任小巍， 袁慶華

（1.中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193； 2.蘭州大學草地農(nóng)業(yè)科技學院，蘭州 730020）

草地早熟禾（Poa pratensis Linn.）是重要的多年生草坪草植物，適于生長在冷濕的氣候環(huán)境，以其綠期長、色澤翠綠、質(zhì)地優(yōu)美而著稱［1－3］，在我國的北方及中部地區(qū)種植非常廣泛。由于草地早熟禾具有冷季型草坪草的特性，在夏季高溫高濕的環(huán)境脅迫下，常造成病害的大面積發(fā)生［4］，其中，腐霉枯萎病（Pythiumdisease，病原菌為 Pythium aphanidermatum）在高溫高濕條件下侵染速度極快，能在1～2d之內(nèi)毀壞大面積草坪，形成大片枯草禿斑，破壞相當嚴重，是一種毀滅性病害［5－7］。

目前國內(nèi)學者對冷季型草坪草主要病害發(fā)生及其流行規(guī)律已有一些報道［8］，但對草地早熟禾品種間對腐霉枯萎病的抗性缺少系統(tǒng)的研究。根據(jù)董愛香等的研究［9］，不同品種草地早熟禾抗褐斑病病害能力存在很大的差異，因而了解品種間的抗病性差異，對于篩選抗病品種和防治病害的發(fā)生具有重要的指導意義。本研究在溫室條件下采用不同的接種方法，對來自國內(nèi)外的45個草地早熟禾品種進行了苗期抗病性評價，比較了不同品種對腐霉枯萎病的抗性，旨在為抗腐霉枯萎病草地早熟禾品種的選擇及病害防治提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試草地早熟禾材料共計45份，由中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所牧草種質(zhì)資源實驗室提供，品種名稱及來源見表1。

腐霉枯萎病病原菌瓜果腐霉（Pythium aphanider－matum）：從北京龍熙高爾夫球場發(fā)病草坪上采集并分離后經(jīng)過致病性測定獲得。

1.2 試驗方法

1.2.1 幼苗培養(yǎng)及接種

將待評價的草地早熟禾材料播種于直徑11cm×高9cm的花盆中，室內(nèi)溫度為25℃，每盆保留130株幼苗。試驗共分3組接種處理。

表1 45份草地早熟禾品種及來源

（1）傳統(tǒng)土壤接種法：將滅菌后的土壤與長滿菌絲的玉米沙培養(yǎng)基按土壤質(zhì)量：培養(yǎng)基直徑＝140g∶3cm的比例混合后裝盆，均勻撒種種苗。

（2）改進的土壤接種法：先將滅菌土壤裝盆后撒種育苗，同時在盆中央保留直徑為3cm的空白區(qū)域用于接種病菌，待播種后苗齡15d時進行接種，即將一直徑為2.5cm的菌餅埋入空地處。

（3）培育30d的草地早熟禾幼苗接種：與改進的土壤接種法基本相同，不同之處是選擇30d的幼苗進行接種。

上述3種接種試驗均設(shè)3次重復和未接種空白對照。接種在溫室中（30～37℃，RH 90%以上）進行。

1.2.2 抗病性評價

傳統(tǒng)土壤接種法試驗在幼苗出土后20d統(tǒng)計草地早熟禾各品種的發(fā)病率，改進的土壤接種法和培育30d的草地早熟禾幼苗接種法于接種后20d統(tǒng)計幼苗的發(fā)病率，計算公式如下：

根據(jù)發(fā)病率將45份草地早熟禾的抗病性劃分為4個等級，即：發(fā)病率＜20%為高抗，20%≤發(fā)病率＜25%為中抗，25%≤發(fā)病率＜30%為中感，發(fā)病率≥30%為高感。

根據(jù)發(fā)病率將45份材料劃分為高抗、中抗、中感、高感4類，只是為了對供試品種之間抗病性強弱做一個比較與分類。

2 結(jié)果與分析

從3種接種方法試驗的發(fā)病率統(tǒng)計結(jié)果中可以看出（表2），不同處理草地早熟禾品種間抗性均表現(xiàn)一定差異。采用傳統(tǒng)土壤接種法發(fā)病率變化范圍為19.0%～39.2%，相對抗病性強的品種有：‘公園’、‘午夜’、‘納蘇’等，其中以‘公園’的發(fā)病率最低只有19.0%，該品種抗病性最強。易感病的品種主要有：‘莫桑斯克’、‘雪狼’、‘大青山’等，其中以‘莫桑斯克’的發(fā)病率最高，為39.2%，表明其抗病能力最差。其他品種抗病性介于兩者之間。

采用改進的土壤接種法發(fā)病率變化范圍為13.2%～32.3%，其中抗病性強的品種主要有：‘公園’、‘肯塔基’、‘開魯坦’等，以‘公園’的發(fā)病率最低為13.2%，說明在本次試驗中‘公園’的抗病性最高。感病品種有‘阿蓋爾’、‘莫桑斯克’、‘藍狐’等，以‘阿蓋爾’和‘莫桑斯克’的發(fā)病率最高，分別為32.3%與32.2%，表明這兩個品種抗病能力較差。其他品種的抗病性介于兩者之間（表2）。

培育30d的草地早熟禾幼苗接種法發(fā)病率變化范圍為12.3%～31.5%，抗病性比較強的品種有：‘肯塔基’、‘開魯坦’、‘公園’等，其中‘肯塔基’的發(fā)病率最低，僅為12.3%，說明在該試驗條件下此品種的抗病性最強。感病品種有：‘恩坦沙’、‘菲爾京’、‘阿蓋爾’等，其中‘恩坦沙’的發(fā)病率最高，高達31.5%，說明在該試驗條件下，恩坦沙的抗病能力最差。其他品種的發(fā)病率介于兩者之間（表2）。

表2 草地早熟禾對腐霉枯萎病的抗性鑒定1）

根據(jù)以上試驗結(jié)果，及對45份草地早熟禾品種對腐霉枯萎病抗性的綜合評價得知，各品種平均發(fā)病率變化范圍為15.33%～33.53%，其比率分布如圖1所示。其中，高抗材料有8份，占17.8%；中抗材料有12份，占26.7%；中感材料有11份，占24.4%；高感材料有14份，占31.1%。由分布圖可以看出，高抗區(qū)域種質(zhì)材料最少，而高感區(qū)域種質(zhì)材料所占比例最大。最終得到高抗材料為：‘公園’、‘肯塔基’、‘開魯坦’等；中抗品種有：‘藍孔雀’、‘挑戰(zhàn)者’、‘百思特’等；中感品種有：‘迪斯蒂尼’、‘諾馬’、‘肯利’等；高感品種有：‘莫桑斯克’、‘阿蓋爾’、‘特羅衣’等（表2）。

圖1 草地早熟禾種質(zhì)材料抗感比率分布圖

通過采用3種接種方法對草地早熟禾腐霉枯萎病進行抗性評價，結(jié)果表明，不同接種方法腐霉枯萎病的發(fā)病率存在顯著差異，其中采用傳統(tǒng)的土壤接種法發(fā)病率最高，平均發(fā)病率為32.02%，有17個品種的發(fā)病率在35%以上，以‘莫桑斯克’的發(fā)病率最高，達39.2%，‘公園’的發(fā)病率最低，為19.0%。采用改進的土壤接種法和培育30d的草地早熟禾幼苗接種法之間的平均發(fā)病率差異不大，分別為23.73%和22.47%，發(fā)病率明顯低于傳統(tǒng)的土壤接種法的發(fā)病率，其中改進的土壤接種法中以‘公園’的發(fā)病率最低，為13.2%，‘阿蓋爾’的發(fā)病率最高為32.3%；培育30d的草地早熟禾幼苗接種法‘肯塔基’的發(fā)病率最低為12.3%，‘菲爾京’的發(fā)病率最高為31.4%，都明顯低于傳統(tǒng)的土壤接種法中的最高發(fā)病率39.2%和最低發(fā)病率19.0%。

將供試品種在3個處理中表現(xiàn)出的抗病性進行排序，結(jié)果表明除‘蘭肯’在不同接種方法中的抗病性變化較大外，其他品種均表現(xiàn)出了穩(wěn)定的抗感性能：如‘公園’、‘午夜’、‘肯塔基’和‘開魯坦’，在3種接種方法中其抗病性排序均在前5位，表現(xiàn)出穩(wěn)定的抗病性；‘莫桑斯克’、‘菲爾京’、‘雪狼’3個品種在3種接種方法處理中的抗病性排序都處于后7位，表現(xiàn)出穩(wěn)定的感病性，說明3種接種方法得到的結(jié)果基本一致。進一步分析發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)的土壤接種法，平均發(fā)病率顯著高于改進的土壤接種法和培育30d的草地早熟禾幼苗接種法；改進的土壤接種法所選用的幼苗比培育30d的草地早熟禾幼苗接種法所選的幼苗苗齡少15d，但與后者相比，得到的抗病性變化無顯著差異，兩者的平均發(fā)病率僅相差1.26%；各品種在不同接種方法中表現(xiàn)出較穩(wěn)定的抗感性，說明3種接種方法均可用于此類抗病性的評價。

3 結(jié)論與討論

（1）腐霉枯萎病是由腐霉（Pythiumspp.）引起的一種土傳病害，目前全世界已報道的腐霉有100多種，但就北京而言主要以瓜果腐霉（Pythium aphanidermatum）為主［10－11］。雖然腐霉在土壤中的活動隨季節(jié)變化，春季最多、秋季次之、夏季最少、冬季基本不活動，但瓜果腐霉的最適生長溫度為30～34℃［12－13］，其侵染草坪進而引起發(fā)病需在夏季持續(xù)高溫高濕的條件下才能進行，因此，試驗中必須保證穩(wěn)定的高溫高濕條件［14］。

（2）本研究采用3種接種方法評價草地早熟禾對腐霉枯萎病的抗性，其中傳統(tǒng)的土壤接種法評價的結(jié)果表明枯萎病的發(fā)病率明顯商于改進的土壤接種法和培育30d的草地早熟禾幼苗接種法，后兩種方法之間平均發(fā)病率差異不大，說明傳統(tǒng)的土壤接種法更適合進行抗病品種的篩選和評價，能夠真實地反映各品種對腐霉枯萎病的抗性，同時此接種方法更接近自然感病的條件。其他兩種接菌方法都是在幼苗種植后15d和30d進行接菌，顯然發(fā)病率會低于第一種接種方法，這也說明了腐霉枯萎病對種子的萌發(fā)和幼苗期的危害是比較大的。

（3）不同品種間對腐霉枯萎病的抗性存在較大差異，各品種抗病性強弱的排序在不同接種試驗中有一定的差異，但絕大多數(shù)品種在不同的接種方法試驗中抗病性排序變化幅度不大，基本趨于一致。只有個別品種如‘蘭肯’草地早熟禾，在3個接種試驗中排序差異較大，在3種接種方法試驗中的抗性排序分別為22、11、40，說明該品種對種接方法比較敏感，易受到外部環(huán)境或者自身因素的影響，對于這類品種需進行多次及反復的接種試驗，以便獲得較為準確的接種方法及正確的評價結(jié)果。

（4）研究結(jié)果將45個草地早熟禾品種按抗腐霉枯萎病強弱分為4類，高抗品種有：‘公園’、‘肯塔基’、‘開魯坦’、‘午夜’、‘納蘇’、‘特拉內(nèi)爾’、‘科羅拉多’、‘金錢豹’；中抗品種有：‘藍孔雀’、‘挑戰(zhàn)者’、‘百思特’、‘獎品’、‘藍鳥’、‘諾馬’、‘各綠’、‘男爵’、‘坎勃魯’、‘百勝’、‘槍手股’、‘新歌來德’；中感品種有：‘迪斯蒂尼’、‘華盛頓’、‘肯利’、‘蘭肯’、‘優(yōu)異’、‘優(yōu)美’、‘諾德’、‘藍寶石’、‘米杰瓦’、‘派拉德’、‘?？死埂?；高感品種有：‘悉斯波特’、‘丹加’、‘普利米德’、‘巴林’、‘雷賓斯’、‘藍狐’、‘恩坦沙’、‘特羅衣’、‘洪茲維利’、‘大青山’、‘阿蓋爾’、‘雪狼’、‘菲爾京’、‘莫桑斯克’。研究獲得的初步結(jié)果為今后草坪生產(chǎn)和養(yǎng)護管理實踐中品種的選擇提供了理論依據(jù)。

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