楊 鑫 馬越嬌 王 實(shí) 劉曉舒 宋光熠 姜雅秋

(遼寧省基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所藥理研究室，遼寧 沈陽 110101)

高同型半胱氨酸血癥(Hhcy)是引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化及心腦血管疾病的病因之一，實(shí)驗(yàn)表明Hhcy可引發(fā)血管內(nèi)皮損傷并加重心肌缺血再灌注的心肌損傷作用，麥門冬多糖等藥物對(duì)Hhcy及其引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化及心腦血管疾病具有一定的防治作用〔1～3〕。為尋找有效的防治藥物，同時(shí)探討相關(guān)藥物的防治機(jī)制，我們應(yīng)用腹腔注射2%L-半胱氨酸5 ml/kg復(fù)制Hhcy大鼠模型，在此基礎(chǔ)上觀察麥門冬多糖對(duì)Hhcy大鼠心肌缺血再灌注的防治作用。

1 材料與方法

1.1 材料 8周齡(體重190～210 g)SD大鼠(沈陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證為遼寧省科學(xué)技術(shù)廳簽發(fā)，許可證號(hào)：SCXK(遼)2003-0016。飼料為繁育鼠全價(jià)固體顆粒飼料(沈陽市于洪區(qū)前民動(dòng)物飼料廠)。L-半胱氨酸(美國Sigma公司)。肌酸肌酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、血管緊張素(Ang)Ⅰ、AngⅡ、內(nèi)皮素(ET)-1、同型半胱氨酸測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。麥門冬多糖(北京普惠天悅生物科技有限公司)。RM6240多道生理信號(hào)采集系統(tǒng)(成都儀器廠)。UV-265FW紫外分光光度計(jì)(日本光電工業(yè)株式會(huì)社)。JW-I型微型人工呼吸機(jī)(第二軍醫(yī)大學(xué))。A5082酶標(biāo)儀(泰燦奧地利有限責(zé)任公司)。

1.2 方法 取SD大鼠30只，隨機(jī)分為3組，每組10只，雌雄各半。正常對(duì)照組，每天腹腔注射生理鹽水5 ml/Kg;HHcy模型組，每天腹腔注射2%L-半胱氨酸5 ml/kg;麥門冬多糖干預(yù)組，每天腹腔注射2%L-半胱氨酸5 ml/kg，灌胃給予麥門冬多糖。所有大鼠均飼以常規(guī)動(dòng)物飼料和水。連續(xù)給藥10 w于末次給藥30 min后腹腔注射戊巴比妥鈉(30 mg/kg)，麻醉后氣管插管安裝呼吸機(jī)，開胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左室降支60 min后松開結(jié)扎線再灌注60 min。各組標(biāo)Ⅱ?qū)?lián)全程記錄心電圖，并于再灌注60 min后取血、心臟。分離血清，生理鹽水10%心肌組織勻漿，3 000 r/min離心15 min，取上清液。血清及心肌組織勻漿上清液按照測(cè)定試劑盒操作說明書測(cè)定 CK、LDH、AngⅠ、AngⅡ、ET-1、同型半胱氨酸。

2 結(jié)果

2.1 血清同型半胱氨酸的變化 SD大鼠腹腔注射2%L-半胱氨酸5 ml/kg 10 w后，Hhcy模型組和麥門冬多糖干預(yù)組大鼠血清同型半胱氨酸明顯增高(P＜0.01)，見表1。

表1 麥門冬多糖對(duì)Hhcy大鼠心肌缺血再灌注血清CK、LDH、AngⅠ、AngⅡ、ET-1的影響( s，n=10)

表1 麥門冬多糖對(duì)Hhcy大鼠心肌缺血再灌注血清CK、LDH、AngⅠ、AngⅡ、ET-1的影響( s，n=10)

與Hhcy模型組比較：1)P＜0.01

組別 同型半胱氨酸(μmol/L)CK(U/ml)LDH(U/ml)AngⅠ(μg/L)AngⅡ(μg/L)ET-1(ng/L)1 1 773.7±148.2 145.0±46.3正常對(duì)照組 3.40±1.281) 2.29±0.961) 6.80±0.781) 309.6±98.71) 1 338.6±230.91) 48.8±8.61)麥門冬多糖組 18.82±6.05 1.49±0.411) 8.27±1.211) 415.0±101.71) 1 648.8±166.91) 57.6±17.71)Hhcy模型組 27.33±5.66 3.77±0.78 10.16±1.13 681.7±173.

2.2 心肌缺血再灌注心電圖的變化 各組大鼠結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左室降支60 min后及松開結(jié)扎線再灌注60 min后均表現(xiàn)為R波下降，ST段抬高并與T波融合為單項(xiàng)曲線，其中Hhcy模型組、麥門冬多糖干預(yù)組PP間期延長(zhǎng);正常對(duì)照組PP間期無明顯變化。R波下降、PP間期延長(zhǎng)各組間存在明顯差異。Hhcy模型組出現(xiàn)4例心律失常，主要表現(xiàn)為心律不齊及PQ、QRS、QT間期延長(zhǎng)的廣泛傳導(dǎo)阻滯。

2.3 心肌缺血再灌注CK、LDH、AngⅠ、AngⅡ、ET-1的變化Hhcy模型組大鼠血清 CK、LDH、AngⅠ、AngⅡ、ET-1明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01)。麥門冬多糖干預(yù)組大鼠血清 CK、LDH、AngⅠ、AngⅡ、ET-1 明顯低于 Hhcy模型組(P ＜0.01)，見表1。

3 討論

麥門冬又名麥冬，是百合科植物麥冬的干燥塊根，其味甘、微苦、性微寒，歸心、肺、胃經(jīng)。含有甾體皂苷、高異黃酮、β-谷甾醇、糖類。具有多種藥理作用，在心血管系統(tǒng)有抗心律失常和抗心肌缺血的作用〔4～6〕。Hhcy作為心腦血管疾病發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素已被大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床試驗(yàn)證實(shí)，Hhcy加重缺血再灌注損傷的機(jī)制尚未完全明確，可能與血管損傷、促進(jìn)氧化應(yīng)激作用、增加鈣的細(xì)胞毒性作用、引起線粒體功能障礙、加重興奮性氨基酸毒性及促進(jìn)DNA的損傷等多種因素有關(guān)〔7〕。本實(shí)驗(yàn)表明Hhcy大鼠心肌缺血再灌注后的損傷明顯較正常大鼠加重。腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是體內(nèi)一組重要的血管活性物質(zhì)，AngⅡ是其主要的有效成分。它是一系列蛋白水解反應(yīng)的產(chǎn)物，開始于由腎素介導(dǎo)的血管緊張素Ⅰ的轉(zhuǎn)變。AngⅠ對(duì)生物體內(nèi)多數(shù)組織和細(xì)胞沒有活性作用;而AngⅡ和AngⅢ卻有較強(qiáng)的作用，尤以前者為甚。AngⅡ通過血管平滑肌、腎、腎上腺皮質(zhì)等靶器官的相應(yīng)受體而發(fā)揮生理效應(yīng)。AngⅡ的受體主要有AT1和AT2兩種亞型。AT1受體分布于人體的血管、心臟、肝、腦、肺、腎和腎上腺皮質(zhì)、胃腸、子宮、胎盤、附睪和輸精管。AT1受體又可分為AT1A受體、AT1B受體和AT1C受體。AngⅡ主要通過AT1受體發(fā)揮其心血管作用。本研究表明Hhcy大鼠心肌缺血再灌注與正常大鼠心肌缺血再灌注比較血清MPO、CRP含量明顯升高，麥門冬多糖干預(yù)后明顯降低。進(jìn)一步證實(shí)Hhcy及在此情況下的心血管事件與炎癥反應(yīng)關(guān)系極其密切，麥門冬多糖通過抑制炎癥反應(yīng)對(duì)Hhcy大鼠心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。

1 宋光熠，黃 波，董 瑤，等.硫酸軟骨素對(duì)高同型半胱氨酸血癥過氧化影響〔J〕.中國公共衛(wèi)生，2008;24(5)：603.

2 姜雅秋，宋光熠，譚 巖，等.高同型半胱氨酸血癥致動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2007;27(22)：2169-70.

3 蘇 丹，王 實(shí)，夏大梅，等.麥門冬多糖對(duì)Hhcy大鼠心肌缺血再灌注保護(hù)作用〔J〕.中國公共衛(wèi)生，2011;27(4)：470-1.

4 徐德生，馮 怡，周躍華，等.麥冬多糖中抗急性心肌缺血活性部位研究〔J〕. 中成藥，2004;26(10)：832-7.

5 周躍華，徐德生，馮 怡，等.麥冬提取物對(duì)小鼠營養(yǎng)血流量的影響〔J〕. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2003;9(1)：22-4.

6 程金波，衛(wèi)洪昌，章 忱，等.麥冬提取物抗犬心肌缺血的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究〔J〕. 中國病理生理雜志，2001;17(8)：810.

7 王 靜.高同型半胱氨酸血癥與腦缺血再灌注損傷關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕. 中華臨床醫(yī)學(xué)實(shí)踐雜志，2007;6(6)：409-11.