牛安琳

(河南省安陽(yáng)市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 河南安陽(yáng) 455000)

乙二胺四乙酸二鉀(EDTA—K2)抗凝對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響很小,特別適用于全血細(xì)胞分析,根據(jù)國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(tCSH)1993年文件建議,血細(xì)胞計(jì)數(shù)宜用EDTA鹽[1]。但近年來發(fā)現(xiàn)EDTA-K2抗凝導(dǎo)致假性血小板減少臨床上并不少見,我們對(duì)此進(jìn)行了研究,現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 臨床資料

(1)標(biāo)本來源:選取2011年1～6月門診健康體檢人員200例,其中男性110例,女性90例,年齡在22～58歲。(2)儀器:SYSMEX XE-5000血細(xì)胞分析儀,OLYMPUS顯微鏡。(3)方法:首先用常規(guī)方法檢測(cè)EDTA-k2抗凝靜脈血,按要求采集靜脈血于EDTA-K2真空抗凝管內(nèi)至2mL刻度處,檢驗(yàn)科收到標(biāo)本后,于室溫5min內(nèi)在自動(dòng)旋轉(zhuǎn)式混勻器上混勻,上機(jī)檢測(cè)血小板,及EDTA-K2抗凝血標(biāo)本分別放置30min、90min、2h、6h后各測(cè)定3次。同時(shí)采手指血按操作規(guī)程進(jìn)行手工計(jì)數(shù)(按照全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行計(jì)數(shù)[2]),用計(jì)數(shù)池直接計(jì)數(shù)。(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:使用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)處理數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

按照檢測(cè)方法對(duì)EDTA-K2抗凝血標(biāo)本進(jìn)行5min、30min、90min、2h、6h檢測(cè)血小板并與手工計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比,具體見表1。

3 討論

血小板在體內(nèi)主要參與止血與血栓形成,在止血血栓的病理生理過程中起著重要的作用,血小板的數(shù)量異?；蚬δ苋毕菔浅鲅约膊』蜓ㄐ约膊〉闹匾?因此血小板數(shù)量的檢測(cè)是臨床常用的檢驗(yàn)項(xiàng)目之一,它的計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性對(duì)指導(dǎo)臨床診斷和治療的重要指標(biāo),臨床非常重要,是臨床上最常用的檢測(cè)項(xiàng)目之一[3]。EDTA抗凝原理是與血液中的凝血因子Ⅳ(鈣離子)結(jié)合成螯合物,使其失去凝血作用,從而阻止血液凝固。EDTA-K2抗凝性強(qiáng),可抑制血小板原發(fā)性凝聚,使離體后的血小板離散成為單個(gè)顆粒,而對(duì)血小板計(jì)數(shù)的影響較小,有較好的穩(wěn)定性[4];因其對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響很小,特別適用于全血細(xì)胞分析,已被ICSH認(rèn)定并在臨床廣泛使用。

表1 檢測(cè)結(jié)果比較(±s)

表1 檢測(cè)結(jié)果比較(±s)

注:人工計(jì)數(shù)法與抗凝血放置5min、2h、6h血小板檢測(cè)比較,P＜0.05,有顯著差異性

計(jì)數(shù)方法 檢測(cè)值人工計(jì)數(shù) 222±54抗凝血放置時(shí)間5min 151±35 30min 218±53 90min 216±52 2h 199±46 6h 175±40

EDTA導(dǎo)致假性血小板減少原因很多:(1)依賴性假性血小板減少(PTCP)與血小板表面存在某種隱匿性抗原有關(guān)[4]。EDTA可引起血小板糖膜(GP)發(fā)生改變,使隱匿性抗原暴露,某些病人血漿中存在的某種自身抗體與這種抗原結(jié)合后的抗原抗體復(fù)合物激活了細(xì)胞膜中的磷酯酶,使血小板膜水解并釋放AA、ADP、5-TH、膠原、凝血酶原等血小板活性物質(zhì)。從而不同程度的活化血小板纖維蛋白原受體(FIR-B),促使血小板與纖維蛋白原受體結(jié)合后聚集成團(tuán),導(dǎo)致血小板假性減少。(2)EDTA-K2抗凝血中,血小板黏附、圍繞于中性粒細(xì)胞(或偶爾黏附于單核細(xì)胞)的現(xiàn)象[5],系EDTA和白細(xì)胞表面的IgG或Fc片段相互作用、非特異性結(jié)合血小板表面的GPⅡb所致,雖與疾病和藥物無關(guān),這些粘附、圍繞于中性粒細(xì)胞的血小板被誤計(jì)為白細(xì)胞,造成血小板假性減少EDTA—K2會(huì)使血小板形態(tài)發(fā)生變化,其外膜游離端向外伸展,從而在血小板周圍形成絲狀偽足,偽足相互纏繞形成血小板可逆性聚集,在用阻抗法做血小板計(jì)數(shù)時(shí),聚集體所產(chǎn)生的脈沖大于儀器預(yù)設(shè)的血小板脈沖值,血小板不被計(jì)入其結(jié)果內(nèi),從而使血小板數(shù)量減少。在一定時(shí)間段內(nèi),隨著時(shí)間的延長(zhǎng),抗凝劑與血液充分溶融,松散聚集的血小板由盤狀變?yōu)榍驙疃鸩浇饩?血小板計(jì)數(shù)逐步升高[6]。

[1]忠勇.準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板方法學(xué)研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)·臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)分冊(cè),2002,23(3):132～134.

[2]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:11.

[3]叢玉隆,王昌富,樂家新.血細(xì)胞自動(dòng)化分析后血涂片復(fù)審標(biāo)準(zhǔn)制定的原則與步驟[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008,31(7):732～735.

[4]孫楊,丘江.抗凝劑乙二胺四乙酸致血小板假性減少[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2008,5(8):504.

[5]傳清,吳建曾,趙錦,等.EDTA依賴性假性血小板減少癥一例[J].臨床血液學(xué)雜志,2006,19(4):246～247.

[6]施巍宇,郝婉瑩.EDTA依賴性假性血小板減少癥[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2004,27(10):719.