李敬果，翟曉翔，張翠俠，陳向輝

(徐州市中醫(yī)院皮膚科，江蘇徐州221003)

Livin是近年來發(fā)現(xiàn)的人類凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptos protein，IAP)家族的新成員，特異性高表達于某些實體腫瘤組織和腫瘤細胞系，能抑制許多凋亡刺激劑誘發(fā)的細胞凋亡。Ki-67是反映腫瘤細胞增殖活性的指標(biāo)，與腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后高度相關(guān)。作者應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測皮膚鱗狀細胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma，CSCC)組織中 Livin 的表達，并探討其表達與細胞增殖及CSCC臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 40例CSCC標(biāo)本取自徐州市中醫(yī)院病理科2003年至2010年存檔蠟塊。40例患者中，男性22例，女性18例;年齡38～81歲，平均年齡66歲;面、頸等暴露部位27例，胸、背、四肢及陰部等非暴露部位13例;根據(jù)Broders分類，Ⅰ級12例，Ⅱ級18例，Ⅲ～Ⅳ級10例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者8例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。另取10例正常皮膚組織作為對照。

1.2 檢測方法 采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測Livin及Ki-67的表達。Livin單克隆抗體購自武漢博士徳公司，Ki-67單克隆抗體、S-P試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。檢測具體步驟按試劑盒說明書進行，用已知陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。Livin以腫瘤細胞的細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號;Ki-67以腫瘤細胞的細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號，隨機選擇10個高倍鏡(×400)視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細胞，計算陽性細胞數(shù)占腫瘤細胞總數(shù)的百分比，即Ki-67的增殖指數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 11.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn) α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Livin的表達 40例CSCC組織中Livin的陽性率為70.00%(28/40)，而正常皮膚組織中無表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 Livin的表達與Ki-67增殖指數(shù)的關(guān)系 CSCC組織中Ki-67的陽性率為75.00%(30/40)，Livin陽性表達CSCC的Ki-67增殖指數(shù)為(36.15±20.27)%，Livin陰性者的Ki-67增殖指數(shù)為(20.36±10.82)%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2.3 Livin的表達與CSCC臨床病理特征的關(guān)系Livin的表達與CSCC的病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均＜0.05)，而與患者性別、年齡及腫瘤部位無關(guān)(P均 ＞0.05)。見表1。

3 討論

CSCC在我國的發(fā)病率居皮膚惡性腫瘤之首，占皮膚惡性腫瘤的78.5% ～90.9%［1］，且發(fā)病率呈上升趨勢。目前，CSCC發(fā)病機制仍不十分清楚，但多數(shù)腫瘤的發(fā)生是細胞凋亡與增殖失衡所致，受細胞內(nèi)外多種因素控制。隨著腫瘤分子生物學(xué)的研究進展，人們試圖從分子水平揭示腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機制，并期望通過調(diào)節(jié)細胞的凋亡和增殖達到治療腫瘤的目的。

越來越多的研究表明，Livin基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，并逐漸成為人們研究的熱點［2－3］。Livin是凋亡抑制因子，在多種腫瘤細胞中表達，其抑制細胞凋亡主要作用機制如下:BIR區(qū)與Caspases家族結(jié)合，抑制其活性，尤其是抑制Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9的活性，阻止Caspases家族蛋白在細胞凋亡時執(zhí)行蛋白切除功能，進而阻斷凋亡受體及以線粒體為基礎(chǔ)的凋亡途徑［4］，使有利于細胞的增殖及異常基因進一步積聚，從而促進細胞向惡性方向轉(zhuǎn)化及腫瘤的發(fā)展。目前針對CSCC組織中Livin表達狀況的研究較少。本研究結(jié)果顯示，Livin在正常皮膚組織中不表達，而在CSCC組織中的陽性率為70.00%，提示其可能通過抑制腫瘤細胞凋亡對CSCC的發(fā)生、發(fā)展起重要作用，檢測Livin可能對CSCC的診斷有重要價值;病理分級Ⅲ～Ⅳ級的CSCC組織中Livin的陽性率為90.00%，明顯高于Ⅰ、Ⅱ級的41.67%和77.78%;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CSCC組織中Livin的陽性率為100.00%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的62.50%。這些均表明檢測Livin的表達對CSCC惡性程度及預(yù)后的判斷有一定的參考價值，對CSCC的發(fā)生、臨床進展和生物學(xué)行為評估也可能具有一定指導(dǎo)意義。

Ki-67是反映腫瘤細胞增殖活性的指標(biāo)，其表達隨細胞周期不同而發(fā)生改變，在有絲分裂G1期到晚期出現(xiàn)，S期和G2期逐漸增加，M期達到最高值，在細胞分裂晚期很快消失，G0期不表達。Ki-67僅在增殖細胞核中表達，其半衰期短，脫離細胞周期后迅速降解，已成為檢測腫瘤細胞增殖活性的可靠指標(biāo)［5］。Ki-67增殖指數(shù)高低與許多腫瘤的分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)［6］。本研究結(jié)果顯示，Ki-67在CSCC組織中的陽性率為75.00%，且Livin表達與Ki-67增殖指數(shù)有關(guān)，提示Livin蛋白促進細胞的增殖，兩者有可能在CSCC的發(fā)生、發(fā)展中共同發(fā)揮作用。

綜上所述，Livin不僅參與了凋亡的調(diào)控，還促進了細胞的增殖，在CSCC的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，可作為判斷CSCC惡性程度、評價預(yù)后的指標(biāo)。

［1］趙辨.臨床皮膚病學(xué)［M］.3版.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2001:1106－1110.

［2］Tanabe H，Yagihashi A，Tsuji N，et al.Expression of survivin mRNA and livin mRNA in non-small-cell lung cancer［J］.Lung Cancer，2004，46(3):299 －304.

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［4］Gazzaniga P，Gradilone A，Giuliani L，et al.Expression and prognostic significance of LIVIN，SURVIVIN and other apoptosis-related genes in the progression of superficial bladder cancer［J］.Ann Oncol，2003，14(1):85 －90.

［5］Vernillo R，Lorenzi B，Banducci T，et al.Immunohistochemical expression of p53 and Ki67 in colorectal adenomas and prediction of malignancy and development of new polyps［J］.Int J Biol Markers，2008，23(2):89 －95.

［6］Taheri ZM，Mehrafza M，Mohammadi F，et al.The diagnostic value of Ki-67 and repp86 in distinguishing between benign and malignant mesothelial proliferations［J］.Arch Pathol Lab Med，2008，132(4):694－697.