黎潭輝 羅淑芳

祛瘀止痛膠囊是惠東縣中醫(yī)院研發(fā)的醫(yī)院制劑，由姜黃、三七、紅花、桃仁等15味中藥組成，具有活血祛瘀、消腫止痛。用于跌打損傷之瘀腫疼痛。姜黃具有破血行氣、通經(jīng)止痛之功，用于跌撲腫痛［1］，而姜黃素是姜黃中的主要成分，因此建立祛瘀止痛膠囊中姜黃素的含量測(cè)定方法加以控制質(zhì)量具有實(shí)際意義。本文通過(guò)文獻(xiàn)研究，采用HPLC 法測(cè)定樣品中姜黃素的含量［2］，建立祛瘀止痛膠囊中姜黃素的含量測(cè)定方法，為更加有效的控制祛瘀止痛膠囊的質(zhì)量提供了參考。

1 儀器與試藥

日本島津LC-10AT高效液相色譜儀，日本島津SPD-10A紫外檢測(cè)器。姜黃素對(duì)照品(購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110823-200603);祛瘀止痛膠囊(惠東縣中醫(yī)院自制)。水為屈臣氏純凈水，乙腈為色譜純(默克公司)，其余為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm);流動(dòng)相:乙腈-4%冰醋酸溶液(48∶52);檢測(cè)波長(zhǎng)為430 nm;柱溫30℃;流速1.0 ml/min;進(jìn)樣量5 μL。理論板數(shù)按姜黃素峰計(jì)算大于5000。

2.2 對(duì)照品貯備液的制備 稱取姜黃素對(duì)照品0.01052 g，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 ml對(duì)照品溶液置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物，研細(xì)，稱取約0.1 g，精密稱定，精密加甲醇10 ml，密塞，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液2.5、5、7.5、10、15、20 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以姜黃素進(jìn)樣量(X)對(duì)峰面積(Y)進(jìn)行線性擬合，得回歸方程為:Y=43661±s410.99，r=0.9994。結(jié)果表明姜黃素在 0.0263 μg ～ 0.2104 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度考察 精密吸取對(duì)照品溶液5 μl，按上述色譜條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.99%。表明該儀器的精密度好。

2.6 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液于制備后1、2、4、8、12、24 h分別進(jìn)樣5 μl，峰面積值的RSD=1.33%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性考察 取同一批樣品(批號(hào):20110504)6份，照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，測(cè)定其姜黃素含量。結(jié)果RSD:1.28%(n=6)，表明本品含量測(cè)定方法重復(fù)性較好。

2.8 回收率考察 精密稱取已知含量的樣品(批號(hào):20110504)6份，每份約0.05 g，精密加入姜黃素對(duì)照品溶液(濃度為 0.792 mg/ml)2 ml，再精密加入甲醇 10 ml，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果平均回收率為98.0%，RSD為1.58%(見表1)。

表1 姜黃素回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9 陰性空白試驗(yàn) 取處方中除姜黃外的另14味藥按制法制成陰性樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果在姜黃素對(duì)照品峰相應(yīng)的位置未見其它的干擾峰(見圖1～3)。

圖1 姜黃素對(duì)照品圖譜

圖2 缺姜黃陰性圖譜

圖3 供試品圖譜

2.10 樣品的含量測(cè)定 取3批祛瘀止痛膠囊樣品按“2.3”項(xiàng)下方法和上述色譜條件，以峰面積計(jì)算姜黃素的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 對(duì)祛瘀止痛膠囊中姜黃素的提取方法、提取溶劑和提取時(shí)間進(jìn)行考察研究，結(jié)果顯示采用甲醇超聲提取，樣品含量最高，最終選擇以甲醇超聲提取20 min為最佳提取條件，該法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好。

3.2 本實(shí)驗(yàn)所選色譜條件對(duì)藥物分離效果好，由于在430nm

處有吸收的物質(zhì)較少，測(cè)定時(shí)無(wú)對(duì)姜黃素造成干擾的物質(zhì)，專屬性好;流動(dòng)相中加入冰醋酸能有效解決拖尾［3］，峰形對(duì)稱，適合于祛瘀止痛膠囊中姜黃素的含量測(cè)定，可用于制劑的質(zhì)量監(jiān)控。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典.2010年版一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社:247.

［2］崔紅彬.HPLC法測(cè)定姜黃片中姜黃素的含量.中國(guó)藥師，2008，11(9):1071-1072.

［3］陳逸紅，張芬娥，王慧潔.HPLC測(cè)定如意金黃散中姜黃素的含量.中成藥，2004，26(12):1075-1076.