成功的標準。血糖值＜16.7 mmol/L的大鼠隔日二次造模，STZ給藥劑量為40 mg/kg。連續(xù) 1、3、5 d 測大鼠血糖，血糖值均 ≥16.7 mmol/L，大鼠造模成功。造模成功的大鼠隨機分為模型組、黃芪組、胰島素組和黃芪+胰島素組，每組5只。

1.3 給藥方法 造模成功后，黃芪組、黃芪+胰島素組給予黃芪注射液5 ml/kg(相當于原材料10 g/kg)灌胃，每日1次，模型組及胰島素組給予等量的生理鹽水灌胃。胰島素組及黃芪+胰島素組初始給予2 U胰島素，大腿外側皮下注射，每3 d測一次血糖，根據(jù)血糖情況調(diào)整胰島素劑量，將血糖值控制在4～8 mmol/L之間。

1.4 標本采集及血體重、血糖、MDA、SOD測定 給藥8 w后，稱重、尾靜脈采血測血糖，10%水合氯醛麻醉后腹主動脈取血，常溫靜置30 min，3 000 r/min，10 min分離血清，置于 －80℃冰箱中保存待用。體重每3 d測一次，血糖每3 d應用自動血糖儀測定一次，測定尾靜脈采血的第二滴血。MDA含量測定采用TBARS法，SOD活性測定采用DTNB法。

2 結果

2.1 實驗8 w后各組大鼠SOD及MDA水平 DM模型組及其治療組SOD活性明顯低于正常對照組，MDA水平明顯高于正常對照組(P＜0.05);黃芪治療組、胰島素治療組和黃芪+胰島素治療組SOD活性明顯高于DM模型組，MDA水平明顯低于DM模型組(P＜0.05)，黃芪治療組和胰島素治療組SOD活性明顯低于黃芪+胰島素治療組，MDA水平明顯低于黃芪+胰島素治療組(P＜0.05)。見表1。

2.2 實驗8 w后各組大鼠血糖水平 DM模型組和黃芪治療組血糖水平明顯高于正常對照組(P＜0.05)，黃芪治療組、胰島素治療組和黃芪+胰島素治療組血糖水平明顯低于DM模型組(P＜0.05)，黃芪治療組和胰島素治療組血糖水平明顯高于黃芪+胰島素治療組(P＜0.05)。見表2。

2.3 實驗8 w后各組大鼠體重變化情況 DM模型組及其治療組體重明顯低于正常對照組(P＜0.05)，黃芪治療組、胰島素治療組和黃芪+胰島素治療組體重明顯高于DM模型組(P＜0.05)，黃芪治療組和胰島素治療組體重明顯低于黃芪+胰島素治療組(P＜0.05)。見表2。

表1 各組大鼠血清SOD活性和MDA含量比較(±s，n=5)

表1 各組大鼠血清SOD活性和MDA含量比較(±s，n=5)

與正常對照組比較:1)P＜0.05;與DM模型組比較:2)P＜0.05;與黃芪組和胰島素組比較:3)P＜0.05，下表同

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表2 各組大鼠血糖水平和體重比較(±s，n=5)

表2 各組大鼠血糖水平和體重比較(±s，n=5)

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3 討論

世界范圍內(nèi)的糖尿病患病率預計將從2000年的2.8%(約1.7億患者)增加到2030年的4.4%(約3.6億患者)〔2〕。中國流行病學調(diào)查顯示，中國20歲以上人群中，總體DM患病率達9.7%〔3〕。目前DM的發(fā)病機制尚未完全闡明，但現(xiàn)有研究已表明，氧化應激是導致胰島β細胞葡萄糖毒性發(fā)生發(fā)展中的一個十分重要的機制〔4，5〕。目前已有大量關于黃芪治療DM及其慢性并發(fā)癥的研究，均表明黃芪對DM病情有所改善〔6，7〕。與本實驗中黃芪組治療結果一致。然而其治療效果并不十分理想。

氧化應激是指機體內(nèi)ROS和活性氮簇(RNS)產(chǎn)生過多，超出機體對其的清除能力，氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，導致組織細胞損傷。DM時一些病理因素導致自由基產(chǎn)生增加，過多的自由基消耗了內(nèi)源性抗氧化劑如SOD等，機體抗氧化能力下降，導致氧化與抗氧化這一動態(tài)平衡被破壞，發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應，組織細胞結構和功能受損，并同時形成MDA。MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，可間接反映機體內(nèi)氧化應激的程度。SOD是一種糖蛋白，屬于內(nèi)源性抗氧化防御系統(tǒng)，是抗氧化的主要指標之一，可清除氧自由基及其分解產(chǎn)物，SOD活力的高低間接反映了機體內(nèi)自由基的產(chǎn)生及其對組織細胞的損傷情況，亦反映了機體對氧自由基的清除能力。大量研究發(fā)現(xiàn)，DM時，機體存在明顯氧化應激，抗氧化酶活性下降和ROS增加與其發(fā)病及并發(fā)癥發(fā)生有著密切關系〔8〕。亦有研究表明，高血糖狀態(tài)是引起DM發(fā)病及其并發(fā)癥的主要原因。高血糖狀態(tài)可在體內(nèi)產(chǎn)生大量自由基，并使體內(nèi)自由基防御機制受損，兩者共同導致氧化應激加重〔9〕。本實驗結果顯示，DM大鼠體內(nèi)MDA水平顯著增高，SOD活性顯著下降，提示大鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化顯著增強，與文獻〔10〕報道一致。因此，對DM患者應進行抗氧化治療。

黃芪注射液是傳統(tǒng)中藥黃芪提取物的滅菌水溶液，目前觀點認為，黃芪具有抗脂質(zhì)過氧化的作用〔11〕，可以與體內(nèi)SOD結合，提高其活性。體外實驗顯示黃芪3種提取成分有良好的清除氧自由基的作用〔12〕。本實驗表明黃芪及胰島素均可一定程度上降低機體氧化應激水平。提示胰島素聯(lián)合黃芪治療組在治療DM、改善高糖及機體氧化應激狀態(tài)的效果方面，均優(yōu)于單純應用胰島素或黃芪組，具有重要的臨床意義。

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