王勇 梁慶華 史錫文

uPA和FAK在髓母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及臨床意義

王勇 梁慶華 史錫文

目的研究尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase-type plasminogen，uPA)和粘著斑激酶(Focal Adhesion Kinase，F(xiàn)AK)在髓母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及臨床意義。方法應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)80例髓母細(xì)胞瘤中uPA和FAK的表達(dá)，結(jié)合臨床隨訪，使用Cox回歸統(tǒng)計(jì)分析和Spearman相關(guān)分析。結(jié)果uPA和FAK的染色定位于腫瘤細(xì)胞。Cox回歸分析顯示uPA和FAK是影響生存時(shí)間的獨(dú)立的預(yù)后因子，它與預(yù)后存在高度負(fù)相關(guān)關(guān)系。Spearman相關(guān)分析顯示uPA和FAK存在正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論uPA和FAK可能是預(yù)測(cè)髓母細(xì)胞瘤預(yù)后的獨(dú)立的預(yù)后因子。uPA和FAK兩者存在正相關(guān)關(guān)系。

髓母細(xì)胞瘤;uPA FAK;預(yù)后

髓母細(xì)胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)一種高度惡性的神經(jīng)上皮性腫瘤。腫瘤細(xì)胞的侵襲性生長(zhǎng)是一個(gè)多步驟的復(fù)雜過程，有多種生物化學(xué)因子參與其中。我們通過免疫組織化學(xué)方法研究髓母細(xì)胞瘤中uPA和FAK的表達(dá)情況，同時(shí)結(jié)合隨訪資料，以評(píng)估兩者與預(yù)后的關(guān)系及兩者之間的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料 1999～2010年河南省人民醫(yī)院神經(jīng)外科收治的髓母細(xì)胞瘤患者98例，其中隨訪、病理和病歷資料完整者80例。男47例;女33例。年齡3～47歲(平均12.6歲)。病程0.5～12個(gè)月(平均2.8個(gè)月)。切除范圍:全切除63例;次全切除15例;部分切除2例。75例行術(shù)后常規(guī)放療。外傷或深部手術(shù)中必須切除的淺部正常小腦組織10例。

1.2 試劑與方法 本實(shí)驗(yàn)采用LSAB法。單克隆抗體為Oncogene science公司產(chǎn)品，工作濃度為10 μg/ml。FAK多克隆抗體購自武漢博士德公司，工作濃度為1∶100。結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn):由有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)定。記錄觀察結(jié)果(包括陽性細(xì)胞種類、陽性染色程度)。在光鏡下，以腫瘤細(xì)胞胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。每張切片在相同放大倍數(shù)下，各選取陽性細(xì)胞最集中的10個(gè)視野，每個(gè)視野數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算出每張切片上陽性細(xì)胞的百分率。據(jù)此百分率分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型用于預(yù)后單因素和多因素分析，Spearman相關(guān)分析，SPSS13.0軟件做統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié)果

2.1 染色結(jié)果 在全部切片中，uPA和FAK免疫組化染色從完全不染色到廣泛深染均可見。兩者的陽性細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。正常小腦組織未見uPA和FAK染色。

2.2 隨訪結(jié)果 本組5年生存率為52.4%。uPA高、低表達(dá)組的例數(shù)分別為47和33例;其平均生存期分別為12.6和61.3個(gè)月。FAK高、低表達(dá)組的例數(shù)分別為52和28例;其平均生存期分別為11.8和60.6個(gè)月。

2.3 統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果 Spearman相關(guān)分析:通過對(duì)年齡、病程、腫瘤體積、切除范圍、放療、uPA、FAK、生存時(shí)間運(yùn)用Spearman相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)切除范圍、放療、uPA、FAK與生存時(shí)間相關(guān)(P＜0.05)，而且uPA與FAK也存在相關(guān)性(P＜0.05)。Cox分析結(jié)果:單因素分析結(jié)果表明，對(duì)于生存時(shí)間來說，切除范圍、放療、uPA、FAK與預(yù)后相關(guān)(P＜0.05)。年齡、性別、病程、腫瘤體積與預(yù)后無明顯相關(guān)(P＞0.05)。但多因素分析結(jié)果表明，對(duì)于生存時(shí)間來說，只有uPA、FAK是獨(dú)立的預(yù)后因子(P＜0.05)，其參數(shù)為正值，說明它是一個(gè)危險(xiǎn)因子。它們呈高表達(dá)，則患者的生存期短。

3 討論

腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的多步驟的腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞相互作用的連續(xù)過程。首先腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)成分發(fā)生粘附，之后腫瘤細(xì)胞分泌多種蛋白降解酶，以降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜成分。FAK在腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)成分粘附及信號(hào)傳導(dǎo)中起關(guān)鍵作用;而uPA在降解細(xì)胞外基質(zhì)中發(fā)揮重要作用。

關(guān)于FAK與髓母細(xì)胞瘤的關(guān)系中，Guessous等［1］通過研究髓母細(xì)胞瘤的細(xì)胞系發(fā)現(xiàn):FAK在腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移中起重要作用。在我們［2］的前期工作中，發(fā)現(xiàn)uPA在髓母細(xì)胞瘤中高表達(dá)。而本次研究中發(fā)現(xiàn)，髓母細(xì)胞瘤中的腫瘤細(xì)胞都可表達(dá)uPA和FAK。結(jié)合隨訪資料顯示，uPA或FAK高表達(dá)的患者，其平均生存時(shí)間均較低表達(dá)者短。隨后又發(fā)現(xiàn)，uPA、FAK兩者都為高表達(dá)的平均生存時(shí)間小于兩者之一為高表達(dá)者，后者的平均生存時(shí)間又小于兩者均為低表達(dá)者。通過Spearman相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)切除范圍、放療、uPA、FAK與生存時(shí)間相關(guān)(P＜0.05)。但在Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析中，未發(fā)現(xiàn)患者的年齡、性別、病程、腫瘤體積、切除范圍、放療與生存時(shí)間有關(guān)(P＞0.05)。上述結(jié)果亦表明切除范圍、放療不是敏感的預(yù)后指標(biāo)。因此，若術(shù)中全切除可能有很大風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)殘留部分瘤組織。同樣，若術(shù)后情況不允許立即放療，可適當(dāng)延緩進(jìn)行放療的時(shí)間。多因素Cox模型分析顯示，uPA和FAK分別作為獨(dú)立指標(biāo)最終進(jìn)入模型(P＜0.05)，結(jié)合單因素分析結(jié)果，表明uPA和FAK可作為預(yù)測(cè)髓母細(xì)胞瘤預(yù)后的指標(biāo)。兩者的表達(dá)水平與患者的生存時(shí)間呈高度負(fù)相關(guān)關(guān)系。

關(guān)于uPA和FAK的關(guān)系，我們通過相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)兩者具有相關(guān)性(P＜0.05)。兩者之間可能通過 uPA的受體(uPAR)起作用。Nalla等［3］發(fā)現(xiàn)在髓母細(xì)胞瘤的細(xì)胞系中，uPAR超表達(dá)可啟動(dòng)FAK信號(hào)系統(tǒng);而下調(diào)uPAR，可通過抑制FAK的磷酸化而減少腫瘤細(xì)胞的侵襲活動(dòng)。

綜上所述，uPA和FAK表達(dá)水平同髓母細(xì)胞瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)，提示uPA和FAK在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。

［1］ Guessous F，Yang Y，Johnson E，et al.Cooperation between c-Met and focal adhesion kinase family members in medulloblastoma and implications for therapy．Mol Cancer Ther，2012，11(2):288-297．

［2］ 王勇，毛伯鏞，程宏偉，等.uPA和KDR在髓母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及意義.中華神經(jīng)外科雜志，2003，19(2):106-108．

［3］ Nalla AK，Asuthkar S，Bhoopathi P，et al.Suppression of uPAR retards radiation-induced invasion and migration mediated by integrin β1/FAK signaling in medulloblastoma．PLoS One，2010，24(9):13006．

Expression and significance of urokinase-type plasminogen activator and FAK inmedulloblastoma

WANG Yong，LIANG Qing-hua，SHI Xi-wen.Department of Neurosurgery，Henan Provincial People's Hospital，Zhenzhou 450003，China

ObjectiveTo detect the expression and evaluate the clinical significance of urokinase-type plasminogen activator(uPA)and FAK inmedulloblastoma.MethodsLSAB(labelled streptavidin biotin method)immunohistochemical technique was applied for detecting the expression ofuPAand FAK in 80 patients withmedulloblastoma.The results were summarized by follow-up survey with Cox regression analysis and Spearman correlation analysis.ResultsThe staining for uPAand FAK was localized on tumor cells.Cox regression analysis showed that uPAand FAK were independent prognostic factor affecting survival，and they had a negative correlation with the prognosis.Moreover，UPA had a positive correlation with FAK.ConclusionuPA and FAK appears to be an independent marker for predicting the prognosis ofmedulloblastom.UPA had a positive correlation with FAK．

Medulloblastom;uPA;FAK;Prognosis

河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):201003116)

450003河南省人民醫(yī)院神經(jīng)外科