宋春燕，倪約翰，傅靜波，王婕，程妍，湯欣

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

糖尿病是由多種病因引起的以慢性高血糖為特征的代謝系統(tǒng)紊亂。長(zhǎng)期的高血糖可引起全身多系統(tǒng)功能損害，如眼、腎、神經(jīng)、心臟、血管的慢性病變，導(dǎo)致功能缺陷和衰竭。隨著我國(guó)人們生活水平的提高、人口老齡化、生活方式的改變，糖尿病已成為我國(guó)繼心血管病和腫瘤之后的第三大非傳染性疾病，是嚴(yán)重威脅我國(guó)國(guó)民身體健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題。糖尿病屬于中醫(yī)學(xué)中“消渴病”的范疇［1－2］。早在 2000 多年前，中醫(yī)學(xué)就有消渴病的記載，在隨后千百年的醫(yī)療實(shí)踐中，歷代醫(yī)家對(duì)消渴病的認(rèn)識(shí)不斷深入，逐步形成了對(duì)本病病因、病機(jī)、診斷、治療等方面較為全面的認(rèn)識(shí)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，180只，20～25g雌雄各半。由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證:SCXK(黑)2008004。

1.2 藥品與試劑 四氧嘧啶(sigma進(jìn)口分裝，批號(hào)200905);葡萄糖試劑盒(北京北化康泰臨床試劑有限公司，批號(hào)20000106);二甲雙胍(澳大利亞艾華大藥房廠，批號(hào)A085E);0.9%生理鹽水 ;黃連水煎液(由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院提供)。

1.3 儀器 HH－S恒溫水浴鍋(江蘇醫(yī)療儀器廠);722分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠);KDC－40離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 胰島依賴(lài)型小鼠糖尿病模型建立［3］

健康昆明種小鼠180只，雌雄各半，體質(zhì)量20～25g，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，禁食不禁水24h，小鼠稱(chēng)重，按體質(zhì)量腹腔注射四氧嘧啶(200mg/kg)制成高血糖模型。

2.2 分組與指標(biāo)檢測(cè)

高血糖模型小鼠禁食正常給水16h后，測(cè)定各小鼠血糖，篩選合格小鼠按血糖值隨機(jī)分為6組:空白對(duì)照、模型組、二甲雙胍對(duì)照組(500mg/kg)、黃連低劑量組(10g/kg)、黃連中劑量組(20g/kg)、黃連高劑量組(40g/kg)，每組20只。各組每日灌胃給藥1次，空白對(duì)照、模型組給予等容量生理鹽水連續(xù)給藥14天。在第7、14天各組在藥前分別先測(cè)體質(zhì)量，給藥后1h摘眼球采血，離心分離血清取血清以葡萄糖氧化酶法［4］測(cè)定血糖。14天后將所有小鼠都處死，摘取胰腺制作胰島細(xì)胞玻片［5］，鏡下觀察B細(xì)胞修復(fù)再生結(jié)果。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 造模后各組對(duì)胰島依賴(lài)型糖尿病模型小鼠血糖的影響 結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 (各組小鼠血清中血糖含量(mmol/L，s)

表1 (各組小鼠血清中血糖含量(mmol/L，s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

組別 n 7天血糖(mol/l)14天血糖(mol/l)20 5.2 ±1.0 5.3 ±1.2模型組 18 28.9 ±7.8 29.7 ±8.9低劑量組 20 28.1 ±6.4 28.5 ±5.3中劑量組 20 27.1 ±5.5 27.5 ±7.9高劑量組 20 25.5 ±5.9* 21.8 ±6.1△西藥組 20 15.7±6.1 ＊＊ 13.7±5.6空白組△△

由表1可見(jiàn)，黃連水煎液能降低小鼠血糖，且成劑量依賴(lài)性，其中分別在第7、14天黃連高劑量組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，西藥組與模型組比較有極顯著性差異(P＜0.01)。

3.2 造模后各組對(duì)胰島依賴(lài)型糖尿病模型小鼠體質(zhì)量的影響 結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 造模后各組對(duì)胰島依賴(lài)型糖尿病模型小鼠體質(zhì)量的影響(g，s)

表2 造模后各組對(duì)胰島依賴(lài)型糖尿病模型小鼠體質(zhì)量的影響(g，s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

組別 n 7天體質(zhì)量(g)14天體質(zhì)量(g)空白組20 27.25 ±0.8159 29.34 ±0.7865模型組 18 21.33 ±0.3941 20.21 ±0.2872低劑量組 20 21.97 ±0.1627 20.97 ±0.2534中劑量組 20 23.39 ±0.4178 21.13 ±0.5128高劑量組 20 26.11 ±0.3863* 23.21 ±0.4684△西藥組 20 27.12±1.1430＊＊ 25.78±0.9430△△

由表2可見(jiàn)，黃連水煎液對(duì)控制小鼠體質(zhì)量下降有效，且成劑量依賴(lài)性，其中分別在第7、14天黃連高劑量組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，二甲雙胍組與模型組比較有極顯著性差異(P＜0.01)。

3.3 光鏡下各組對(duì)高血糖小鼠胰島B細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響 結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 光鏡下各組對(duì)高血糖小鼠胰島B細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響(HE，400×)

4 討論

黃連［6］是毛茛科多年生草木植物黃連、三角葉黃連或云連之干燥根莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。該藥味苦性寒，歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效。有資料顯示，黃連有降血糖的作用［7］。其作用機(jī)理與改善胰島素抵抗有關(guān)，還有其抑制分化作用也提示黃連在增加細(xì)胞對(duì)葡萄糖攝取的同時(shí)不會(huì)引起脂肪的聚集而造成體質(zhì)量增加，這對(duì)防治與胰島素抵抗相關(guān)的代謝綜合征或并發(fā)癥具有一定臨床意義［8］。但對(duì)胰島依賴(lài)型糖尿病是否有作用尚沒(méi)有研究資料報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，黃連水煎液能降低胰島依賴(lài)型糖尿病模型小鼠的血糖，且呈劑量依賴(lài)性，但短期降糖效果不如二甲雙胍。能有效控制小鼠體質(zhì)量下降，且呈劑量依賴(lài)性，但控制體質(zhì)量下降的效果不如二甲雙胍。對(duì)胰島依賴(lài)型糖尿病模型小鼠的胰島B細(xì)胞形態(tài)有明顯的修復(fù)作用，且成劑量依賴(lài)性。

胰島B細(xì)胞形態(tài)(光鏡)顯示:胰島數(shù)量，體積，及胰島內(nèi)細(xì)胞形態(tài)，黃連高劑量組最好，二甲雙胍組次之，黃連低劑量組最差。從結(jié)果中得之，黃連水煎液在降血糖方面有效果，且呈劑量依賴(lài)性，但不如二甲雙胍，對(duì)胰島B細(xì)胞形態(tài)有明顯的修復(fù)作用，且成劑量依賴(lài)性，為促進(jìn)中西兩種醫(yī)學(xué)的相互溝通比較提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但由于實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)等原因，不能測(cè)胰島B細(xì)胞的生理功能(胰島素、C－肽)，具體情況有待進(jìn)一步研究。陳建國(guó)［3］實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，用200mg/kg四氧嘧啶組造模小鼠死亡率較低，模型成功率最高，血糖值穩(wěn)定，糖尿病癥狀明顯。至于給藥前小鼠禁食的合適時(shí)間，研究表明，給藥前小鼠禁食16h為比較合適的禁食時(shí)間。研究還表明，雌、雄小鼠禁食16h、200mg/kg四氧嘧啶小鼠造模成功率高、空腹血糖值穩(wěn)定，至于雌、雄性小鼠哪個(gè)做模型更為理想各種研究報(bào)道結(jié)果不一。綜上所述，四氧嘧啶致小鼠高血糖模型最佳條件為:四氧嘧啶劑量為200mg/kg，給藥前小鼠禁食16h，雌、雄性小鼠各半，選造模后第3天血糖值在15～30mmol/L小鼠為造模成功小鼠為宜。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中由于不明原因造成模型組2只老鼠死亡。究其原因可能與血糖值過(guò)高有關(guān)，但也有可能由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中操作不當(dāng)，但也不排除藥物所致，具體毒性有待進(jìn)一步研究。

［1］涂玥.中藥防治糖尿病腎病在基因表達(dá)水平上的研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，39(5):93 －96.

［2］修麗梅，羅毅文，王振萍.糖尿病足的中醫(yī)研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，39(5):91 －93.

［3］陳建國(guó).四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的研究［J］.衛(wèi)生毒理學(xué)雜志，2004，18(2):99－100.

［4］克伯俊.藥物藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)［M］.北京:北京化學(xué)工業(yè)出版社，2007:105－106.

［5］董靜霞.胰島B細(xì)胞、A細(xì)胞的快速雙染［J］.四川解剖學(xué)雜志，2001，9(2):99.

［6］梅全喜.現(xiàn)代中藥藥理手冊(cè)［M］.北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2008:135－136.

［7］任貽軍.黃連素的研究進(jìn)展［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，11(1):50－51.

［8］李佳川.黃連改善胰島素抵抗藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2010，35(14):1855－1858.