殷幼平， 申劍飛， 時(shí)玉娟， 劉美昌， 邵長(zhǎng)文， 王中康＊

（1.重慶大學(xué)生物工程學(xué)院，重慶市殺蟲真菌農(nóng)藥工程技術(shù)中心，重慶 400030；2.山東省日照市植保站，日照 276800）

金龜子屬鞘翅目金龜總科（Scarabaeoidea），其幼蟲俗稱蠐螬，是一類重要的地下害蟲。主要為害植物的地下部分，具有一定的隱蔽性且分布廣泛，其危害性在地下害蟲中居首位，是一類世界性難防的地下害蟲［1－4］。目前危害我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的花生蠐螬主要是銅綠異麗金龜（Anomala corpulenta），暗黑鰓金龜（Holotrichia parallela）和華北大黑鰓金龜（Holotrichia oblita）。近年來(lái)，蠐螬在我國(guó)主要花生產(chǎn)區(qū)山東、河南等省，發(fā)生面積擴(kuò)大，危害加重。傳統(tǒng)使用的高毒農(nóng)藥特丁硫磷、呋喃丹等因環(huán)境污染嚴(yán)重已被禁用，而替代化學(xué)農(nóng)藥辛硫磷、毒死蜱等用于防治花生蠐螬，亦存在土壤、水體污染問(wèn)題和殘留問(wèn)題［3］。金龜子綠僵菌（Metarhizium anisopliae）是一類重要的生防真菌，在生產(chǎn)上已得到廣泛應(yīng)用，全世界約有200多種昆蟲能被綠僵菌的不同菌株感染致死［5－6，21］。國(guó)外已有綠僵菌登記產(chǎn)品防治地下害蟲的報(bào)道［7－9］，國(guó)內(nèi)目前尚無(wú)蠐螬綠僵菌商業(yè)化制劑登記的報(bào)道。重慶大學(xué)于2007年從花生地蠐螬僵蟲和土壤中分離得到一株高效抗逆的金龜子綠僵菌，編號(hào)CQMa128。依據(jù)形態(tài)學(xué)特征和分子鑒定序列比對(duì)結(jié)果將其鑒定為金龜子綠僵菌大孢變種（Metarhizium anisopliae var.majus）。室內(nèi)生測(cè)結(jié)果表明其對(duì)花生主要蠐螬種類銅綠異麗金龜、暗黑鰓金龜和華北大黑鰓金龜?shù)挠紫x等都具有較高的致病力［23］。本文研究了重慶大學(xué)研制的綠僵菌CQMa128微粒劑和乳粉劑對(duì)田間花生蠐螬的防治效果、使用技術(shù)以及對(duì)蠐螬主要天敵昆蟲臀鉤土蜂［10－12］（Tiphiidae）的影響，以期為開(kāi)發(fā)安全有效的綠僵菌生物制劑奠定基礎(chǔ)并提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 田間試驗(yàn)地條件

田間試驗(yàn)設(shè)在山東省日照市三莊鎮(zhèn)“千畝國(guó)家無(wú)公害花生示范生產(chǎn)基地”（E119°27′，N36°47′）。前作均為花生，常年蠐螬發(fā)生嚴(yán)重，蠐螬蟲口基數(shù)15～26頭／m2。試驗(yàn)地花生品種為主栽大花生抗病優(yōu)良品種‘日花1號(hào)’?；ㄉ擉┲饕獮殂~綠異麗金龜和暗黑鰓金龜幼蟲。試驗(yàn)區(qū)土壤為沙質(zhì)土，肥力中等，pH為5.5～6.5。

1.2 供試藥劑

10億孢子／g綠僵菌CQMa128微粒劑［29］（農(nóng)藥劑型代碼：MG）；100億孢子／g綠僵菌CQMa128乳粉劑［30－31］（農(nóng)藥劑型代碼：EP）；上述供試產(chǎn)品全部由重慶大學(xué)生物工程學(xué)院研制，委托重慶重大生物技術(shù)發(fā)展有限公司生產(chǎn)。對(duì)照化學(xué)藥劑：15%毒死蜱顆粒劑（山東聯(lián)合農(nóng)藥有限公司）；48%毒死蜱乳油（山東聯(lián)合農(nóng)藥有限公司）。毒死蜱［24］是一種高效、低毒、低殘留的有機(jī)磷含氮雜環(huán)類殺蟲殺螨劑，對(duì)地下害蟲具有較好的防治效果。空白對(duì)照為不施藥，微粒劑以相同數(shù)量的沙土替代；乳粉劑以相同數(shù)量的清水替代。

1.3 田間試驗(yàn)處理及方法

（1）花生播種期（2009年4月及2010年4月施藥），采用10億孢子／g綠僵菌CQMa128緩釋型微粒劑對(duì)花生田中2008年和2009年越冬的3齡蠐螬老熟幼蟲進(jìn)行防控，施藥劑量分別為225、300、375kg／hm2，采用拌土方式進(jìn)行施藥處理，并設(shè)15%毒死蜱顆粒劑15kg／hm2化學(xué)藥劑對(duì)照和沙土空白對(duì)照，定期調(diào)查田間蟲口數(shù)量變化。整個(gè)試驗(yàn)共設(shè)20個(gè)小區(qū)，分為5個(gè)區(qū)組。每小區(qū)設(shè)1個(gè)處理，每個(gè)區(qū)組含5個(gè)不同處理的小區(qū)（相當(dāng)于每個(gè)處理4次重復(fù)）。區(qū)組內(nèi)的小區(qū)隨機(jī)排列，小區(qū)面積134m2，各小區(qū)間設(shè)2m以上的保護(hù)行，以防小區(qū)間互相干擾，所有試驗(yàn)小區(qū)間的栽培管理?xiàng)l件均基本保持一致。

（2）花生幼果期是花生蠐螬為害的高峰期，有必要在微粒劑施藥的基礎(chǔ)上進(jìn)行下一輪防治。分別于2009年7月及2010年7月采用100億孢子／g綠僵菌CQMa128乳粉劑對(duì)當(dāng)年的1～2齡蠐螬進(jìn)行防控，施藥劑量為2.5、5、7.5kg／hm2，采用灌墩方式進(jìn)行施藥處理，同時(shí)設(shè)化學(xué)藥劑對(duì)照48%毒死蜱乳油4.5L／hm2和清水空白對(duì)照。定期調(diào)查田間蟲口數(shù)量變化。試驗(yàn)小區(qū)排列設(shè)計(jì)和試驗(yàn)條件同微粒劑施藥處理。施藥時(shí)間選擇在傍晚17：00－19：00進(jìn)行［13］，以減輕夏日陽(yáng)光紫外線對(duì)綠僵菌孢子的殺傷。

（3）在綠僵菌CQMa128微粒劑防治試驗(yàn)中，分別于施藥后7、14、21、28d，調(diào)查各處理區(qū)每200株花生植株中花生蠐螬寄生性天敵臀鉤土蜂蛹的數(shù)量變化。在綠僵菌CQMa128乳粉劑的防治試驗(yàn)中，分別于施藥后7、14、21、28d，調(diào)查各處理區(qū)每200株花生植株中臀鉤土蜂成蟲數(shù)量，觀察綠僵菌CQMa128制劑的施用是否對(duì)臀鉤土蜂的種群存活變化存在影響。

1.4 田間防效調(diào)查方法

在綠僵菌微粒劑防控試驗(yàn)中，分別于施藥后10、20、30、40、50d進(jìn)行防治效果調(diào)查。在綠僵菌乳粉劑防控試驗(yàn)中，分別于施藥后10、15、20、25、30d進(jìn)行防治效果調(diào)查。根據(jù)各處理小區(qū)的蟲口減退率計(jì)算出各處理的平均校正防效，并在花生成熟收獲期調(diào)查各處理的保果效果，測(cè)算出平均保果率和平均花生產(chǎn)量鮮重。

調(diào)查方法為在每小區(qū)內(nèi)采取平行跳躍式5點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)40墩花生，重復(fù)3次，調(diào)查總面積為9m2，根據(jù)調(diào)查結(jié)果計(jì)算各處理的蟲口減退率、平均校正防治效果及保果率［15－16］。計(jì)算 公式［25］如下：蟲口減 退率＝（處理區(qū)施藥前蟲數(shù)－處理區(qū)施藥后蟲數(shù)）∕處理區(qū)施藥前蟲數(shù)×100%；校正防治效果＝（處理區(qū)蟲口減退率－對(duì)照區(qū)蟲口減退率）∕（100%－對(duì)照區(qū)蟲口減退率）×100%；保果率＝（對(duì)照區(qū)被害果率－處理區(qū)被害果率）／對(duì)照區(qū)被害果率×100%。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理方法

采用Microsoft Excel 2003軟件和DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（2008版）對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理［17］，并用Duncan新復(fù)極差法對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性差異分析比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 花生播種期10億孢子／g CQMa128微粒劑的防治效果

在綠僵菌CQMa128微粒劑施藥后進(jìn)行田間藥效調(diào)查，最早可在施藥后20d左右發(fā)現(xiàn)有被侵染的蠐螬僵蟲出現(xiàn)，表明綠僵菌CQMa128能在當(dāng)?shù)赝寥乐杏行Т婊畈⑶秩鞠擉┲滤?。且在每個(gè)防治效果調(diào)查時(shí)間段（10、20、30、40、50d）調(diào)查沙土空白對(duì)照的蟲口變化情況，其蟲口減退率均小于3%。連續(xù)2年（2009—2010年）的田間試驗(yàn)結(jié)果（表1）表明，CQMa128微粒劑施藥后的各處理均能對(duì)田間3齡花生蠐螬產(chǎn)生持續(xù)的防治效果。高劑量處理區(qū)（375kg／hm2）在施藥后30～40d內(nèi)，其平均校正防效達(dá)到最大值（75.58%～80.03%），且與同時(shí)期化防對(duì)照處理區(qū)（15%毒死蜱顆粒劑）的平均校正防效83.61%～87.96%之間沒(méi)有顯著性差異（p≥0.05），說(shuō)明高劑量（375kg／hm2）綠僵菌CQMa128緩釋性微粒劑在施藥后30～40d對(duì)田間3齡花生蠐螬的防治效果最好。微粒劑施藥50d后，各處理的平均校正防效均有下降趨勢(shì)，這是因?yàn)榇藭r(shí)接近金龜子產(chǎn)卵期，田間花生蠐螬基數(shù)開(kāi)始上升，所以有必要花生幼果期對(duì)田間1～2齡的蠐螬進(jìn)行二次防控，確?；ㄉa(chǎn)量和品質(zhì)。

表1 金龜子綠僵菌CQMa128微粒劑的田間平均校正防效

2.2 花生幼果期100億孢子／g CQMa128乳粉劑的防治效果

每年6－7月間的花生幼果期是田間金龜子成蟲產(chǎn)卵的高峰期，此時(shí)金龜子成蟲集中于花生根部土層中產(chǎn)卵，致使田間各處理中1～2齡蠐螬數(shù)量大幅增加，并集中為害花生幼果，因此幼果期是藥劑防治花生蠐螬的關(guān)鍵時(shí)期［22］。在綠僵菌CQMa128乳粉劑施藥后進(jìn)行田間藥效調(diào)查，最早可在施藥后10d左右發(fā)現(xiàn)有被侵染的蠐螬僵蟲出現(xiàn)，表明乳粉劑對(duì)田間花生蠐螬的侵染效果較好。且在每個(gè)防治效果調(diào)查時(shí)間段（10、15、20、25、30d）調(diào)查清水空白對(duì)照的蟲口變化情況，其蟲口減退率均小于1%。連續(xù)2年（2009－2010年）的試驗(yàn)結(jié)果（表2）表明，CQMa128乳粉劑施藥后能產(chǎn)生持續(xù)的侵染效果，各處理均能對(duì)田間1～2齡花生蠐螬產(chǎn)生一定的防治效果。其中高劑量處理區(qū)（7.5kg／hm2），在施藥后15～20d內(nèi)，其平均校正防效就達(dá)到最大值（77.59%～86.46%），且與同時(shí)期化防對(duì)照處理區(qū)（48%毒死蜱乳油）的平均校正防效87.65%～92.37%之間沒(méi)有顯著性差異（p≥0.05）。高劑量處理區(qū)（7.5kg／hm2）在施藥30d后其最終防效保持在80%以上（表2），表明高劑量綠僵菌CQMa128乳粉劑在施藥后30～40d對(duì)田間1～2齡花生蠐螬的防治效果最好，能夠有效減輕田間蠐螬對(duì)花生幼果的危害。

2.3 保果率和花生產(chǎn)量鮮重

在花生成熟收獲時(shí)節(jié)，對(duì)各混合處理小區(qū)（微粒劑和乳粉劑先后施藥，高、中、低3個(gè)劑量處理）的花生正常果數(shù)和被害果數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)調(diào)查，計(jì)算出各處理的平均保果率（表3）。同時(shí)對(duì)各處理花生產(chǎn)量鮮重進(jìn)行測(cè)定。連續(xù)2年（2009－2010年）的試驗(yàn)結(jié)果表明，在高劑量的綠僵菌CQMa128微粒劑（375kg／hm2）和乳粉劑（7.5kg／hm2）混合處理區(qū)中，平均保果率能達(dá)到85.76%～87.13%，保果效果與化防對(duì)照相當(dāng)（p≥0.05），保果效果顯著。花生產(chǎn)量鮮重測(cè)定結(jié)果表明，高劑量的綠僵菌CQMa128微粒劑（375kg／hm2）和乳粉劑（7.5kg／hm2）處理區(qū)中花生產(chǎn)量鮮重比空白對(duì)照處理區(qū)平均高出832.5～916.4kg／hm2，增產(chǎn)效果明顯，顯著減輕了花生產(chǎn)量的損失（表3）。

表3 不同處理下的平均保果率和花生產(chǎn)量鮮重

2.4 綠僵菌生防制劑對(duì)蠐螬天敵－臀鉤土蜂的影響

在10億孢子／g綠僵菌CQMa128微粒劑施藥后每隔7d，連續(xù)4周，分別調(diào)查各處理區(qū)中臀鉤土蜂蛹的存活數(shù)量。綜合連續(xù)2年（2009－2010年）的調(diào)查結(jié)果，得出3個(gè)不同處理區(qū)域中臀鉤土蜂蛹在各個(gè)處理中的平均分布情況（圖1）。結(jié)果表明，存活的臀鉤土蜂蛹數(shù)量在10億孢子／克綠僵菌CQMa128微粒劑處理區(qū)域與空白對(duì)照之間沒(méi)有顯著差異（p≥0.05），大致平均數(shù)量為8～10頭／200株花生。而15%毒死蜱顆粒劑處理區(qū)的臀鉤土蜂蛹數(shù)量呈顯著減少趨勢(shì)，臀鉤土蜂蛹存活率下降60%～70%（圖1）。

在100億孢子／g綠僵菌CQMa128乳粉劑施藥后每隔7d，連續(xù)4周，分別調(diào)查各處理區(qū)臀鉤土蜂成蟲的存活數(shù)量變化情況。綜合連續(xù)2年（2009－2010年）的調(diào)查結(jié)果，得出3個(gè)不同處理區(qū)域中臀鉤土蜂成蟲平均分布情況（圖2）。結(jié)果表明，存活的臀鉤土蜂成蟲數(shù)量分布在100億孢子／克綠僵菌CQMa128乳粉劑處理區(qū)域與空白對(duì)照之間沒(méi)有顯著差異（p≥0.05），大致平均數(shù)量為14～16頭／200株花生。而48%毒死蜱乳油處理區(qū)臀鉤土蜂成蟲數(shù)量呈顯著減少趨勢(shì)，臀鉤土蜂成蟲存活率下降50%～60%（圖2）。

3 討論

金龜子綠僵菌［21］（Metarhizium anisopliae）寄主廣泛，能寄生直翅目、膜翅目、同翅目、雙翅目、鱗翅目、鞘翅目以及半翅目等7個(gè)目、42個(gè)科、約200余種昆蟲、線蟲及螨類。在對(duì)地下害蟲的防治應(yīng)用方面，尤其對(duì)蠐螬類的致病作用一直是綠僵菌高效殺蟲菌株篩選的重要內(nèi)容［17－21］。目前，國(guó)內(nèi)已有利用綠僵菌防治蠐螬的報(bào)道［25－27］，但是利用綠僵菌商業(yè)化制劑對(duì)蠐螬進(jìn)行田間大規(guī)模防控方面國(guó)內(nèi)尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)道。

本研究連續(xù)2年（2009－2010年）采用金龜子綠僵菌CQMa128新制劑對(duì)花生蠐螬進(jìn)行綜合防控，取得了良好的田間防治效果，為今后綠僵菌新制劑在田間大面積推廣應(yīng)用提供了試驗(yàn)基礎(chǔ)。研究結(jié)果表明在花生播種期（4－5月），采用10億孢子／g綠僵菌CQMa128微粒劑（施藥量為375kg／hm2）拌土施藥，可以對(duì)花生田間上一年越冬的3齡花生蠐螬老熟幼蟲進(jìn)行有效防治；在花生幼果期（6－7月）采用100億孢子／g綠僵菌CQMa128乳粉劑（施藥量為7.5kg／hm2）灌墩施藥，可以有效防治此時(shí)田間盛發(fā)的1～2齡花生蠐螬。田間試驗(yàn)結(jié)果充分驗(yàn)證了在花生作物生長(zhǎng)的不同時(shí)期采取以上綜合防治方法，可以顯著減輕蠐螬對(duì)花生植株生長(zhǎng)的危害以及花生果莢產(chǎn)量的損失。

本研究證實(shí)了金龜子綠僵菌CQMa128對(duì)田間花生蠐螬的主要天敵鰓金龜臀鉤土蜂（Tiphia phyllophaga）沒(méi)有毒害作用，故在實(shí)際防控中可結(jié)合保護(hù)利用蠐螬天敵并采用其他生物防治的手段來(lái)綜合防治花生田蠐螬，實(shí)現(xiàn)不同生防措施的有機(jī)結(jié)合與集成應(yīng)用，達(dá)到降低農(nóng)藥殘留、環(huán)境康復(fù)的綠色控害目的。例如可以在花生大田周圍安置頻振式殺蟲燈，誘殺金龜子成蟲，以減少其產(chǎn)卵量；在田間種植對(duì)金龜子有毒的蜜源植物（紅麻，蓖麻）［22］等。此外，綠僵菌的施用可能會(huì)對(duì)植物生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用，Kabaluk和 Ericsson［28］在利用綠僵菌防治嚴(yán)重為害玉米的歐洲金針蟲時(shí)，發(fā)現(xiàn)綠僵菌的施用對(duì)于玉米根系營(yíng)養(yǎng)器官的生長(zhǎng)以及產(chǎn)量都具有促進(jìn)作用。如何提高綠僵菌新制劑的田間綜合防治效果以及綠僵菌的施用是否會(huì)對(duì)花生的生長(zhǎng)具有相應(yīng)的促進(jìn)作用等科學(xué)問(wèn)題還有待進(jìn)一步深入研究。

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