王添敏， 徐士釗， 張 慧， 陳虎彪， 康廷國(guó)*

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連 116600;2.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江佳木斯 154007;3.香港浸會(huì)大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，香港九龍?zhí)?

胡桃楸Juglans mandshuricaMaxim.又名核桃楸、山核桃，為胡桃科Juglandaceae胡桃屬植物，屬落葉喬木，主要分布于我國(guó)東北及華北地區(qū)［1］?！堕_(kāi)寶本草》記載胡桃楸有補(bǔ)腎固精、斂肺定喘、抑菌鎮(zhèn)咳及抗癌之功效。胡桃楸的樹(shù)皮、莖枝和果皮在民間用于治療腫瘤;現(xiàn)代研究表明胡桃楸的莖枝、樹(shù)皮、根、葉和果皮均具有抗腫瘤作用［2-6］。鞣質(zhì)是胡桃楸不同藥用部位中普遍存在的主要化學(xué)成分之一［7-9］，近年來(lái)越來(lái)越多的研究表明鞣質(zhì)具有較好的抗腫瘤活性［10-12］。關(guān)于胡桃楸中總鞣質(zhì)的測(cè)定研究較少，曾測(cè)定了不同產(chǎn)地胡桃楸不同藥用部位中含總鞣質(zhì)的量［13］，本實(shí)驗(yàn)考察了不同時(shí)間采收的胡桃楸莖枝、葉和果實(shí)中總鞣質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化，為胡桃楸資源的合理開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料

U—3010型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) (日本Hitachi)，AS5150型超聲波清洗機(jī) (北京華瑞博遠(yuǎn)科技發(fā)展有限公司)，ALC—110.4型電子分析天平(德國(guó)賽多利斯公司)，RE—300型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀廠)。沒(méi)食子酸對(duì)照品 (純度≥98%)購(gòu)自比利時(shí)Acros Organics公司。實(shí)驗(yàn)中所用試劑均為市售分析純?cè)噭?/p>

胡桃楸的莖枝、葉和果實(shí)分別于2010年2月—2011年1月期間每月28日在遼寧省普蘭店市蓮山鎮(zhèn)老白山上固定區(qū)域采收，受氣候、人為因素影響，胡桃楸莖枝采得12個(gè)樣品，葉采得5、6、7、8月4個(gè)樣品，胡桃楸果采得6、7月2個(gè)樣品，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)王冰教授鑒定為胡桃楸科植物胡桃楸Juglans mandshuricaMaxim.，憑證標(biāo)本保存于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室。

2 方法與結(jié)果

2.1 胡桃楸樣品的處理 采集的胡桃楸樣品在24 h內(nèi)運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室處理。將胡桃楸葉切段，莖枝和果實(shí)切成1～2 cm厚的薄片，放入-40℃冰箱中凍存。實(shí)驗(yàn)前取出預(yù)凍的藥材樣品放入冷凍干燥儀中在-50℃、6 Pa的條件下冷凍干燥，約40 h后藥材干燥完全，取出，粉碎，過(guò)40目篩，備用。

2.2 胡桃楸樣品中總鞣質(zhì)的測(cè)定［13］取胡桃楸樣品粉末0.5 g，精密稱(chēng)定，置于50 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%丙酮25 mL，密封，稱(chēng)定質(zhì)量;超聲提取40 min，取出，用70%丙酮補(bǔ)足失質(zhì)量;搖勻，靜置后濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液5 mL，25℃下減壓回收溶劑至無(wú)丙酮味，轉(zhuǎn)至25 mL棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置后濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。以沒(méi)食子酸對(duì)照品為標(biāo)準(zhǔn)重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為Y=4.651 8X-0.046 2，r=0.999 3。采用分光光度法于760 nm處分別測(cè)定供試品溶液中總多酚和游離多酚的吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品中總鞣質(zhì)的含有量。

2.3 不同采收期胡桃楸樣品中總鞣質(zhì)的含有量及其動(dòng)態(tài)變化 經(jīng)測(cè)定，胡桃楸12個(gè)莖枝、4個(gè)葉和2個(gè)果實(shí)樣品中總鞣質(zhì)的含有量見(jiàn)表1。

表1 不同時(shí)間采收的胡桃楸莖枝、葉和果實(shí)中總鞣質(zhì)Tab.1 Total tannins content in stem，leaf and fruit ofJuglans mandshurica collected in different months

胡桃楸不同藥用部位總鞣質(zhì)的含有量相差較大，由高到低的順序?yàn)槿~＞果實(shí)＞莖枝，其中胡桃楸葉中總鞣質(zhì)的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)約是胡桃楸莖枝中的2.3倍。胡桃楸莖枝、葉和果實(shí)中總鞣質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化見(jiàn)圖1。不同時(shí)間采收的胡桃楸莖枝樣品中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化無(wú)一定的規(guī)律;胡桃楸葉中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)從5月底開(kāi)始迅速升高，6月底采收的胡桃楸葉樣品中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5月底采收的1.6倍，此后胡桃楸葉中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)相對(duì)平穩(wěn);對(duì)于6、7月采收的2個(gè)胡桃楸果實(shí)樣品，7月采收的樣品中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)約是6月采收的1.5倍。

圖1 胡桃楸莖枝、葉和果實(shí)中總鞣質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化Fig.1 Dynamic variation of total tannins content in the stem，leaf and fruit of Juglans mandshurica

3 討論

3.1 干燥方法對(duì)胡桃楸果實(shí)中總鞣質(zhì)的影響 本實(shí)驗(yàn)所測(cè)定的胡桃楸莖枝和葉中總鞣質(zhì)的量與文獻(xiàn)［13］的研究結(jié)果一致，而果實(shí)中總鞣質(zhì)的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù) (38.91 mg/g)較文獻(xiàn)［13］測(cè)得的 (3.58 mg/g)高約10倍。這可能是因?yàn)槲墨I(xiàn)［13］采用陰干的方法干燥樣品，果實(shí)樣品在陰干過(guò)程中顏色迅速由綠色變?yōu)楹稚渲绪焚|(zhì)類(lèi)成分發(fā)生了變化;而本實(shí)驗(yàn)采用的樣品干燥方法為冷凍干燥，果實(shí)干燥后仍保持綠色，其中鞣質(zhì)類(lèi)成分未發(fā)生變化。該研究結(jié)果提示胡桃楸果實(shí)中含有較多的鞣質(zhì)，該成分在陰干過(guò)程中易發(fā)生變化;而胡桃楸莖枝和葉中鞣質(zhì)類(lèi)成分在陰干過(guò)程中不易發(fā)生變化。

3.2 胡桃楸莖枝、葉和果實(shí)中總鞣質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律 采集到1～12月12個(gè)胡桃楸莖枝樣品，其中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在平均值上下波動(dòng)，其動(dòng)態(tài)變化無(wú)一定的規(guī)律。胡桃楸葉從5月開(kāi)始長(zhǎng)出，其中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低;到6月底胡桃楸葉已經(jīng)逐漸茂盛，其中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)迅速增高;此后總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)趨于平穩(wěn)。8月胡桃楸果實(shí)已經(jīng)成熟，被人采收，因此本實(shí)驗(yàn)只收集到6、7月2個(gè)胡桃楸果實(shí)樣品。胡桃楸果實(shí)在6月底初長(zhǎng)成，其內(nèi)果皮沒(méi)有木質(zhì)化，全果中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低;至7月底果實(shí)近成熟，其中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)也隨之增高。綜上所述，胡桃楸葉和果實(shí)中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)與各自的生長(zhǎng)周期基本吻合。

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