王 沖，華子春

(南京大學(xué) 醫(yī)藥生物科技國家重點實驗室，江蘇 南京 210093)

白藜蘆醇(Resveratrol)是一種非黃酮類的多酚類化合物，廣泛存在于花生、紅葡萄和漿果類等植物果實中［1］。在自然界，白藜蘆醇是一種天然植物抗毒素，能夠抵御真菌感染。1963年，Nonomura等首先提出白藜蘆醇是某些治療炎癥、脂類代謝和心臟疾病等草藥的有效成分。目前研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇還具有抗氧化，抗炎及抗腫瘤等作用，其中抗腫瘤作用研究最為廣泛。白藜蘆醇對慢性心臟疾?。?］和腫瘤［3-6］的預(yù)防作用已得到證實。近年來，白藜蘆醇的免疫調(diào)節(jié)作用逐漸受到重視，多項研究顯示白藜蘆醇具有治療白血病和自身免疫性疾病的潛在功效。

1 白藜蘆醇對白血病細(xì)胞的細(xì)胞周期抑制和促凋亡作用

1998年，Ragione等［7］首次報道30μmol/L白藜蘆醇能夠完全抑制急性粒細(xì)胞白血病HL-60細(xì)胞的增殖，并將細(xì)胞周期阻滯在S期。但這種影響是可逆的，除去白藜蘆醇后細(xì)胞周期恢復(fù)正常。Dorrie等［8］探討了白藜蘆醇誘導(dǎo)急性淋巴細(xì)胞性白血病ALL凋亡的機理，發(fā)現(xiàn)這一凋亡信號主要走線粒體/caspase-9通路，而不依賴于CD95/caspase-8通路。

對于p53和p16缺陷的急性T淋巴細(xì)胞白血病CEMC7H2細(xì)胞，20μmol/L白藜蘆醇能夠使細(xì)胞周期被阻滯在S期，并誘導(dǎo)其凋亡［9］。Fas及Fas L的拮抗型抗體并不影響白藜蘆醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用，并且caspase-8缺陷的Jurkat細(xì)胞對白藜蘆醇同樣敏感，同樣說明白藜蘆醇的誘導(dǎo)凋亡的作用不依賴于Fas/caspase-8通路。進(jìn)一步研究顯示，caspase-6似乎是白藜蘆醇誘導(dǎo)凋亡作用的關(guān)鍵起始caspase［9］。

體外實驗表明，白藜蘆醇抑制鼠急性淋巴細(xì)胞白血病L1210細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡，以及影響其細(xì)胞周期，且呈劑量和時間依賴性。進(jìn)一步體內(nèi)實驗的結(jié)果表明，白藜蘆醇對L1210荷瘤小鼠的天然和獲得性免疫系統(tǒng)具有劑量相關(guān)性的影響。荷瘤小鼠體內(nèi)IL-6水平上升，而用白藜蘆醇治療后IL-6水平下降;而且白藜蘆醇還下調(diào)了抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)。體內(nèi)淋巴細(xì)胞的增殖和NK細(xì)胞活性均可見增強［10］。

最近，Liu等［11］提出白藜蘆醇對慢性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞K562細(xì)胞周期阻滯及增殖抑制的作用機理可能與誘導(dǎo)非折疊蛋白反應(yīng)(unfold protein response，UPR)相關(guān)。蛋白質(zhì)正確折疊需要一套復(fù)雜的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白復(fù)合體機制。在缺氧、氧化應(yīng)激、異常糖基化反應(yīng)以及鈣離子穩(wěn)態(tài)失衡等情況下，未折疊蛋白質(zhì)增多。當(dāng)超出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的處理能力時，可導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激［12］。細(xì)胞自身通過改變其轉(zhuǎn)錄和翻譯過程，減少蛋白的合成，降低進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的蛋白量，同時上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中分子伴侶和折疊蛋白的表達(dá)，增強內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的蛋白折疊功能;細(xì)胞還可以通過上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白降解途徑的相關(guān)基因表達(dá)，加速未折疊蛋白的降解過程。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)生的這種適應(yīng)性反應(yīng)，稱作UPR。白藜蘆醇處理后，可觀察到細(xì)胞中一系列UPR反應(yīng)的標(biāo)志，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激特異性的XBP-1的剪切，GRP78和CHOP的轉(zhuǎn)錄上調(diào)，以及eIF2-α的磷酸化［11］。

2 白藜蘆醇對免疫細(xì)胞的作用

Shakibaei等［13］用白藜蘆醇處理體外培養(yǎng)的人軟骨原代細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其可降低IL-1β引起的軟骨特異性Ⅱ型膠原和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)受體beta1-integrin的表達(dá)抑制作用，且呈時間依賴性。白藜蘆醇可以抑制促炎癥細(xì)胞因子IL-1β刺激引起的人軟骨細(xì)胞VEGF、MMP-3、MMP-9以及COX-2的表達(dá)。這些基因都是受到NF-κB調(diào)控的，進(jìn)一步研究白藜蘆醇對NF-κB信號通路的影響，發(fā)現(xiàn)其抑制蛋白酶體的活性，阻礙了IκBα(NF-κB抑制劑)的降解，從而抑制p65的磷酸化和進(jìn)核，但不影響 IκBα的磷酸化和泛素化。NF-κB介導(dǎo)的caspase-3激活和PARP的剪切也同樣被抑制［13］。另一項體外研究同樣顯示了白藜蘆醇對IL-1β的拮抗作用。IL-1β抑制人軟骨細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡的作用均可被白藜蘆醇抑制。進(jìn)一步實驗表明，白藜蘆醇通過抑制IL-1β下游ROS和p53的表達(dá)，來發(fā)揮其抗炎功能［14］。白藜蘆醇可能具有治療骨關(guān)節(jié)炎、保護(hù)軟骨的潛在作用。

Tao等［15］研究了白藜蘆醇對吞噬細(xì)胞中趨化因子受體的影響。白藜蘆醇在非細(xì)胞毒性的濃度下可抑制吞噬細(xì)胞對一些趨化因子的趨化反應(yīng)以及鈣離子釋放。微摩爾濃度的白藜蘆醇可顯著抑制吞噬細(xì)胞對甲?；氖荏wFPR配體的反應(yīng)，降低超氧化物陰離子的產(chǎn)生，并抑制FPR激動劑引起的ERK1/2磷酸化和NF-κB的激活。這些結(jié)果顯示，對趨化因子受體功能的影響可能是白藜蘆醇抗炎作用的機理之一。因此，對于趨化因子受體激活介導(dǎo)的一些免疫性疾病，白藜蘆醇具有潛在的治療效果。

于良等［16］研究不同濃度白藜蘆醇與環(huán)孢霉素A聯(lián)用時，對人外周血T細(xì)胞(PBTC)的增殖、淋巴細(xì)胞母細(xì)胞化以及IL-2、INF-γ產(chǎn)生的影響。當(dāng)白藜蘆醇濃度在2.5mg/L以上時，PBTC的增殖和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率明顯降低;當(dāng)濃度在5mg/L以上時，培養(yǎng)上清中 IL-2、INF-γ含量顯著下降;在2.5mg/L以上時與環(huán)孢霉素A具有協(xié)同效應(yīng)，因此白藜蘆醇和環(huán)孢霉素A聯(lián)用可增強免疫抑制作用。

Falchetti等［17］的實驗表明，白藜蘆醇對CD3/CD28抗體刺激人外周血單核細(xì)胞(PBMC)產(chǎn)生的反應(yīng)具有雙重功效。低濃度(0.625～0.25μg/mL)白藜蘆醇刺激CD4+/CD8+T細(xì)胞中IL-2、IL-4和INF-γ的表達(dá)和分泌，而高濃度(10μg/mL)時則有抑制作用;同樣，低濃度的白藜蘆醇可激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)和自然殺傷(NK)細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，而在高濃度下則抑制。值得注意的是，CD8+T細(xì)胞比CD4+T細(xì)胞對白藜蘆醇更敏感;實驗中起免疫激活作用的白藜蘆醇的濃度與大鼠口服紅葡萄酒后血漿中白藜蘆醇的濃度相當(dāng)。這一結(jié)果僅顯示在體外，白藜蘆醇對免疫細(xì)胞的功能具有劑量相關(guān)性的調(diào)節(jié)作用，并不僅是免疫抑制。

Boscolo等［18］的體外實驗顯示，100μmol/L白藜蘆醇抑制PHA刺激引起的PBMC的增殖，并強烈抑制PBMC產(chǎn)生INF-γ和TNF-α。但當(dāng)濃度降低至10～100 nmol/L時，抑制作用就消失。在紅葡萄酒中，白藜蘆醇的濃度通常在10μmol/L左右，因此飲用紅酒并不會引起免疫抑制反應(yīng)。

Gao等［19］通過體內(nèi)及體外實驗驗證了白藜蘆醇的免疫調(diào)節(jié)作用。體外實驗中，25μmol/L白藜蘆醇對有絲分裂原/抗原激活的T細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到90%。而體內(nèi)試驗證明，80mg/kg白藜蘆醇劑量(該劑量是對心臟疾病起作用劑量的10倍)不會引起血液或造血毒性，只是輕微降低了T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。

Sharma等［20］也已證明白藜蘆醇能夠抑制T細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的活性。其作用機理可能是白藜蘆醇能夠降低CD28和CD80分子的表達(dá)，并上調(diào)CTLA-4的表達(dá)量。Yang等［21］通過EGT荷瘤小鼠研究發(fā)現(xiàn)，4mg/kg白藜蘆醇能夠降低Treg細(xì)胞的數(shù)量并減少TGF-β的分泌。這些結(jié)果表明，白藜蘆醇對CD4+CD25+細(xì)胞亞群有抑制作用，使荷瘤小鼠腫瘤周圍微環(huán)境不利于腫瘤的生長。不過，也有實驗表明白藜蘆醇對正常淋巴細(xì)胞中Treg細(xì)胞數(shù)量無影響［22］。

3 白藜蘆醇的抗炎作用

白藜蘆醇可以降低心肌炎，骨關(guān)節(jié)炎，胰腺炎，視神經(jīng)炎等免疫性疾病的嚴(yán)重程度。Singh等［23］建立了一個多發(fā)性硬化癥的動物模型，研究白藜蘆醇對自身免疫性疾病的治療作用。每天口服100mg/kg白藜蘆醇能夠降低實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠的臨床癥狀和炎癥反應(yīng)，使骨髓中的炎癥細(xì)胞發(fā)生了顯著凋亡，并且血清中 TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-9、IL-12、MCP-1、RANTES和Eotaxin 等多種細(xì)胞因子和趨化因子含量明顯降低，但I(xiàn)L-17和G-CSF含量升高。隨后的體外研究表明，白藜蘆醇主要引起活化T細(xì)胞的凋亡，而對未活化的T細(xì)胞沒有顯著作用。凋亡信號主要通過活化芳香烴受體和雌激素受體介導(dǎo)，并與AhR、Fas、Fas L的表達(dá)上調(diào)相關(guān)，并且caspase-8和caspase-9均被激活。因此，白藜蘆醇可誘導(dǎo)活化T細(xì)胞的凋亡，具有治療炎癥和自身免疫性疾病的潛在療效。

在實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠中，T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤到腦中，產(chǎn)生 IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-6 等細(xì)胞因子，引起自身免疫和神經(jīng)炎癥。這似乎與Singh等［23］發(fā)現(xiàn)的白藜蘆醇引起的IL-17上調(diào)相矛盾。Imler等［24］進(jìn)一步研究了白藜蘆醇治療自身免疫性腦脊髓炎的機理，證實了白藜蘆醇確實能引起IL-17上調(diào)，但發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇誘導(dǎo)IL-17+IL-10+T細(xì)胞，也就是Th17reg細(xì)胞，以及CD4(－)IFN-γ +NK細(xì)胞向腦部浸潤。同時，白藜蘆醇抑制巨噬細(xì)胞IL-6、IL-12/23 p40的表達(dá)。認(rèn)為這兩點是白藜蘆醇緩解自身免疫性腦脊髓炎癥狀的關(guān)鍵機制。

Lee等［25］建立動物模型，考察了白藜蘆醇對哮喘病的作用。白藜蘆醇顯著抑制血漿和支氣管灌洗液中Th-2型細(xì)胞因子IL-4和IL-5的含量，并顯著降低氣管高反應(yīng)性和黏液高分泌，效果和地塞米松相當(dāng)。另外也有文獻(xiàn)報道白藜蘆醇可降低支氣管灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量，通過抑制炎癥因子的合成和釋放起到對脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用［26］。

4 白藜蘆醇在免疫性疾病治療中的意義及展望

大量研究表明，白藜蘆醇對正常淋巴細(xì)胞無毒性，僅抑制其細(xì)胞增殖，而對白血病細(xì)胞等不正常淋巴細(xì)胞具有顯著的促凋亡效果。這種生物活性為白藜蘆醇在抗炎及治療免疫性疾病方面提供了廣闊的應(yīng)用前景，白藜蘆醇有望成為一種新型的針對多種免疫性疾病的治療劑。

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