王玉豐，吳 玲，陳雪銀

（1.海南省第三人民醫(yī)院 檢驗科，海南 三亞 572000；2.海南醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院，海南 ?？?71101；

3.海南醫(yī)學院附屬醫(yī)院生殖中心，海南 ?？?570102）

不同病因對男性不育患者精子形態(tài)的影響

王玉豐1，吳 玲2，陳雪銀3

（1.海南省第三人民醫(yī)院 檢驗科，海南 三亞 572000；2.海南醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院，海南 ?？?71101；

3.海南醫(yī)學院附屬醫(yī)院生殖中心，海南 海口 570102）

目的 探討不同病因對男性不育患者精子形態(tài)的影響。方法426例男性不育患者根據病因分為7組：精索靜脈曲張組（68例）、慢性前列腺炎組（127例）、精索靜脈曲張合并慢性前列腺炎組（36例）、特發(fā)性弱精子癥組（42例）、少精子癥組（115例）、小睪丸癥組（21例）及其它組（17例），用瑞－姬氏染色法進行精子形態(tài)分析。以78例供精者精液檢查結果作為對照。結果不育患者的形態(tài)正常精子百分率明顯低于對照組（P＜0.001），精子頭部畸形率明顯高于對照組（P＜0.001）；不育各組精子形態(tài)異常率與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義，不育各組精子形態(tài)異常率均高于對照組；精索靜脈曲張合并慢性前列腺炎組、少精子癥組、小睪丸癥組分別與慢性前列腺炎組相比較，差異均有統(tǒng)計學意義，慢性前列腺炎組精子形態(tài)異常率低于精索靜脈曲張合并慢性前列腺炎組、小睪丸癥組和少精子癥組。結論精子形態(tài)缺陷率在不同病因男性不育患者中呈現(xiàn)出不同程度的增高，提示精子形態(tài)學分析是反映患者睪丸受損程度的一項敏感指標。

男性不育；病因；精子形態(tài)；畸形精子癥

（ChinJLabDiagn，2012，16：1236）

資料表明，全球10%－15%育齡夫婦存在生育障礙，而男性因素導致的不育高達40%－50%，且仍呈逐年上升趨勢。因此，近年來有關精子質量與男性不育原因的研究越來越引起臨床的重視，而精子形態(tài)學正是研究中最受關注的領域之一。本文采用瑞－姬氏染色方法對各種病因導致不育的患者進行精子形態(tài)分析，旨在評價不同病因對患者精子形態(tài)及功能的影響程度，為男性不育癥的診斷和治療提供研究依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象選自2009年6月－2011年6月擬在海南醫(yī)學院生殖中心進行常規(guī)IVF-ET助孕治療的男性不育患者（排除無精子癥及精子數量過少無法形態(tài)分析者）426例，年齡22－46歲。根據不育病因將患者分為以下7組：精索靜脈曲張組（68例），慢性前列腺炎組（127例），精索靜脈曲張合并慢性前列腺炎組（36例），特發(fā)性弱精子癥組（42例），少精子癥組（115例），小睪丸癥組（21例）及其它組（17例），在IVF前3個月內，對患者進行精液常規(guī)及精子形態(tài)學分析。以同期來院的78例供精者的精液篩查結果作為對照，年齡21－38歲，排除VC、CP、生殖道感染和遺傳性疾病等。

1.2 方法

1.2.1 精液采集 禁欲4－7天后在醫(yī)院取精室經手淫法取精液于干燥經消毒的潔凈廣口杯中，置于37℃水浴箱內，完全液化后轉移至刻度離心管內測量體積，待檢。

1.2.2 精子常規(guī)檢查 按世界衛(wèi)生組織（WHO）《WHO人類精液及精子－宮頸黏液相互作用實驗室檢驗手冊》（第4版）的操作方法，進行精液常規(guī)檢測，包括精液量、液化時間、pH值、黏稠度、精子密度、活率及活力等內容。

1.2.3 精子形態(tài)分析 待精液液化后，取約10μl的精液，滴于載玻片上，拉薄涂片，每份標本推2張涂片，空氣中自然干燥，瑞氏－姬氏混合液（臨用前10∶1混勻）染色5min，自來水輕輕沖洗玻片，自然干燥后立即顯微鏡觀察，100倍油鏡下觀察不少于200個精子形態(tài)，按文獻［1］進行精子頭、頸中部和尾部缺陷的形態(tài)描述，并記錄結果。正常形態(tài)精子百分率≥15.0%為形態(tài)正常，15.0%＞正常形態(tài)精子百分率≥10.0%為輕度畸形，10.0%＞正常形態(tài)精子百分率≥5.0%為中度畸形，正常形態(tài)精子百分率＜5.0%為重度畸形。

1.2.4 統(tǒng)計學處理 用SPSS 16.0軟件包進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗；等級資料比較，采用秩和檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不育組與對照組精子形態(tài)比較

不育組形態(tài)正常精子百分率明顯低于對照組（t＝12.557，P＜0.001），而頭部畸形率明顯高于對照組（t＝22.073，P＜0.001），頸及中部畸形、尾部畸形兩組差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。頭部畸形以錐形、不定形及梨形頭多見。

表1 不育組與對照組的精子形態(tài)比較（±s）

表1 不育組與對照組的精子形態(tài)比較（±s）

注：與對照組比較，★P＜0.001

頭部畸形 頸及中部畸形 尾部畸形對照組 78 28.52±11.51 51.26±12.35 19.35±10.23 13.7組別 例數 形態(tài)正常精子（%） 形態(tài)異常精子（%）6±9.73不育組 426 13.26±9.54★ 80.14±10.28★21.25±8.65 15.32±7.56

2.2 患者精子畸形程度分布

在426例患者的精液標本中，精子形態(tài)正常者（正常形態(tài)精子百分率≥15.0%）131例，占30.8%，畸形精子者295例，占69.2%，其中輕度畸形者（15.0%＞正常形態(tài)精子百分率≥10.0%）占34.5%（147／426），中度畸形者（10.0%＞正常形態(tài)精子百分率≥5.0%）占21.8%（93／426），重度畸形者（正常形態(tài)精子百分率＜5.0%）占12.9%（55／426）。

2.3 不同病因對患者精子形態(tài)的影響

8個不同組比較，精子形態(tài)差異有統(tǒng)計學意義（H＝63.996，P＜0.001）。兩兩比較結果顯示，對照組與不育各組精子形態(tài)差異均有統(tǒng)計學意義，對照組精子形態(tài)異常率低于不育各組；精索靜脈曲張合并慢性前列腺炎組、少精子癥組、小睪丸癥組分別與慢性前列腺炎組相比較，差異均有統(tǒng)計學意義，慢性前列腺炎組精子形態(tài)異常率低于精索靜脈曲張合并慢性前列腺炎組、小睪丸癥組、少精子癥組。見表2。

表2 不同病因對患者精子形態(tài)的影響

3 討論

近年來，輔助生殖技術的發(fā)展為不孕不育患者帶來了福音，而精子質量的檢測對體外生殖技術的指導起著舉足輕重的作用，尤其精子形態(tài)分析被認為是最能夠反映男性生育力的一項指標。本研究對426例擬IVF助孕的不同病因男性不育患者在精液常規(guī)檢查的基礎上進行精子形態(tài)分析，結果顯示不育癥患者中，精子形態(tài)異常者比率高達69.2%，與曹興午等［2］采用同種染色方法調查的結果相近（76.1%），基本反映了我國當前不育癥患者的精子質量狀況。

精子形態(tài)異常產生的機制目前尚未切確。一般認為，精索靜脈曲張、化學性中毒、感染、氧化系統(tǒng)平衡受到破壞、睪丸內環(huán)境改變、染色體異常以及吸煙等均為導致精子發(fā)生畸形的主要原因［3］。在本研究中，不育患者的形態(tài)正常精子率顯著低于對照組，而頭部缺陷精子百分率顯著高于對照組，說明不育患者的精子形態(tài)缺陷主要發(fā)生在頭部。而頭部缺陷類型以錐形、不定形及梨形多見。研究結果還顯示，不同不育病因患者的精子形態(tài)異常程度并不盡相同。各不育組中精子形態(tài)異?；颊弑壤黠@高于對照組；而精索靜脈曲張合并慢性前列腺炎組、小睪丸癥組和少精子癥組患者的精子形態(tài)異常比例明顯高于慢性前列腺炎組，說明前三種疾病狀態(tài)存在時患者的精子畸變程度可能大于后者。目前諸多研究已表明，精子的形態(tài)與其功能有著極其密切的關系，任何形態(tài)上的缺陷都可能導致精子功能的下降，最終導致男性生育能力的降低［4］。然而，精子形態(tài)缺陷影響受孕的原因是多方面的，首先形態(tài)異常的精子穿透宮頸粘液的能力將顯著降低，尤其是頭部畸形的精子，其經受來自宮頸粘液的阻力更大；其次，精子形態(tài)發(fā)生改變將影響精子識別和結合卵子透明帶的能力，使精子無法穿透透明帶及卵膜實現(xiàn)受精；第三，頭部畸形的精子，其頂體結構常發(fā)生改變，出現(xiàn)頂體與核膜分離、雙膜性結構消失、頂體反轉及核分離等現(xiàn)象，嚴重影響頂體反應，例如圓頭精子綜合征，常表現(xiàn)為頂體缺如、過少或脫離。在不育癥患者精液中圓頭精子比例常顯著增高［5］。

綜上所述，精子形態(tài)缺陷在不同原因男性不育患者中，均呈現(xiàn)出不同程度的增高，這充分提示精子形態(tài)分析作為一項反映患者睪丸生殖功能狀況以及有害因素對睪丸損害程度指標所具有的高度敏感性。臨床上將精子形態(tài)分析與常規(guī)檢查相結合，將更有利于男性生育能力的評估以及對輔助生殖結局的預測作用［6，7］。

［1］World Health Organization.WHO laboratory manual for the examination of human semen and Sperm-cervical mucus interaction［M］.4th ed.London：Cambridge University Press，1999：71－74.

［2］曹興午，周 強，王傳航，等.不育癥患者293例精子形態(tài)分析［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2008，31（10）：1169.

［3］曹興午.精子形態(tài)學檢驗分析［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2006，29（4）：382.

［4］Yu JJ，Xu YM.Ultrastructural defects of acro-some in infertile men［J］.Arch Androl，2004，50（6）：405.

［5］王瑞雪，孫卉芳，劉睿智.畸形精子癥研究進展［J］.生殖與避孕，2007，27（4）：292-295，303.

［6］Guzick DS，Overstreet JW，F(xiàn)actor-Litrak P，et al.Sperm morphology motility and concentration in fertile and in fertile men［J］.N Engl JM ed，2001，345（19）：1388.

［7］De Vos A，Van De Velde H，Joris H，et al.Influence of individua l sperm morphology on fertilization，embryo morphology，and pregnancy outcome of intra-cytoplasmic sperm injection［J］.Fertil Steril，2003，79（1）：42.

Effect of different etiology on sperm morphology in male infertility

WANGYu-feng1，WULing2，CHENXue-yin3.（1.DepartmentofClinicalLaboratory，ThirdPeople’sHospitalofHainanProvince，Sanya572000，China；2.SchoolofPublicHealth，HainanMedicalUniversity，Haikou571101，China；3.ReproductiveMedicalCenter，AffiliatedHospitalofHainanMedicalUniversity，Haikou570102，China）

ObjectiveTo evalute the effect of different etiology on sperm morphology in male infertility.MethodsSemen from 426infertile men which were divided into seven groups，varicocele groups（VC groups，68cases），chronic prostatitis groups（CP groups，127cases），varicocele patients with chronic prostatitis groups（VC with CP groups，36cases），idiopathic asthenozoospermia groups （42cases），oligospermia groups （115cases），small testes syndrome groups（21cases）and other groups（17cases），Sperm morphology was analyzed by Wright-Giemsa stain and those of 78normal semen donors were taken as the control.ResultsThe percentage of morphologically normal sperm in infertile men groups were significantly lower and the percentage of head defect sperm were significantly higher than that in control groups（P＜0.001）；A significantly increased percentage of teratozoospermia were found in all infertile groups comparing with those in controls.The percentage of teratozoospermia in CP groups were significantly lower than that in VC with CP groups，small testes syndrome groups and oligospermia groups.ConclusionThe rate of sperm morphological defects increased to varying degrees in different causes of male infertility.Sperm morphology analysis is one of the good indexes in evaluating testes injury.

male infertility；etiology；sperm morphology；teratozoospermia

R711.6

A

1007－4287（2012）07－1236－03

王玉豐（1978－），男，碩士研究生在讀，主管檢驗師，主要從事生殖遺傳及分子生物學檢測。

2011－12－24）