張潤桐 寧 青

江蘇省中醫(yī)藥研究院中藥新型給藥系統(tǒng)重點實驗室，江蘇 南京 210028

慢性疲勞綜合征患者常常存在免疫功能低下，并伴有抑郁癥和焦慮癥。因此，本研究采用強制束縛和電脈沖刺激模擬慢性疲勞模型，觀察自擬經驗方復方蛹蟲草制劑對模型大鼠腦組織中單胺類神經遞質釋放的調節(jié)作用以及對淋巴細胞凋亡的影響。

1 材料

藥物 復方蛹蟲草制劑 (YCC)由蛹蟲草、熟地黃、枸杞子、黨參、大棗組成，均購自亳州市聯(lián)華醫(yī)藥有限公司。將處方量藥材投料，水煎煮2次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，常壓濃縮，得浸膏，加純化水混勻后灌胃給藥。

實驗動物和儀器 SPF級健康雄性SD大鼠，體質量180～200g，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司。主要儀器：XMTW-4100游泳箱 (北京碩林苑科技有限公司)、電針儀(6805-Ⅲ型，福建省醫(yī)療器械廠生產)。

2 方法

2.1 劑量與分組 給藥劑量分別為0.6、1.1、3.4g/kg分為低、中、高3個劑量組 (相當于人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍)。灌胃給藥每天一次，共30d。

2.2 慢性疲勞綜合癥 (CFS)的造模 對模型組和復方蛹蟲草高中低劑量組實施造模。每天電擊，用波寬2ms的電脈沖，1mA電流強度，時間間隔15s，每天16次電擊。束縛和冷水游泳隔日交替進行：將大鼠放進自制的行為束縛筒內，束縛2h/次;冷水游泳，水溫22℃，時間5min［1-2］。

2.3 腦組織單胺類神經遞質含量的檢測 各實驗組動物末次給藥1h后進行強行剌激，立即斷頭處死，迅速取出動物全腦，去除小腦后將腦組織稱重。去甲腎上腺素 (NE)，多巴胺 (DA)，5-羥色胺 (5-HT)，5-吲哚乙酸 (5-HIAA)試劑盒，由南京建成生物工程研究所提供［3-4］。

2.4 淋巴細胞凋亡率的檢測 大鼠腹腔麻醉后一次采全血5 ml備用。加入Annexin V-FITC和PI，混勻后冰浴避光放置15 min，隨即進行流式細胞儀檢測，統(tǒng)計早期凋亡、晚期凋亡和凋亡細胞總數(shù)目［5］。

2.5 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)均用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進行方差分析。

3 結果

3.1 YCC對CFS大鼠腦組織中單胺類神經遞質的影響 與正常組比較，模型組腦組織中NE，DA，5-HT含量明顯降低 (P＜0.01)。YCC高劑量組NE，DA，5-HT含量明顯升高 (P＜0.01)。結果見表1。

3.2 YCC對CFS大鼠模型外周血淋巴細胞細胞凋亡的影響實驗結果顯示，模型組早期凋亡晚期凋亡指數(shù)顯著高于正常組 (P＜0.01);YCC組大鼠早期凋亡晚期凋亡指數(shù)顯著高于模型組 (P＜0.01)。見表2。

表1 YCC對大鼠腦組織單胺類神經遞質含量的影響 (n=12，±S)

表1 YCC對大鼠腦組織單胺類神經遞質含量的影響 (n=12，±S)

* 表示與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)

組別 劑量g生藥/(d·kg體重)NE DA 5-HT 322.5 ±41.6 511.2 ±60.5 724.3 ±60.1模型組 - 276.6 ±36.7 372.4 ±46.2 671.3 ±40.8低劑量組 0.6 321.2 ±62.3 456.5 ±78.2 697.2 ±76.2中劑量組 1.1 334.6 ±62.3 487.4 ±79.4 711.4 ±47.2高劑量組 3.4 356.2 ±77.3*500.5 ±69.1*756.2 ±44.8正常組 生理鹽水*

表2 各組大鼠淋巴細胞凋亡指數(shù)的比較 (n=12，±S)

表2 各組大鼠淋巴細胞凋亡指數(shù)的比較 (n=12，±S)

* 表示與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)

組別 劑量g生藥/(d·kg體重)早期凋亡指數(shù)晚期凋亡指數(shù) 總凋亡指數(shù)2.44 ±0.23 0.223 ±0.077 2.61 ±0.55模型組 - 4.36 ±1.15 0.421 ±0.163 4.83 ±1.65低劑量組 0.6 3.98 ±1.17 0.367 ±0.115 4.41 ±1.46中劑量組 1.1 3.43 ±1.25 0.325 ±0.114 3.95 ±1.12高劑量組 3.4 2.91 ±0.97*0.298 ±0.124*3.83 ±0.87*正常組 生理鹽水

4 討論

結合臨床經驗篩選出治療CFS的中藥小復方——復方蛹蟲草制劑，該方以蛹蟲草健脾益氣為君藥，黨參更助補氣之用為臣藥，佐以熟地黃等養(yǎng)血和血、寧心安神藥物，用于治療脾氣虛引起的CFS。CFS的造模導致外周血淋巴細胞凋亡細胞百分率提高，原來凋亡和新生成淋巴細胞的動態(tài)平衡遭到CFS造模過程的破壞。慢性疲勞加速外周血淋巴細胞凋亡，YCC可以顯著逆轉這一破壞，但其對機體免疫功能的影響有待于更深入的研究。并且YCC能明顯改善慢性疲勞，提高大鼠腦組織中單胺類神經遞質含量;但對疲勞綜合征確切的病理生理機制以及臨床參數(shù)相對穩(wěn)定的理想觀測指標，仍有待于進一步的探討與研究。

［1］陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：903，904.

［2］聶曉莉，李曉勇，靳文，等.慢性疲勞大鼠模型的建立及其對肝功能的影響［J］.熱帶醫(yī)學雜志，2007，7(4)：323.

［3］王天芳，陳易新，季紹良，等.慢性疲勞動物模型的研制及其行為學觀察［J］.中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，1999，5(5)：25.

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