李繼綱梁燕閆見敏鄭戌翔孫亞東

（西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院，陜西楊凌 712100）

1 選育過程

西農(nóng)2011親本選育始于2006年，母本R015是以抗番茄黃化曲葉病毒的TY52（Ty-1）與粉色、大果（單果質(zhì)量250～300 g）、果實硬度高、中晚熟自交系FTI1419A-3經(jīng)過5代回交轉(zhuǎn)育，育成的抗 TYLCV，大果，生長勢旺盛，綜合性狀優(yōu)良的自交系。父本 R019是利用引進的抗TYLCV的抗源材料99S-C-39-20-11-24-17-0（Ty-3），經(jīng)6代回交轉(zhuǎn)育，將抗病基因轉(zhuǎn)育到粉色、大果、早熟、有限生長類型、綜合性狀良好的 FTD1401A-1自交系中育成的抗TYLCV，大果，早熟的優(yōu)良自交系。

2009年以R019為父本，以回交轉(zhuǎn)育的FTI1419A-3為母本配制雜交組合25個，通過TYLCV抗性分子標記鑒定，田間抗性鑒定以及果實性狀、生長勢和綜合性狀進行綜合評價，篩選出優(yōu)良組合，2009～2011年參加陜西省品種區(qū)域試驗和生產(chǎn)試驗示范，2011年5月通過陜西省農(nóng)作物品種審定委員會認定。

2 TYLCV抗性分子標記鑒定

2.1 材料

9份番茄試驗材料由西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院番茄育種課題組提供。

2.2 方法

2.2.1 引物 番茄抗黃化曲葉病毒病Ty-1基因的CAPS標記引物參照于力等（2008）的設(shè)計，CAPS F：5′-TAATCCGTCGT TACCTCTCCTT-3′；CAPS R：5′-CGGATGACTTCAATAGCAATGA- 3′。Ty-3基因的 SCAR標記引物參照許爽等（2009）的設(shè)計，SCAR F：5′-GGTAGTGGAAATGA TGCTGCTC-3′；SCAR R：5′-GCTCTGCCTATTGTCCCATATATAACC-3′。

2.2.2 PCR擴增、酶切體系與電泳檢測 DNA提取參照Williamson等（1994）的方法。PCR反應(yīng)總體系為 25 μmol·L-1，包括：模板 DNA 2.0 μL，10×PCR Buffer 2.0 μL，25 mmol·L-1MgCl22.0 μL，2.5 mmol·L-1dNTPs 2 μL，引物（20 μmol·L-1）各 1 μL，TaqDNA polymarase（5 U·μL-1）0.2 μL，終體積用超純水加至25 μL。PCR反應(yīng)程序為：94 ℃預(yù)變性5 min，然后94 ℃變性1 min，Ty-1引物64.6 ℃退火，Ty-3引物50 ℃退火1 min，72 ℃延伸90 s，共35個循環(huán)，72℃延伸10 min，擴增產(chǎn)物在4 ℃保存。取PCR產(chǎn)物5 μL，于1.5%瓊脂糖凝膠電泳，觀察結(jié)果。酶切體系為擴增產(chǎn)物10 μL加入10 U的TaqI酶1 μL，Buffer 2 μL，終體積用超純水加至25 μL。65 ℃保溫1.5 h。酶切產(chǎn)物于1.8%瓊脂糖膠在電壓5 V·cm-1條件下電泳1 h，EB染色，Bio-RAD凝膠成像系統(tǒng)拍照。

2.3 結(jié)果與分析

2.3.1Ty-1基因CAPS引物擴增和酶切結(jié)果 由圖1-a可看出1號、2號、3號、4號、5號、KN、22號、46號均擴增出398 bp的特異片段。PCR產(chǎn)物經(jīng)TaqI酶切產(chǎn)生多態(tài)性（圖1-b），1號、2號、3號、4號、KN酶切后產(chǎn)生了3個特異片段，大小分別為398、303 bp和95 bp，均為抗病雜合基因型。5號酶切后只產(chǎn)生了303 bp和95 bp 2個特異片段，為抗病純合基因型。22號、46號不能被酶切，為感病材料。21號無擴增條帶。

圖1 Ty-1基因CAPS引物擴增產(chǎn)物及Taq I酶切結(jié)果

2.3.2Ty-3基因SCAR引物擴增結(jié)果 由圖2可看出：1號、2號、3號、4號、KN均擴增出630 bp和320 bp的特異片段，為雜合抗病，且含有Ty-3a基因。21號只擴增出630 bp條帶，為純合抗病類型，5號、22號、46號只擴增出320 bp條帶，不含Ty-3基因。

圖2 Ty-3基因SCAR引物擴增結(jié)果

3 選育結(jié)果

3.1 區(qū)域試驗

2010～2011年進行區(qū)域試驗，試驗地點為白水、源縣、閻良及威陽，2月下旬播種，小區(qū)面積 5.25～45.00 m2，隨機區(qū)組排列，3次重復(fù)，每重復(fù)30株。以金棚1號為對照。留4穗果統(tǒng)計產(chǎn)量。2010年 4個試驗點西農(nóng)2011平均每667 m2產(chǎn)量為7 667.2 kg，較對照金棚 1號增產(chǎn) 2.7%；2011年 4個試驗點平均每667 m2產(chǎn)量為 7 261.9 kg，較對照增產(chǎn) 31.6%（表1）。

表1 西農(nóng)2011區(qū)域試驗產(chǎn)量結(jié)果

3.2 生產(chǎn)試驗

2011年在楊凌、扶風(fēng)、白水、三原縣和寶雞 5個試驗點進行生產(chǎn)試驗，2月下旬播種，面積180～240 m2，采用對比法，不設(shè)重復(fù)，每個品種500 株。在所有試驗點中，西農(nóng) 2011產(chǎn)量均高于對照。西農(nóng)2011平均每667 m2產(chǎn)量為7 609.9 kg，比對照金棚1號增產(chǎn) 12.34%（表2）。

表2 西農(nóng)2011生產(chǎn)試驗產(chǎn)量結(jié)果

3.3 品質(zhì)

2011年經(jīng)陜西省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗站測定，西農(nóng) 2011可溶性固形物含量 6.5%，總糖4.10%，總酸0.504%，VC 180.4 mg·kg-1，品質(zhì)優(yōu)于對照金棚1號（5.5%，2.88%，0.475%，105.0 mg·kg-1）。

3.4 抗病性

2011年5月經(jīng)西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護學(xué)院田間調(diào)查，西農(nóng)2011的TYLCV病情指數(shù)為1.57，ToMv病情指數(shù)1.81，葉霉病病情指數(shù)3.04，枯萎病病情指數(shù)2.90，其綜合抗性特別是對TYLCV和枯萎病的抗性強于對照金棚1號（表3）。

表3 西農(nóng)2011田間抗病性調(diào)查

4 品種特征特性

中早熟，無限生長類型，植株生長勢旺，連續(xù)坐果能力強，葉片大，葉色綠，豐產(chǎn)性好，4穗果每667 m2產(chǎn)量7 500 kg。果實高圓，粉紅色，著色均勻，色澤鮮亮，品質(zhì)佳，大果型，單果質(zhì)量 260～280 g，大小均勻。果實硬度好，耐貯運，貨架壽命長。田間調(diào)查表明對番茄黃化曲葉病毒?。═YLCV）和枯萎病的抗性強于對照金棚1號。適合秋延、越冬及早春的日光溫室、塑料大棚等栽培，全國喜食粉果地區(qū)均可種植。

于力，朱龍英，萬延慧，楊少軍，朱為民，薛林寶.2008.多重PCR技術(shù)鑒定番茄Ty-1和Mi基因.分子植物育種，6（1）：165-169.

許爽，褚云霞，張輝，萬延慧，朱龍英，朱為民.2009.多重PCR 技術(shù)鑒定番茄Ty-2和Ty-3基因及田間驗證.分子植物育種，7（5）：954-958.

Williamson V M，Ho J Y，Wu F F，Miller N，Kaloshian I.1994.A PCR-based marker tightly linked to the nematode resistance gene，Mi，in tomato.Theor Appl Genet，87：757-763.