閆曙光 周永學(xué) 惠 毅 成都中醫(yī)藥大學(xué)（成都 610075）

脂肪肝是由多種原因引起的肝細胞內(nèi)脂肪堆積和脂肪變性為特征的病理狀態(tài)。近年來脂肪肝的發(fā)病主要與肥胖的高發(fā)密切相關(guān)，肥胖與脂肪肝的關(guān)系比飲酒與脂肪肝的關(guān)系更為密切［1］。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)肥胖導(dǎo)致的脂肪肝60%都是由營養(yǎng)過剩引起的［2］。目前對非酒精性脂肪肝的治療以合理飲食和增加體力運動為主的生活方式的干預(yù)較為有效，但依從性不夠。臨床上尚缺乏較滿意的抗脂肪肝藥，已報道的考來烯胺、煙酸肌醇酯、苯扎貝特、吉非羅齊等藥物雖然可以從不同環(huán)節(jié)抑制脂肪肝，但不良反應(yīng)多、療程長，故臨床應(yīng)用受到限制。我們在臨床應(yīng)用通便玉蓉丸治療便秘的同時，發(fā)現(xiàn)該藥治療非酒精性脂肪肝以及高脂血癥療效顯著，為了進一步驗證其治療作用，我們對該藥治療非酒精性脂肪肝及高脂血癥進行了實驗研究。

1 材 料 1.1 實驗動物 雄性SD大鼠66只，體重80～120g清潔級，由西安交大醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，動物的飼養(yǎng)和實驗在陜西中醫(yī)學(xué)院清潔級動物實驗室。

1.2 儀器 低溫冰箱：日本三洋公司；低溫4℃離心機：上海第三儀器廠；LD－10001型電子天平：沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司；721分光光度計：上海第三儀器廠；奧林巴斯顯微鏡（Imager A1Zeiss）。OET－200半自動生化分析儀：北京尚精光電技術(shù)有限公司。

1.3 藥物 通便玉蓉丸：陜西中醫(yī)學(xué)院制藥廠制備，批號：20101001，通便玉蓉丸每克含生藥1.977g，用時將藥粉與蒸餾水配制成所需濃度的混懸液。東寶肝泰：通化東寶藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號：100114，用時將藥片研磨后用蒸餾水配制成所需濃度的混懸液。

1.4 試劑和試劑盒 游離脂肪酸（FFA）、超氧化物歧化酶（SOD）蛋白測定試劑盒購于南京建成生物醫(yī)學(xué)工程研究所；總膽固醇（TC）試劑盒：上海榮盛生物技術(shù)有限公司；甘油三脂（TG）試劑盒：溫州津瑪生物科技有限公司；膽固醇：湖南祁東縣同信生化廠；10%水合氯醛：陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑研究中心。

2 方 法 2.1 動物模型的建立和給藥 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機分為正常組、模型組、東寶肝泰組、通便玉蓉丸大、中、小劑量組，每組10只。正常組普通飼料喂養(yǎng)，余高脂飼料喂養(yǎng)，配方根據(jù)文獻報道［3］進行改進（普通飼料77%、膽固醇1%、豬油20%、花生5%、奶粉5%、白糖2%），喂養(yǎng)16周后，每組隨機抽取1只，取肝臟，可見大鼠肝臟體積增大，呈淡黃色，觸之有油膩感。鏡下見肝細胞腫大變圓，胞漿疏松，內(nèi)含大的脂肪滴，將細胞核擠壓向胞膜，確定造模成功（見圖2）。開始灌胃給藥，正常組：生理鹽水10mL／kg／d，模型組：生理鹽水10mL／kg／d，大劑量組：通便玉蓉丸混懸液3.67g／kg／d，中劑量組：1.83g／kg／d，小劑量組：0.915g／kg／d，東寶肝泰組：東寶肝泰混懸液0.45g／kg／d，給藥30d。給藥期間除正常對照組外，其余各組繼續(xù)給予高脂飲食，直至實驗結(jié)束。

2.2 樣本的采集與檢測 實驗動物禁食12h，10%水合氯醛麻醉，心臟采血，4000轉(zhuǎn)／分離心15min清液，檢測血清TG、TC、FFA含量。取肝臟，稱重后計算肝指數(shù)。肝組織制成10%的組織勻漿，測勻漿TC、TG、SOD，取部分肝組織4%甲醛固定。做病理切片行病理組織學(xué)檢查。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0處理數(shù)據(jù)，計量資料采用均數(shù)±標準差（）表示。

3 實驗結(jié)果 3.1 一般情況 各組高脂飲食喂養(yǎng)大鼠10周后反應(yīng)較正常組遲鈍，毛色發(fā)黃，失去光澤，喜扎堆，懶動且攝食量逐漸減少。灌胃給藥后通便玉蓉丸大、中、小劑量組在灌胃兩天后均出現(xiàn)不同程度的稀便，其中以大劑量組最為明顯，約3周后稀便逐漸消失，但便質(zhì)軟，含水量增多。

3.2 各組實驗大鼠血清膽固醇、甘油三酯、游離脂肪酸的變化 表1顯示：模型組與正常組比較血清甘油三脂、膽固醇和游離脂肪酸濃度升高且有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），符合高脂血癥的發(fā)病特點。各給藥組與模型組比較，通便玉蓉丸大、中劑量組能降低血清TG、TC和FFA水平且有統(tǒng)計學(xué)意義P＜0.05，通便玉蓉丸小劑量組能降低血清TC、FFA水平且有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。通便玉蓉丸大、中劑量組的降血脂作用最強。東寶肝泰對血清TG、TC和FFA的影響無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 對非酒精性脂肪肝大鼠血清膽固醇、甘油三酯、游離脂肪酸含量的影響

3.3 各組大鼠肝組織勻漿甘油三酯、膽固醇、超氧化物歧化酶的變化 表2表明：模型組大鼠肝臟勻漿TG、TC含量明顯高于正常組，超氧化物歧化酶水平低于正常組，且均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），符合非酒精性脂肪肝的特點。與模型組比較，通便玉蓉丸大、中劑量以及東寶肝泰均能明顯降低肝組織內(nèi)TG、TC水平且有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），通便玉蓉丸小劑量則無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。通便玉蓉丸大劑量及東寶肝泰能顯著增加肝組織內(nèi)SOD活性（P＜0.05），通便玉蓉丸中、小劑量則無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與東寶肝泰組比較，通便玉蓉丸大、中劑量能更有效降低肝內(nèi)TG、TC含量且有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。通便玉蓉丸大劑量組升高肝內(nèi)SOD活性的作用于東寶肝泰組相當(dāng)（P＞0.05）。

表2 對非酒精性脂肪肝大鼠肝組織勻漿甘油三脂、膽固醇、超氧化物歧化酶含量的影響

圖1

圖2

圖3

圖4

圖5

圖6

3.4 各組大鼠給藥前后體重以及肝指數(shù)變化 表3表明，各組大鼠在治療前體重均明顯高于正常組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），符合肥胖特征。灌胃給藥后與模型組相比，通便玉蓉丸大、中劑量體重明顯降低且有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），通便玉蓉丸大、中、小劑量組，東寶肝泰肝指數(shù)明顯降低且有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與東寶肝泰組比較，通便玉蓉丸大劑量體重明顯降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；通便玉蓉丸大、中劑量肝指數(shù)降低顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 治療前后體重以及肝指數(shù)的變化

3.5 肝組織病理學(xué)變化 3.5.1 大體形態(tài)觀察：正常組大鼠肝臟顏色鮮紅，質(zhì)地柔軟，富有彈性；模型組大鼠肝臟體積明顯增大，呈黃褐色，觸之有油膩感，邊緣飽滿，質(zhì)地稍韌。

3.5.2 肝臟組織HE染色觀察：正常大鼠肝細胞無脂肪變性，肝索排列整齊，肝竇清晰（圖1）；模型組肝細胞發(fā)生程度不等脂肪變性，肝細胞腫大變圓，胞漿疏松，內(nèi)含大的脂肪滴，將細胞核擠壓向胞膜，肝索排列混亂，肝竇受壓變形（圖2）；通便玉蓉丸大劑量組（圖3），中劑量組（圖4）肝臟未見脂變細胞，可見少量炎細胞浸潤。通便玉蓉丸小劑量組（圖5）以及東寶肝泰組（圖6）可見大量脂變肝細胞以及炎細胞。

4 討 論 通便玉蓉丸是周永學(xué)教授臨床治療腎虛精虧型便秘常用方，由肉蓯蓉、當(dāng)歸、芒硝等中藥組成，具有滋補腎精，軟堅散結(jié)，滋陰潤腸、運下通便的功效。目前對非酒精性脂肪肝的中醫(yī)藥治療以從肝脾論治為主［4－6］，通便玉蓉丸則體現(xiàn)了從腎論治非酒精性脂肪肝的思想。通便玉蓉丸所治的非酒精性脂肪肝及高脂血癥患者多表現(xiàn)為腎精虧虛，腎精不足則腎陰、腎陽的功能不能正常發(fā)揮，腎陰不足，則水不涵木，肝的疏泄功能失常；腎陽不足則血液運行的原動力不足，腎陽不能溫煦脾陽則脾不能正常運化水濕痰濁，進而導(dǎo)致脂肪肝以及高脂血癥等脂代謝紊亂性疾病。通便玉蓉丸能滋補腎精，有助于腎陰、腎陽功能的發(fā)揮，方中當(dāng)歸活血潤腸、芒硝通便瀉下，促進了水濕痰濁的轉(zhuǎn)運，從而起到影響脂質(zhì)代謝轉(zhuǎn)運，對非酒精性脂肪肝以及高脂血癥起到治療作用。實驗研究證明該藥能降低脂肪肝大鼠肝組織內(nèi)的甘油三脂和膽固醇含量，升高因脂肪肝而降低的組織內(nèi)SOD水平，而起到保護肝細胞的作用，SOD在機體的氧化和抗氧化平衡中起到了極為關(guān)鍵的作用，能清除超氧離子自由基，保護細胞免受損傷［7］。通便玉蓉丸能能降低高脂血癥大鼠血清甘油三脂、膽固醇和游離脂肪酸水平，起到治療高脂血癥的作用，且能有效降低肥胖大鼠體重，王歡［8］等通過實驗研究也發(fā)現(xiàn)該藥能有效降低便秘小鼠的體重的作用。高脂血是動脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病等高發(fā)疾病的主要誘發(fā)因素，因此本藥物通過治療高脂血癥對該類疾病又有一定的預(yù)防作用。本實驗從探索的角度初步驗證了通便玉蓉丸對非酒精性脂肪肝以及高脂血癥的治療作用，其具體作用機制還需進一步研究。

［1］范建高.非酒精性脂肪性肝病的流行率［J］.中國醫(yī)師進修雜志，2006，9（29）：9.

［2］鐘 嵐，范建高，王國良，等.肥胖、高脂血癥性脂肪性肝［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，17（2）：16－20.

［3］張玉峰，陳文惠.非酒精性脂肪肝動物模型造模方法的研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2002，12（2）：123－125.

［4］李合國.國醫(yī)大師李振華教授從脾論治非酒精性脂肪肝經(jīng)驗［J］.中醫(yī)研究，2011，24（7）：62－63.

［5］劉淑紅，高尚社.國醫(yī)大師周仲英教授辨治脂肪肝驗案賞析［J］.光明中醫(yī)，2011，26（7）：1319－1321.

［6］杜秀英.中醫(yī)對脂肪肝的認識及治療現(xiàn)狀［J］.陜西中醫(yī)，2002，23（1）：85－86.

［7］邴飛虹，常 青.華夏小蔥制劑對脂肪肝大鼠抗脂質(zhì)過氧化損傷及細胞因子損傷的影響［J］.中醫(yī)雜志，2007，48（5）：446－449.

［8］王 歡，周永學(xué).通便玉蓉丸通便效應(yīng)及機制的實驗研究［J］.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，34（4）：76－78.