杜天信 李 潔

（1 河南省正骨研究院，河南 洛陽(yáng) 471002；2 河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450008）

桃仁膝康丸是“世界非物質(zhì)文化遺產(chǎn)”“平樂(lè)郭氏正骨”的傳統(tǒng)藥物之一，由桃仁、白芍、紅花等十余味中藥組成處方，具有活血止痛，祛風(fēng)濕，補(bǔ)肝腎之功效，用于治療骨關(guān)節(jié)病早期關(guān)節(jié)疼痛，屈伸不利，膝部疼痛等癥。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法對(duì)白芍中芍藥苷的含量進(jìn)行了測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀；DAD檢測(cè)器，Agilent化學(xué)工作站；色譜柱Agilent C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；XS205DU電子天平（梅特勒-托利多有限公司）。

1.2 藥品與試劑

芍藥苷對(duì)照品（供含量測(cè)定用，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110736-201035）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱Agilent C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（13∶87）；檢測(cè)波長(zhǎng)230nm；流速1.0 mL/min；柱溫30℃。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇配制成濃度為0.1532mg/mL的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品5g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇30mL，稱(chēng)定重量，超聲處理30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方比例和樣品制備方法制成缺白芍的陰性制劑，再按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

2.5 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別精密吸取陰性樣品溶液、對(duì)照品溶液及供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果顯示，陰性樣品在芍藥苷保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 桃仁膝康丸HPLC圖譜

2.6 線(xiàn)性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液4μL、8μL、12μL、16μL、20μL，注入色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以芍藥苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為:Y=756.56X+67.5，r=0.9999。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0.6128～3.0640μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液20μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以芍藥苷峰面積計(jì)算，RSD為0.82%，試驗(yàn)表明儀器精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于配置后0、1、2、4、8h，精密吸取20μL，注入色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果芍藥苷峰面積RSD為1.84%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同一批號(hào)（20100205）供試品5份，分別按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液20μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果樣品中芍藥苷的平均含量為0.71mg/g，RSD為2.04%，結(jié)果表明本方法重現(xiàn)性良好。

表1 桃仁膝康丸中芍藥苷加樣回收率試驗(yàn)

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量（0.66 mg/g）的同一批號(hào)樣品適量，精密稱(chēng)定，稱(chēng)取6份，分別精密加入濃度為0.1585mg/mL的芍藥苷對(duì)照品溶液10mL，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備樣品溶液，分別精密吸取20μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.11 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算芍藥苷含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 三批樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

試驗(yàn)考察了稀乙醇、50%甲醇和甲醇的提取效果[1-3]，發(fā)現(xiàn)用稀乙醇提取時(shí)，芍藥苷含量較高，故采用稀乙醇作為提取溶劑。另外，實(shí)驗(yàn)還比較了不同比例的流動(dòng)相[4-6]：乙腈-水（14∶86）、乙腈-水（13∶87）、乙腈-水（12∶88）、乙腈-水（17∶83），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，流動(dòng)相為乙腈-水（13∶87）時(shí)，基線(xiàn)平穩(wěn)，芍藥苷可達(dá)到較好分離，且分析時(shí)間短，陰性無(wú)干擾。

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