薛英，黎七雄，李爽

(1.武漢大學中南醫(yī)院耳鼻喉科，430071;2武漢大學基礎醫(yī)學院藥理學系，430071;3.武漢市兒童醫(yī)院泌尿科，430016)

順鉑(cisplatin，DDP)是一種廣譜抗癌藥，由于其抗癌作用強，與其他抗腫瘤藥物無交叉耐藥性，在睪丸癌、卵巢癌、頭頸部腫瘤及小細胞肺癌等惡性腫瘤的治療中取得了顯著療效[1]。但DDP有嚴重的腎毒性，而腎毒性是其臨床應用劑量受限制的主要因素[2]。因此，研究對DDP腎毒性有較好防治作用的藥物，對提高DDP抗腫瘤療效，發(fā)揮DDP應有的作用，具有重要的臨床價值。川芎嗪(ligustrazine)又名四甲基吡嗪(tetramethypyrazine，TMP)，是川芎中的一種生物堿單體，臨床主要用于治療心腦血管疾病，在治療腎小球及腎小管疾病方面也有較好的療效[3]。筆者之前的研究表明，TMP對大鼠加速型抗腎小球基底膜抗體腎炎具有較好的保護作用，其機制與抗氧化損傷有關[4]。TMP可能通過降低凋亡相關蛋白Bax和增強Bcl-2表達，并降低Bax/Bcl-2比值而抑制DDP引起的腎細胞凋亡，使腎臟免受損傷[5]。筆者在本實驗觀察TMP對DDP腎氧化損傷的影響。

1 材料與方法

1.1 動物雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體質量200～250 g，SPF級，由武漢大學醫(yī)學院實驗動物中心提供。

1.2 試藥DDP(山東省德州制藥廠生產，批號:030604，臨用前用0.9%氯化鈉溶液配制)，鹽酸川芎嗪注射液(購于北京市永康藥業(yè)有限公司，批號:03020601)。血清尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、肌酐(serum creatinine，SCr)及丙二醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、一氧化氮(nitric oxide，NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)試劑盒均購于南京建成生物制品研究所。

1.3 實驗方法取SD大鼠，實驗前代謝籠收集24 h尿液，測尿蛋白含量。將符合要求大鼠隨機分為4組，每組8只:對照組、DDP組、DDP+TMP 50 mg·kg－1·d－1組、DDP+TMP 100 mg·kg－1·d－1組。TMP給藥組分別腹腔注射TMP 50和100 mg·kg－1·d－1，給藥體積為5 mL·kg－1，連續(xù)給藥5 d;對照組和DDP組給予0.9%氯化鈉溶液，5 mL·kg－1。給藥第3天，除對照組外，其他3組腹腔注射DDP 1次，8 mg·kg－1，給藥第5天收集代謝籠中24 h尿，測尿蛋白含量;大鼠稱質量后處死，取血測BUN、SCr;取腎臟，制備腎皮質勻漿，測MDA、還原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)含量及SOD、谷胱甘肽-S-轉移酶(glutathione-S-transferase，GST)、NO、NOS活性。

1.4 觀察指標與測定方法磺基水楊酸比濁法測定尿蛋白定量，二乙酰一肟法測定BUN含量，堿性苦味酸法測定SCr含量，硫代巴比妥酸反應法測定MDA含量，活性鄰苯三酚自氧化法測定SOD，二硫代雙硝基苯甲酸比色法測定GSH，1-氯-2，4-二硝基苯比色法測定GST，硝酸還原酶法測定腎組織NO含量，吸光度比色法測定NOS活力。

1.5 統(tǒng)計學方法采用SPSS11.0軟件包，所有數據用均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 大鼠BUN、SCr及24 h尿蛋白含量結果見表1。與對照組比較，DDP組大鼠BUN、SCr和24 h尿蛋白含量顯著升高，分別是對照組的2.68，2.84和10.94倍;與DDP組比較，DDP+TMP50 mg·kg－1·d－1組和DDP+TMP100 mg·kg－1·d－1組大鼠24 h尿蛋白分別下降41.45%，65.33%;BUN分別下降18.12%，57.51%;SCr含量分別下降14.39%，48.89%。

2.2 大鼠腎皮質MDA與SOD測定與對照組比較，DDP組大鼠腎皮質勻漿MDA含量增高(是對照組的1.58倍)，SOD活性下降(較對照組下降32.34%);與DDP組比較，DDP+TMP100 mg·kg－1·d－1組MDA含量降低36.73%，SOD活性升高(為DDP組的1.66倍)，見表1。

2.3 大鼠腎皮質GSH與GST測定見表1。與對照組比較，DDP組大鼠腎皮質GSH含量和GST活性均明顯下降(分別下降27.25%和37.50%);與DDP組比較，DDP+TMP100 mg·kg－1·d－1組GSH和GST均升高(分別為DDP組的1.33和1.57倍)。

2.4 大鼠腎皮質NO與NOS測定見表1。DDP組腎皮質NO含量和NOS活力分別為對照組的2.66和1.28倍;與DDP組比較，DDP+TMP 100 mg·kg－1·d－1組腎皮質NO含量和NOS活力明顯降低，分別降低45.39%和22.86%。

3 討論

研究表明，TMP能降低腎損傷大鼠尿蛋白、BUN、SCr含量，減輕腎組織病理性損害，表明TMP對DDP所致的腎損害具有一定的保護作用[5]。有文獻報道，DDP誘導腎毒性的機制與其腎組織過氧化損傷有關[6]。DDP進入機體后可產生大量羥自由基和活性氧自由基，引起膜脂質過氧化，導致膜通透性和膜脂流動性改變[7-8]。

SOD是體內重要抗氧化酶，可阻斷脂質過氧化連鎖反應。GST是體內重要的催化結合解毒反應的酶系之一，可通過催化GSH的結合反應或自身與底物的自殺性結合而降低化合物的毒性[9]。NO是一種重要的生物調節(jié)劑，由NOS以L-Arg為底物合成。NO并不直接造成組織損害，而是與超氧化物陰離子(O－2)反應生成超氧亞硝基陰離子(ONOO－)后分解產生羥自由基(·OH)而產生毒性[10]。NO可與SOD競爭O－2，與O－2反應生成ONOO－。ONOO－又可通過使蛋白中的酪氨酸硝基化，抑制SOD活性。體外研究表明，外源性NO能抑制SOD和CAT的活性，引起明顯的脂質過氧化形成[11]。NOS是NO生物合成的關鍵酶。SOD等抗氧化酶活性下降對NOS具有抑制作用。本研究結果顯示，DDP可增加大鼠腎皮質MDA、NO含量和NOS活力，降低GSH含量和SOD、GST活性，表明DDP腎毒性與氧化損傷密切相關。TMP降低腎組織MDA、NO含量和NOS活力，增加GSH含量和SOD、GST活性。TMP增加腎組織GSH的含量，誘導GST的活性可能與TMP的抗氧化特性和抑制DDP所致巰基消耗有關。TMP還可通過降低大鼠腎臟NO含量和NOS活力而減少NO與自由基相互作用引起的腎臟損傷。

表1 4組大鼠BUN、SCr、24 h尿蛋白含量測定結果Tab.1The content of BUN、SCr and urine protein in 24 hours in 4 groups of rats ±s

表1 4組大鼠BUN、SCr、24 h尿蛋白含量測定結果Tab.1The content of BUN、SCr and urine protein in 24 hours in 4 groups of rats ±s

與DDP組比較，*1P＜0.05，*2P＜0.01;與對照組比較，*3P＜0.01Compared with DDP group，*1P＜0.05，*2P＜0.01;compared with control group，*3P＜0.01

?

本研究提示，TMP對腎臟有保護作用，其可能機制是通過抗氧化損傷作用對DDP所致的腎臟損傷產生保護。

[1]ROSENBERG B.Fundamental studies with cisplatin[J].Cancer，1985，55(10):2303－2316.

[2]BADRY O A，ABDEL-MAKSOUD S，AHMED W A，et al.Naringenin attenuates cisplatin nephrotoxicity in rats[J].Life Sci，2005，76(18):2125－2135.

[3]常子軍.川芎嗪治療腎臟疾病的藥理及臨床研究進展[J].中國中醫(yī)急癥，2002，11(2):131－132.

[4]FU H，LI J，LI Q X，et al.Protective effect of ligustrazine on accelerated anti-glomerular basement membrane antibody nephritis in rats is based on its antioxidant properties[J].Eur J Pharmaco，2007，563(3):197－202.

[5]劉曉華，黎七雄.川芎嗪對順鉑腎損傷大鼠腎細胞凋亡及凋亡蛋白表達的影響[J].中國藥理學與毒理學雜志，2005，19(5):352－356.

[6]HANNEMANN J，BAUMANN K.Cisplatin-induced lipid peroxidation and decrease of gluconeogenesis in rat kidney cortex:different effects of antioxidants and radical scavengers[J].Toxicology，1988，51:119－132.

[7]KUNIHIKO S，KAZUTO M，YOSHNORI I，et al.Protection by a radical scavenger edaravone against cisplatin-induced nephrotoxicity in rats[J].Eur J Pharmaco，2002，451(2):203－208.

[8]JARIYAWAT S，KIGPITUCK P，SUKSEN K，et al.Protection against cisplatin-induced nephrotoxicity in mice byCurcuma comosa Roxb.ethanol extract.[J].J Nat Med，2009，63(4):430－436.

[9]BALIGA R，ZHANG Z，BALIGA M，et al.Role of cytochrome P450as a source of catalytic iron in cisplatin-induced nephrotoxicity[J].Kidney Int，1998，54(5):1562－1569.

[10]FUJIHARA C K，SENA C R，MALHEIROS D M，et al.Shortterm nitricoxide inhibition induces progressive nephropathy after regression of initial renal injury[J].Am J Physiol Renal Physiol，2006，290(3):632－640.

[11]PASSAUER J，PISTROSCH F，BUSSEMAKER E.Nitric oxide in chronic renal failure[J].Kidney Int，2005，67(5):1665－1667.