周積滿

(瀘溪縣人民醫(yī)院 湖南湘西 416100)

病毒性肝炎在臨床具有較強(qiáng)感染力、發(fā)病率較高,對(duì)人類(lèi)健康造成嚴(yán)重威脅的傳染性疾病,其中危害最大的是乙型肝炎(HBV),全球HBV表面攜帶者至2002年止,據(jù)WHO初步估計(jì)有4億以上,其中約有1.3億發(fā)生在我國(guó),且母嬰傳播所造成的感染約占30%～50%[1]。在對(duì)乙肝預(yù)后進(jìn)行預(yù)測(cè)、流行病學(xué)調(diào)查、獻(xiàn)血人員篩查、公共環(huán)境衛(wèi)生、乙型肝炎免疫水平等實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中,乙型肝炎表面抗原(HBaAg)、e抗原(HBeAg)、抗心抗體(抗-HBc)、表面抗體(抗-HBs)、e抗體(抗-HBe)等實(shí)用項(xiàng)目檢測(cè)的方法較為重要。本次研究選擇我院體檢某校新生為對(duì)象,分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和金標(biāo)快速法對(duì)HBV進(jìn)行檢測(cè),就臨床結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究對(duì)象4600例,行3～5mL靜脈血采集,將血清分離,初篩應(yīng)用反向被動(dòng)血球凝集試驗(yàn)(RPHA)的方法,將HBsAg陽(yáng)性的血清對(duì)乙肝HBaAg、抗-HBs、抗-HBc、HBeAg、抗-HBe分別用ELISA和金標(biāo)法平行進(jìn)行檢測(cè),隨機(jī)分為ELISA法組200例,金標(biāo)快速法組200例,2組對(duì)象在年齡、性別、病性、病程及HBeAg檢測(cè)方面比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 金標(biāo)快速檢測(cè)法 血清(血漿)與乙肝抗體(抗原)內(nèi)的相應(yīng)抗原(抗體)特異性結(jié)合以金、銀、硒等為標(biāo)志物,依據(jù)雙抗原(抗體)夾心原理,對(duì)該抗體(抗原)在經(jīng)組織化學(xué)的呈色反應(yīng)之后進(jìn)行定性檢測(cè)。先從冰箱中在試驗(yàn)前取出測(cè)試條,常溫1～2h放置后使用,依次在試驗(yàn)前將HBV五項(xiàng)指標(biāo)測(cè)試條的一端在盛有血清標(biāo)本的試管中插入約5s,后取出在白紙上放置,對(duì)弱陽(yáng)性結(jié)果等待10～15min行判斷,對(duì)強(qiáng)陽(yáng)性結(jié)果在2min內(nèi)即可觀察,最遲不宜超過(guò)20min。結(jié)果判定:若有一條紅色線先后在測(cè)試條中段出現(xiàn),則為陽(yáng)性,若無(wú)紅色線出現(xiàn)為測(cè)試條失效或試驗(yàn)失敗。

1.2.2 ELISA法 HBsAg目前國(guó)內(nèi)最常用的免疫測(cè)定方法為ELISA試驗(yàn),應(yīng)用多克隆或單克隆抗體,針對(duì)HBaAg的α決定簇,為雙抗體夾心模式,可行0.5ng/mL以下的測(cè)定。乙型肝炎在早期診斷指標(biāo)為血清中檢出HBsAg,除急性期外,在發(fā)生HBV感染后,大部分人無(wú)臨床表現(xiàn)。但HBsAg可在血中檢出,這類(lèi)人群為HBsAg攜帶者。 HBV感染的標(biāo)志為血清HBaAg。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn),P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2 結(jié)果

ELISA法與金標(biāo)快速法平行檢測(cè)HBV結(jié)果,經(jīng)RPHA法初篩,200份為HBsAg陽(yáng)性血清,對(duì)其分別使用ELISA法與金標(biāo)快速測(cè)試法對(duì)乙肝五項(xiàng)進(jìn)行平行檢測(cè),結(jié)果無(wú)明顯差異(P>0.05),見(jiàn)表1。HBV五項(xiàng)指標(biāo)2種方法檢測(cè)結(jié)果的總符合率分別為98.5%、99.5%、99%、96%、96.5%。以ELISA為常規(guī)方法對(duì)金標(biāo)快速測(cè)試法進(jìn)行驗(yàn)證,則金標(biāo)法分別為99.5%、100%、98.5%、94.5%、95%敏感性。特異性分別為84.5%、99.5%、96.5%、96%、96%。

表1 HBV采用ELISA與金標(biāo)快速法檢查結(jié)果比較(n)

3 討論

慢性乙型肝炎在我國(guó)為高度流行區(qū),在我國(guó)人口中,HBsAg陽(yáng)性者占8.83%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出世界水平,HBV變異株近年來(lái)有研究出現(xiàn)使患者HBV感染復(fù)制狀況更難診斷,常有漏診發(fā)生[2]。熒光定量PCR為一項(xiàng)實(shí)時(shí)檢測(cè)技術(shù),操作通過(guò)完全閉管式進(jìn)行,使擴(kuò)增產(chǎn)物的污染大大減少,并使檢測(cè)的特異性提高,擴(kuò)增產(chǎn)物或通過(guò)電腦自動(dòng)讀數(shù)來(lái)行精確定量,使檢測(cè)的靈敏度提高,避免了普通PCR檢測(cè)方法的缺點(diǎn)[3]。因Fprobe的加入,FQ-PCR更加提高了產(chǎn)物熒光定量檢測(cè)的特異性,并可得出定量結(jié)果,減少了實(shí)驗(yàn)步驟,并使操作進(jìn)一步簡(jiǎn)化,使自動(dòng)化的程度增加[4～5]。

膠體金標(biāo)記抗體檢測(cè)細(xì)菌表面抗原是1997年有學(xué)者曾報(bào)道的方法[6],在多種病原微生物中成為重要的檢測(cè)手須,本次研究采用金標(biāo)快速法對(duì)HBV五項(xiàng)進(jìn)行檢查,并和ELISA行平行試驗(yàn),總符合較高,且2種方法檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差異性,與ELISA法比較,金標(biāo)快速法更方便、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、快速,在對(duì)乙肝病毒五項(xiàng)指標(biāo)快速測(cè)定中較為適用,無(wú)需溫育、洗滌、終止等相對(duì)復(fù)雜的步驟,對(duì)儀器設(shè)備要求不高,可通過(guò)肉眼在15min后讀出結(jié)果,可將此方法用于健康查體、大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查中,特別是在各種內(nèi)窺鏡檢查的術(shù)前和健康人群的篩查,故在HBV五項(xiàng)指標(biāo)快速測(cè)定中,金標(biāo)快速法為較理想的方法,快速、使用簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高,值得廣泛推廣應(yīng)用。

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