王小曉，平佳宜，吳彩麗，段曉穎

(河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南鄭州450000)

復(fù)發(fā)性口腔潰瘍是臨床常見病、多發(fā)病，是口腔科疑難雜癥之一。目前局部治療仍是其主要的治療方法。愈潰膜是以生物黏附單向釋藥系統(tǒng)為載體制成的現(xiàn)代中藥復(fù)方制劑，由具生物黏附性的載藥層和不具生物黏附性的背襯層復(fù)合而成，屬于生物黏附單向釋藥膜劑。該膜劑可延長藥物對潰瘍面的覆蓋和黏附時(shí)間，具有阻斷外界因素對潰瘍面的刺激、保護(hù)創(chuàng)面的作用［1］。為考察該制劑的毒性反應(yīng)，本研究觀察了其對金黃倉鼠口腔黏膜的刺激性作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

SPF級金黃倉鼠10只，雌雄各半，出生60～70 d，購自武漢生物制品研究所，動(dòng)物質(zhì)量許可證號:SCXK(鄂)2008－0003。

1.2 藥品與儀器

愈潰膜(每片1 cm×1 cm，含生藥144 mg/片)及不含藥空白膜，由河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥制劑實(shí)驗(yàn)室制備。TB－718E型生物組織自動(dòng)包埋機(jī)，湖北泰維醫(yī)療科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品;RM2245型旋轉(zhuǎn)切片機(jī)，德國LEICA公司產(chǎn)品;日本Olympus DP71顯微圖像采集系統(tǒng)。

1.3 動(dòng)物分組與給藥

［2－3］。取10只SPF級金黃倉鼠，雌雄各半，翻轉(zhuǎn)左、右側(cè)中央頰囊并用生理鹽水沖洗，分別設(shè)為愈潰膜組和空白膜對照組，將愈潰膜和不含藥空白膜分別貼敷于左、右側(cè)頰囊黏膜極低處，保持貼敷至少4 h。

1.4 檢測指標(biāo)

參考文獻(xiàn)［2－3］。觀察給藥后金黃倉鼠的一般情況、局部黏膜肉眼表現(xiàn)及組織病理學(xué)顯微表現(xiàn)，并根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分。

1.4.1 一般情況與局部黏膜表現(xiàn)

觀測給藥后24 h時(shí)動(dòng)物全身狀況及用藥局部口腔黏膜有無色澤異常、充血、腫脹、糜爛和滲出等異常現(xiàn)象，并按以下標(biāo)準(zhǔn)評分:無紅斑(0分)，輕度充血、腫脹(1分)，明顯充血、腫脹(2分)，糜爛、滲出、潰瘍形成 (3分)。

1.4.2 組織病理學(xué)觀察

給藥后24 h，處死金黃倉鼠5只，觀察頰黏膜有無充血、腫脹、糜爛及潰瘍反應(yīng);同時(shí)取與試樣接觸部位的頰黏膜及其周圍組織，用40 g/L甲醛固定液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色。其余存留的5只金黃倉鼠，觀察至第7天再處死觀察，方法同上。顯微觀察并記錄給藥處頰囊上皮組織是否有潰瘍、過度角化、上皮異常增生、角化不良、空泡形成、色素沉積、基底細(xì)胞變化、化生、增生或其他異常變化，結(jié)締組織是否有充血、血管擴(kuò)張、炎癥細(xì)胞浸潤、基質(zhì)疤痕形成、出血、異物反應(yīng)或其他異常變化。按以下標(biāo)準(zhǔn)評分。①上皮變化:正常計(jì)0分，細(xì)胞增生計(jì)1分，過度角化或角化不良計(jì)2分，局部糜爛計(jì)3分，廣泛糜爛計(jì)4分。②白細(xì)胞浸潤程度:未見白細(xì)胞計(jì)0分，白細(xì)胞計(jì)數(shù)＜25個(gè)計(jì)1分，白細(xì)胞計(jì)數(shù)26～50個(gè)計(jì)2分，白細(xì)胞計(jì)數(shù)51～100個(gè)計(jì)3分，白細(xì)胞計(jì)數(shù)＞100個(gè)計(jì)4分。③血管充血程度:未見血管充血計(jì)0分，極少血管充血計(jì)1分，輕度血管充血計(jì)2分，中度血管充血計(jì)3分，重度血管充血且伴有血管破裂計(jì)4分。④水腫程度:未見水腫計(jì)0分，極少見水腫計(jì)1分，輕度水腫計(jì)2分，中度水腫計(jì)3分，重度水腫計(jì)4分。評分之后綜合各項(xiàng)計(jì)分，進(jìn)行病理反應(yīng)分級，病理反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)如下:0～4分(無黏膜刺激性)，5～8分(輕度黏膜刺激性)，9～11分(中度黏膜刺激性)，12～16(重度黏膜刺激性)。

2 結(jié)果

2.1 各組動(dòng)物一般狀況與局部黏膜表現(xiàn)

給藥24 h后，受試動(dòng)物全身狀況未見異常，局部口腔黏膜未見充血、腫脹、糜爛、滲出、潰瘍形成等異?，F(xiàn)象;其余存留動(dòng)物，連續(xù)觀察7 d，亦未見上述異常表現(xiàn)。按照評分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分，愈潰膜組和空白膜對照組評分均計(jì)為0。

2.2 各組動(dòng)物頰黏膜組織病理學(xué)觀察

與空白膜對照組對比，愈潰膜組上皮細(xì)胞排列整齊，形態(tài)未見異常、無過度角化/角化不良，基底細(xì)胞未見增生或其他異常變化，未見潰瘍形成;結(jié)締組織未見炎癥細(xì)胞浸潤、血管擴(kuò)張、充血、出血、異物反應(yīng)或其他異常變化。見圖1。按照評分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分，愈潰膜實(shí)驗(yàn)組和空白膜對照組評分均計(jì)為0。

3 討論

金黃倉鼠具有一個(gè)特殊的結(jié)構(gòu)——頰囊。將受試物置于頰囊中，能夠保證受試物崩解或溶化前與口腔黏膜一直處于充分接觸狀態(tài)，這與受試物的臨床應(yīng)用情況基本一致，可最大程度模擬臨床上的給藥方式。此外，將藥物放入金黃倉鼠一側(cè)頰囊中，還可以以另一側(cè)頰囊作為對照來判斷試驗(yàn)結(jié)果［4］。愈潰膜處方源于民間驗(yàn)方，由胡黃連、青黛、冰片等組成，臨床使用效果顯著。傳統(tǒng)的使用方法是將其制為散劑，將藥物直接噴灑于患處。但由于口腔特殊的生理環(huán)境，藥物不能長時(shí)間在局部保持有效治療濃度，從而影響了療效。為提高藥效，方便臨床使用，本課題組采用具有生物黏附性的載藥膜和不具生物黏附性的空白膜復(fù)合而成的單向釋藥膜系統(tǒng)作為載體，將其制成現(xiàn)代中藥復(fù)方制劑。為考察該制劑的毒性反應(yīng)，本研究結(jié)果顯示:與對照組相比，愈潰膜組在給藥24 h及1周時(shí)，局部口腔黏膜未見充血、腫脹、糜爛、滲出、潰瘍形成等異?，F(xiàn)象，組織切片顯微觀察用藥組上皮細(xì)胞排列整齊、形態(tài)未見異常、無過度角化/角化不良、基底細(xì)胞未見增生或其他異常變化、未見潰瘍形成，結(jié)締組織未見炎癥細(xì)胞浸潤、血管擴(kuò)張、充血、出血、異物反應(yīng)或其他異常變化。根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分，愈潰膜組和空白膜對照組評分均計(jì)為0。可見該制劑無黏膜刺激性，未顯示毒性反應(yīng)，提示該膜劑的研發(fā)具有良好的臨床應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn):

［1］李丁，王健，侯惠民.口腔黏膜給藥系統(tǒng)研究進(jìn)展［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40(4):303－307.

［2］楊柳，張義生，周才新，等.辛及涂劑對口腔黏膜刺激性實(shí)驗(yàn)研究［J］.湖北中醫(yī)雜志，2011，33(10):19－20.

［3］李良，鄭國安，郭晟，等.西地碘含片口腔黏膜刺激性試驗(yàn)［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2009，28(23):62 －63.

［4］國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心.藥品技術(shù)評價(jià)文集:第二輯［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2007:36.