賀瑜

結(jié)核病仍是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病之一，結(jié)核患者的細(xì)菌學(xué)檢查不僅是發(fā)現(xiàn)傳染源的主要途徑和手段，也是結(jié)核病確診和考核療效的可靠標(biāo)準(zhǔn)。但是傳統(tǒng)方法涂片鏡檢檢出率低，培養(yǎng)法需時(shí)間長(zhǎng);提高痰菌陰性肺結(jié)核患者的診斷率并縮短確診時(shí)間是結(jié)核病防治工作面臨的主要問(wèn)題，特別在縣級(jí)結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)急需一種快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)、易推廣的結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法。

1 方法

目前主要實(shí)驗(yàn)診斷方法有涂片鏡檢法、LJ培養(yǎng)法、快速培養(yǎng)法、免疫法、分子生物法、噬菌體法。

1.1 涂片鏡檢法 快速、便宜，但是檢出率低，漏診率高，無(wú)法鑒別死活菌。陳中秀，謝清波把痰標(biāo)本先液化濃縮處理后涂片抗酸染色檢查抗酸桿菌，明顯提高抗酸桿菌陽(yáng)性檢出率［1］。楊華林，譚云洪報(bào)道液基夾層杯技術(shù)檢測(cè)痰中抗酸桿菌，也是利用了離心集菌涂片的方法使涂片更均勻和痰標(biāo)本陽(yáng)性檢出率提高［2］。

1.2 LJ培養(yǎng)法 是結(jié)核菌檢驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn) 但是檢測(cè)周期超長(zhǎng):約8周;而且有一定比率假陽(yáng)性，因各種分枝桿菌均能生長(zhǎng)，需進(jìn)一步鑒定。

1.3 快速培養(yǎng)檢測(cè)法 BACTEC 960自動(dòng)培養(yǎng)儀是目前國(guó)內(nèi)外常用的分枝桿菌快速檢測(cè)系統(tǒng)，有研究顯示陽(yáng)性標(biāo)本檢出時(shí)間最早是3～6 d［3］，該方法陽(yáng)性率高，能快速檢測(cè)分枝桿菌，靈敏度高，但是需要專用儀器，專用試劑，價(jià)格高，需進(jìn)一步鑒定分枝桿菌種類。翁繩鳳，劉威使用美國(guó)BD公司生產(chǎn)BACTECTMMicroMGITTM熒光判讀器開(kāi)展分枝桿菌快速檢測(cè)，通過(guò)與羅氏法和BACTEC 960自動(dòng)培養(yǎng)法的培養(yǎng)結(jié)果比較認(rèn)為BACTECTMMicroMGITTM熒光判讀器分枝桿菌快速檢測(cè)法具有操作簡(jiǎn)單快捷，陽(yáng)性率高，敏感性強(qiáng)且經(jīng)濟(jì)實(shí)用的特點(diǎn)［4］。

1.4 免疫學(xué)方法 優(yōu)點(diǎn)是快速;但是靈敏度低，有一定的假陽(yáng)性和假陰性;特異性差;結(jié)果判斷帶有主觀性;缺乏有效的質(zhì)控手段。韓敏，樂(lè)軍報(bào)道免疫層析法試劑盒快速鑒別結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌，特異性為100%;敏感性為98.9%;尤其在液體培養(yǎng)物鑒定方面具有優(yōu)勢(shì)，無(wú)需額外實(shí)驗(yàn)室設(shè)備［9］。

1.5 結(jié)核桿菌DNA擴(kuò)增法-PCR 診斷肺結(jié)核具有快速、特異、敏感的特點(diǎn)，但是需要昂貴的儀器設(shè)備，檢測(cè)成本較高，屠德華認(rèn)為環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增(LAMP)技術(shù)具有快速、敏感和特異性高的優(yōu)點(diǎn)［5］。

1.6 噬菌體法可檢測(cè)痰液、胸水、腹水、腦脊液、尿、骨髓等多種標(biāo)本，葉佳慶，熊國(guó)亮等采用噬菌體生物擴(kuò)增法技術(shù)對(duì)196例結(jié)核標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，認(rèn)為陽(yáng)性率高于涂片和羅氏培養(yǎng)，該方法敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便，對(duì)結(jié)核病臨床診斷有較高的應(yīng)用價(jià)值［6］。也有文獻(xiàn)報(bào)道該技術(shù)敏感性、特異性不夠，且反應(yīng)時(shí)間、溫度、噬菌體活性、殺菌劑濃度和混勻情況等均可影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性［7］。

1.7 目前其他新診斷技術(shù)如 超亮發(fā)光二極管(LED)熒光顯微鏡，價(jià)格較低，可提高敏感性，縮短鏡檢時(shí)間［5，8］。

2 討論

快速培養(yǎng)法和分子生物法檢測(cè)快速、靈敏度高，但是檢測(cè)成本較高;免疫學(xué)方法檢測(cè)結(jié)核抗體方便、簡(jiǎn)單，但是靈敏度低，特異性差;涂片法直觀、簡(jiǎn)便、價(jià)廉，仍將是結(jié)核病實(shí)驗(yàn)診斷的重要手段;噬菌體法敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便，在縣級(jí)結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)可以開(kāi)展，同時(shí)檢測(cè)可從不同方面滿足臨床需要，提高肺結(jié)核的診斷水平。

［1］陳中秀，謝清波.聚集沉淀涂片與直接涂片抗酸染色法檢測(cè)抗酸桿菌的應(yīng)用比較.中國(guó)防癆雜志，2009，31(4):225-226.

［2］楊華林，譚云洪，等.液基夾層杯技術(shù)檢測(cè)痰中抗酸桿菌.中國(guó)防癆雜志，2010，32(5):279-282.

［3］姚剛，張淑娟.幾種結(jié)核桿菌檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià).中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2007，12(11):1699-1700.

［4］翁繩鳳，劉威.分枝桿菌快速檢測(cè)方法及其應(yīng)用.臨床肺科雜志，2012，17(1):73-74.

［5］屠德華.迎接結(jié)核病控制的創(chuàng)新時(shí)代.中國(guó)防癆雜志，2010，32(3):121-122.

［6］葉佳慶，熊國(guó)亮，等.噬菌體生物擴(kuò)增法檢測(cè)不同標(biāo)本對(duì)結(jié)核病臨床診斷的意義.實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2009，10(6).

［7］唐神結(jié)，高文，主編.臨床結(jié)核病學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社，2011:35-64.

［8］尚美，劉冠，趙雁林，等.發(fā)光二極管顯微鏡實(shí)驗(yàn)室診斷效果評(píng)價(jià).中國(guó)防癆雜志，2010，32(5):275-279.

［9］韓敏，樂(lè)軍.免疫層析法試劑盒快速鑒別結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌臨床菌株的應(yīng)用價(jià)值.中國(guó)防癆雜志，2010，32(5):290-291.