劉 建， 湯德元*，李春燕，羅險(xiǎn)峰，甘振磊，王 鳳，郝 飛

(1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴陽(yáng) 550025；2.貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴陽(yáng) 550008)

豬藍(lán)眼病(blue eye disease，BED)是由藍(lán)眼病副黏病毒（blue eye paramyxovirus，BEP），又稱為豬副黏病毒（Porcine paramyxovirus）感染所引起的以豬中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂，生殖障礙和角膜渾濁、發(fā)藍(lán)等為主要特征的疫病。該病主要在墨西哥發(fā)生，2001年美國(guó)也報(bào)道發(fā)生本病，目前歐洲和亞洲等尚無(wú)有關(guān)本病的報(bào)道[1]。

1 病原

本病病原為藍(lán)眼病副黏病毒（blue eye paramyxovirus，BEP），又稱為豬副黏病毒（Porcine paramyxovirus），同時(shí)由于該病首次發(fā)生在墨西哥中部La-Pieda-Michoacan地區(qū)及其周圍，因此，根據(jù)其首次分離地命名，該病原又被稱為拉帕丹密考克病毒(La-Pieda-Michoacan virus，LPMV)。從形態(tài)學(xué)和理化特性來(lái)看，該病毒屬于副黏病毒科(Paramyxoviridae)的腮腺炎病毒屬(Rubulavirus)，BEP的形態(tài)特征與其他副黏病毒相似。電鏡下可見(jiàn)病毒粒子呈現(xiàn)多形性，但以圓球形為主，未見(jiàn)絲狀體，大小不一，直徑在70～120 nm。外部包有脂質(zhì)囊膜，囊膜上有纖突（或稱囊膜突起）長(zhǎng)6～8 nm，核衣殼直徑20 nm，長(zhǎng)1 000～1 630 nm或更長(zhǎng)，呈螺旋對(duì)稱，位于病毒粒子中央。BEP的基因組是單股負(fù)鏈RNA，長(zhǎng)約16～20 kb，分子質(zhì)量為5×106～7×106[2]。用甲硫丁氨酸35S或葡萄糖胺3H標(biāo)記BEP感染的IBRS細(xì)胞，編碼的病毒蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳，發(fā)現(xiàn)至少有6種病毒結(jié)構(gòu)蛋白，分子質(zhì)量分別為200 ku、68 ku、66 ku、59 ku、52 ku和40 ku。后來(lái)研究逐步證實(shí)，200 Ku大小的結(jié)構(gòu)蛋白為具有RNA聚合酶活性的L蛋白、68 ku大小的的結(jié)構(gòu)蛋白為核衣殼NP蛋白、66 ku大小的結(jié)構(gòu)蛋白為具有血凝素和神經(jīng)氨酸酶活性的HN蛋白、59 ku大小的結(jié)構(gòu)蛋白為融合蛋白F、52 ku大小的結(jié)構(gòu)蛋白為磷酸化蛋白P、40 ku大小的結(jié)構(gòu)蛋白為基質(zhì)蛋白M。其中5種能產(chǎn)生明顯的免疫沉淀，L蛋白和HN蛋白形成病毒粒子表面2種較大的纖突，融合蛋白F則形成較小的纖突，而病毒的毒力主要取決于HN蛋白。通過(guò)對(duì)M蛋白和HN蛋白的研究證明BEP與腮腺炎病毒（Mumps Virus，MuV），猿猴病毒5(Simian virus，SV5)和副流感病毒Parainfluenza virus type 2 (PIV-2) 和type 4 (PIV-4)具有很高的同源性，氨基酸同源性在40%左右[3-4]。

BEP能在Vero細(xì)胞、PK15細(xì)胞、BHK21細(xì)胞、牛和雞胚原代細(xì)胞等多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖，產(chǎn)生細(xì)胞病變（CPE），融合或形成胞漿內(nèi)包涵體。BEP能被氯仿、福爾馬林、乙醚、β-丙內(nèi)酯滅活，經(jīng)福爾馬林滅活后，病毒失去血凝活性。該病毒對(duì)溫度敏感，在56 ℃4 h可被滅活，易被洗滌劑滅活[5]。BEP能凝集哺乳動(dòng)物和禽類的紅細(xì)胞，其中血凝價(jià)最高的為雞、豚鼠和火雞紅細(xì)胞。病毒在扁桃體、嗅球和中腦中含量最高，尤其在30日齡以上病豬的嗅球和中腦組織內(nèi)的病毒效價(jià)極高。

2 流行病學(xué)

2.1 傳染源

病豬和亞臨床感染豬是主要的傳染源。此外，被污染的運(yùn)輸工具和圈舍也是一個(gè)傳染來(lái)源。

2.2 傳播途徑

BEP主要經(jīng)接觸傳播，噴嚏、咳嗽和呼吸道散毒是主要的傳播方式，帶有病毒的飛沫和灰塵也可傳播該病，部分病毒也可通過(guò)尿液排出體外，病豬的不合理運(yùn)輸可導(dǎo)致疫情擴(kuò)散。此外，鳥(niǎo)類、人和用具也是本病的傳播途徑之一。

2.3 易感動(dòng)物

豬是目前已知唯一自然感染BEP后出現(xiàn)臨床癥狀的動(dòng)物，仔豬最易感，發(fā)病率為20%～50%。一旦發(fā)病，其死亡率迅速升高，可達(dá)90%，在短期內(nèi)下降。實(shí)驗(yàn)室通過(guò)自然途徑接種3～17日齡仔豬，則會(huì)引起嚴(yán)重的神經(jīng)癥狀最終導(dǎo)致死亡，3日齡仔豬接種后6～8 d即死亡或?yàn)l于死亡，17日齡仔豬接種后有30%感染發(fā)病。犬、貓和野豬感染后無(wú)癥狀，但有抗體產(chǎn)生。

2.4 流行特點(diǎn)

該病一年四季皆有發(fā)生，但尤以4-7月份為甚。自然感染豬產(chǎn)生的BEP抗體?？沙掷m(xù)終生。但是，該病可在易感的后代和新引進(jìn)的易感豬群中重新暴發(fā)。該病主要出現(xiàn)在墨西哥，2001年美國(guó)也報(bào)道發(fā)生本病，其他國(guó)家目前尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。在連續(xù)生產(chǎn)的豬場(chǎng)中，BED呈周期性流行。

3 病毒入侵細(xì)胞機(jī)制與發(fā)病機(jī)理

副黏病毒囊膜中與融合功能有關(guān)的糖蛋白有2種，即具有血凝素和神經(jīng)氨酸酶活性的HN蛋白和融合糖蛋白(F)，其中HN蛋白可以與細(xì)胞的含唾液酸的受體結(jié)合，具有很高的親和性，直接介導(dǎo)病毒與細(xì)胞的附著；融合糖蛋白(F)則介導(dǎo)病毒囊膜與宿主細(xì)胞表面脂蛋白膜的融合。雖然目前有2種HN嚴(yán)格依賴性副黏病毒的HN蛋白激活F蛋白，并引發(fā)膜融合以入侵宿主細(xì)胞的假說(shuō)，一種認(rèn)為HN蛋白與F蛋白的相互作用只是發(fā)生在HN蛋白與受體細(xì)胞結(jié)合之后，并引發(fā)F蛋白的構(gòu)象變化，從而介導(dǎo)病毒囊膜與宿主細(xì)胞表面脂蛋白膜的融合[6-7]；第二種則認(rèn)為HN蛋白與受體細(xì)胞結(jié)合之前就以多聚體構(gòu)象存在，當(dāng) HN蛋白與受體結(jié)合后多聚體被破壞，使融合肽插入到宿主細(xì)胞膜內(nèi)，并導(dǎo)致F蛋白脫離下來(lái)，最終HRl和 HR2形成的六聚體結(jié)構(gòu)誘導(dǎo)膜融合發(fā)生，近年來(lái)的研究結(jié)果更傾向于認(rèn)為第二種假說(shuō)的成立。F蛋白是副黏病毒粒子的2種包膜突起之一，它參與了病毒包膜和細(xì)胞膜的融合，F(xiàn)蛋白的合成先以無(wú)活性的F0前體存在，所有副黏病毒的膜融合活性和血溶活性均是由F0糖蛋白引起的。在膜融合過(guò)程中，F(xiàn)0糖蛋白發(fā)揮融合作用時(shí)發(fā)生一系列的構(gòu)象變化，必須經(jīng)過(guò)—種類似于胰酶的蛋白酶裂解成由二硫鍵連接的亞基F1和F2，才能誘導(dǎo)膜融合。F0裂解產(chǎn)生的F1共有—個(gè)新的N端。這—區(qū)域的氨基酸序列呈高度疏水性，且在副黏病毒科各屬之間十分保守。F1片段的七肽重復(fù)區(qū)域(heptad repeat)HRl和HR2形成穩(wěn)定的六螺旋束結(jié)構(gòu)引發(fā)膜融合，這在禽副黏病毒-1(新城疫病毒)(APMV-1，NDV)、猿副流感病5(SV5)、呼吸道合胞體病毒(RSV)、麻疹病毒(MV)，以及腮腺炎病毒(MuV)已經(jīng)得到證明。而且已證明體外合成的HRl或HR2可通過(guò)特異性競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合其配體以抑制發(fā)夾三聚體構(gòu)象的形成，繼而阻遏病毒膜融合過(guò)程。

F0蛋白的作用在于能使病毒粒子接觸處的細(xì)胞膜脂質(zhì)雙分子層不穩(wěn)定而與病毒包膜融合，一旦膜融合開(kāi)始，F(xiàn)0隨即在細(xì)胞膜上水平擴(kuò)散．促進(jìn)病毒包膜與細(xì)胞膜進(jìn)行磷脂分子的交換，最終導(dǎo)致病毒包膜與細(xì)胞膜完全融合。對(duì)副黏病毒的最新研究還表明，病毒入侵宿主是個(gè)很復(fù)雜的過(guò)程，除HRl和HR2區(qū)域外，F(xiàn)蛋白的HR-C區(qū)、七肽重復(fù)區(qū)域HR3、HN蛋白的球形頭部區(qū)域與莖部結(jié)構(gòu)都與膜融合有關(guān)，但這些功能區(qū)調(diào)節(jié)膜融合的作用機(jī)理尚待研究。

病毒經(jīng)口、鼻侵入機(jī)體后，首先在上呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，進(jìn)入中樞神經(jīng)前繼續(xù)在扁桃體和肺組織中復(fù)制，引起局部炎癥和免疫反應(yīng)，如淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、血管通透性增加及IgA分泌等。然后，增殖后的病毒進(jìn)入血循環(huán)，發(fā)生病毒血癥，擴(kuò)散入不同器官，如中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。病毒侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)可能是通過(guò)脈絡(luò)膜擴(kuò)散，病毒一旦進(jìn)入神經(jīng)元細(xì)胞，便可沿神經(jīng)傳導(dǎo)路徑而廣泛分布。散布至第一次未曾侵入的其他器官，引起炎癥。試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)是病毒持續(xù)性感染的作用位點(diǎn)，病毒的這種持續(xù)性感染能夠逃逸宿主特異性免疫的攻擊。

4 臨床癥狀

豬藍(lán)眼病的癥狀因感染豬的年齡不同差異較大。2～15日齡仔豬最易感，癥狀出現(xiàn)快，發(fā)病初期發(fā)熱、厭食、被毛粗亂弓背、有時(shí)伴有便秘或腹瀉，進(jìn)而表現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)、虛脫、強(qiáng)直（多在后肢）肌肉震顫、姿勢(shì)異常呈犬坐樣等神經(jīng)癥狀。仔豬突然由平臥位逐漸轉(zhuǎn)為側(cè)臥，有的出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，驅(qū)趕時(shí)一些患豬異常興奮、尖叫或劃水樣運(yùn)動(dòng)。其他癥狀有嗜睡、病豬不愿活動(dòng)、瞳孔擴(kuò)大、失明間有眼球震顫。有些仔豬有結(jié)膜炎，表現(xiàn)為眼瞼腫脹和流淚，有1%～5%的病豬呈單側(cè)或雙側(cè)角膜混濁，一般會(huì)自然康復(fù)。少數(shù)病豬在出現(xiàn)癥狀后48 h死亡，一般經(jīng)4～6 d死亡。在BED暴發(fā)階段約有20%～60%仔豬被感染，病死率極高，可達(dá)到87%～90%。30日齡以上仔豬癥狀輕、病程短、呈一過(guò)性，表現(xiàn)厭食、發(fā)熱、噴 和咳嗽、神經(jīng)癥狀少見(jiàn)，不伴有其他癥狀，感染率僅為1%～4%，很少死亡。30日齡內(nèi)的感染仔豬常死于腦炎,死亡率很高。母豬大多沒(méi)有臨床癥狀，個(gè)別母豬在產(chǎn)前1～2 d食欲有所下降，部分母豬角膜混濁。妊娠母豬會(huì)出現(xiàn)持續(xù)性繁殖障礙，發(fā)病期間孕豬的返情率增加、產(chǎn)仔數(shù)下降、斷奶至發(fā)情間隔延長(zhǎng)。此外，死胎和木乃伊胎增多，造成產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)下降，妊娠母豬一般不發(fā)生流產(chǎn)，但在急性發(fā)病期，可見(jiàn)個(gè)別母豬流產(chǎn)。后備母豬和其他成年豬偶爾有角膜混濁。公豬感染后除少數(shù)有厭食和角膜渾濁外，一般不表現(xiàn)出臨床癥狀。大約有29%～73%的公豬會(huì)發(fā)生急性睪丸炎和附睪炎,精子活力下降,還有部分公豬睪丸和附睪明顯水腫，后期發(fā)展成萎縮，多為單側(cè)或變軟松弛，但嚴(yán)重者性欲喪失。另有報(bào)道，公豬感染BEP后,急性睪丸炎的發(fā)病率為28%，單側(cè)睪丸萎縮占66%,附睪炎發(fā)生率為78%，部分病豬精子活力則降為0。

5 病理變化

病豬無(wú)特征性肉眼病變。仔豬在肺前葉有輕微的肺炎病灶，大腦充血，腦脊髓液增多。眼球結(jié)膜水腫和不同程度的角膜混濁，以角膜水腫和前眼色素層炎為主要特征，角膜有囊泡和潰瘍，在虹膜、角膜內(nèi)皮、鞏膜和角膜中有中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)。仔豬有中度胃、膀胱擴(kuò)張，腹腔積有少量混有纖維素樣的液體，偶爾出現(xiàn)心包和腎出血，組織學(xué)變化在腦和脊髓較為多見(jiàn)，丘腦、中腦和大腦皮層表現(xiàn)為非化膿性腦脊髓炎，呈多病灶和彌漫性神經(jīng)膠質(zhì)增生，出現(xiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和網(wǎng)狀組織細(xì)胞的血管套現(xiàn)象。肺呈散在性間質(zhì)性肺炎，肺中膈由于單核細(xì)胞浸潤(rùn)而增厚。公豬睪丸和附睪腫大、水腫，初期為睪丸炎和附睪炎，后發(fā)展成睪丸萎縮，睪丸生殖上皮出現(xiàn)變性和壞死，有時(shí)附睪有肉芽腫。神經(jīng)細(xì)胞中不出現(xiàn)包涵體，這與豬的偽狂犬病有所不同。病理?yè)p傷程度和范圍因個(gè)體而異。

6 診斷方法

根據(jù)BED的典型臨診癥狀，如腦炎、角膜混濁、母豬繁殖障礙、前眼色素層炎、公豬睪丸炎和附睪炎等可對(duì)本病做出初步診斷。此外，非化膿性腦炎、角膜炎、睪丸炎和附睪炎等組織病理學(xué)變化可進(jìn)一步提供診斷依據(jù)。本病的確診則依賴于血清學(xué)方法和病毒的分離鑒定。目前已建立的用于檢測(cè)BED的血清學(xué)方法主要是血凝抑制試驗(yàn)（HI試驗(yàn)）、病毒中和試驗(yàn)、微量中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA試驗(yàn)）等，這些診斷方法可用于檢查抗體陽(yáng)性豬，診斷時(shí)最好采集相隔15 d的雙份血清用于本病的診斷。對(duì)本病做鑒別診斷時(shí)，須與其他疾病所引起的腦炎和繁殖障礙嚴(yán)格區(qū)分，尤其與豬繁殖與呼吸綜合征和偽狂犬病區(qū)別診斷。這些傳染病中，只有豬藍(lán)眼病副黏病毒引起角膜混濁（可占感染豬的30%）和公豬睪丸炎及附睪炎。

7 預(yù)防和治療

在建立和更新種豬群時(shí)，種豬必須來(lái)自健康豬群。引種須經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為陰性的方可混群。嚴(yán)格控制外來(lái)人員和車輛進(jìn)場(chǎng)，防止野鳥(niǎo)和鼠類入侵，采取全進(jìn)全出的飼養(yǎng)方法。良好的管理，保持清潔衛(wèi)生，提供適宜的豬舍條件和營(yíng)養(yǎng)水平，可有效地減少該病的發(fā)生。豬藍(lán)眼病目前尚無(wú)特效的治療方法。豬僅有角膜混濁者可自然康復(fù)，出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的一般以死亡告終。臨床感染豬(有神經(jīng)癥狀和不育公豬)要及時(shí)隔離，并合理地飼喂抗菌藥以防繼發(fā)感染，病死豬應(yīng)進(jìn)行無(wú)害化處理。目前，已有實(shí)驗(yàn)室用細(xì)胞培養(yǎng)和雞胚增殖藍(lán)眼病副黏病毒制成油乳劑疫苗或氫氧化鋁佐劑疫苗，可用于本病的控制，但尚未商品化。

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