劉宏偉郭崧王文周毅

秦菊滴眼液治療家兔實驗性結(jié)膜炎的實驗研究

劉宏偉1郭崧2王文2周毅1

目的觀察中藥制劑秦菊滴眼液對實驗性結(jié)膜炎的治療效果。方法采用結(jié)膜下埋線的方法，造成家兔結(jié)膜的炎癥，使用含生藥0.42 g/ml、0.21 g/ml和0.105 g/ml的秦菊滴眼液進行治療，以溶劑為陰性對照，珍珠明目滴眼液為陽性對照。治療前、治療后第7天、第14天觀察記錄結(jié)膜病變和角膜病變情況。結(jié)果治療后第14天，0.42 g/ml秦菊滴眼液組和珍珠明目滴眼液組的結(jié)膜病變輕于溶劑對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；0.42 g/ml秦菊滴眼液組和珍珠明目滴眼液組的治愈率高于溶劑組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論0.42 g/ml秦菊滴眼液對家兔實驗性結(jié)膜炎有治療作用。

秦菊滴眼液；實驗性結(jié)膜炎；治愈率；家兔；結(jié)膜下埋線

結(jié)膜炎為眼科常見病，分為急性、亞急性和慢性；由于結(jié)膜大部分暴露于外界，容易受到微生物、風塵、理化物質(zhì)的刺激而產(chǎn)生炎癥，因此根據(jù)病因可分為細菌性、病毒性、衣原體性、真菌性、變態(tài)反應性等。本實驗采用結(jié)膜下埋線的方法，造成家兔結(jié)膜的炎癥，觀察中藥制劑秦菊滴眼液對實驗性結(jié)膜炎的治療作用。

1 材料與方法

1.1 藥品

秦菊滴眼液（北京博雅康泰生物工程科技有限公司）由秦艽、秦皮和菊花組成，經(jīng)提取后，加入氯化鈉、透明質(zhì)酸鈉、NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O、吐溫80，調(diào)節(jié)滲透壓和pH值。制劑分為3個劑量用于實驗，即含生藥0.42 g/ml、0.21 g/ml和0.105 g/ml。按高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測定，0.42 g/ml秦菊滴眼液中秦艽以龍膽苦苷計，不低于1.5 mg/ml；秦皮以秦皮甲素計，不低于0.14 mg/ml；菊花以木犀草素計，不低于0.1mg/ml。陽性對照藥為珍珠明目滴眼液（江西珍視明藥業(yè)有限公司），陰性對照為溶劑（北京博雅康泰生物工程科技有限公司），含有氯化鈉、透明質(zhì)酸鈉、NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O、吐溫80。

1.2 家兔結(jié)膜炎模型的制備

家兔30只，兔齡為4個月，雌雄各半，體質(zhì)量2.0～2.2 kg［北京通利實驗動物技術(shù)有限公司，許可證編號為SCXK（京）2005-002］。實驗前雙眼點氧氟沙星滴眼液（北京同仁醫(yī)院）以預防感染，鹽酸奧布卡因滴眼液（參天制藥株式會社）表麻，在上方球結(jié)膜距角膜緣2 mm處，使用彎針將7號線（強生中國醫(yī)療器材有限公司）縫入結(jié)膜下，范圍為10點～2點，兩端不露線頭。

1.3 分組與治療

造模后第2天根據(jù)病變的評分將實驗動物分為病變程度基本一致的5組，每組6只家兔（12只眼），分別為溶劑組，0.105 g/ml秦菊滴眼液組，0.21 g/ml秦菊滴眼液組，0.42 mg/ml秦菊滴眼液組，珍珠明目滴眼液組。分組后開始治療，每眼滴注藥物50 μl，4次/日。

1.4 病變觀察

觀察治療前、治療后7 d、14 d時結(jié)膜及角膜的病變情況，并對病變程度進行評分記錄。

1.5 病變程度評分

1.5.1 結(jié)膜病變評分〔1〕：包括充血、水腫、分泌物3個子項，結(jié)膜病變評分為該3項評分之和。（1）充血：0分，血管正常；1分，血管充血呈鮮紅色；2分，血管充血呈深紅色，血管不易分辨；3分，彌漫性充血呈紫紅色。（2）水腫：0分，無水腫；1分，輕微水腫（包括瞬膜）；2分，明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻；3分，水腫導致眼瞼近半閉合；4分，水腫導致眼瞼超過半閉合。（3）分泌物：0分，無分泌物；1分，少量分泌物；2分，分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著；3分，分泌物使整個眼區(qū)潮濕或粘著。

1.5.2 角膜病變評分〔2〕：用2%熒光素染色角膜，加藍色濾色片觀察，角膜出現(xiàn)細小染色點，為點染，如角膜緣出現(xiàn)潰瘍，為浸潤；加綠色濾色片觀察角膜緣，如有結(jié)膜血管長入角膜，為血管翳。評分如下：0分，正常；1分，點染；2分，浸潤；3分，血管翳。

1.6 療效評價

比較治療后第7天和第14天，各組結(jié)膜和角膜病變評分，并做統(tǒng)計學分析，確定治愈和未愈標準。治愈：治療14天后病變評分為0分；未愈：治療14天后病變評分大于等于1分。治愈率=治愈眼數(shù)/（治愈眼數(shù)+未愈眼數(shù)）×100%。

1.7 統(tǒng)計學方法

使用SPSS 16.0進行統(tǒng)計學分析。結(jié)膜病變和角膜病變評分以均數(shù)±標準差表示，采用單因素方差分析進行比較，P＜0.05時，差異有統(tǒng)計學意義；治愈率的比較采用卡方檢驗，P＜0.05時，差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)膜病變評分比較

治療前，各組的病變評分接近，無統(tǒng)計學意義的差異（P＞0.05）。治療后第7天，珍珠明目滴眼液組評分低于溶劑組和0.21 g/ml秦菊滴眼液組（P＜0.05），0.42 g/ml秦菊滴眼液組評分低于0.21 g/ml秦菊滴眼液組（P＜0.05）；珍珠明目組與0.42 g/ml秦菊滴眼液組評分相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。治療后第14天，0.42 g/ml秦菊滴眼液組評分低于溶劑組和0.105 g/ml秦菊滴眼液組（P＜0.05），珍珠明目滴眼液組評分低于溶劑組（P＜0.05）；珍珠明目組與0.42 g/ ml秦菊滴眼液組評分相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表1）。

表1 各組實驗性結(jié)膜炎家兔各時期結(jié)膜病變評分（±s，樣本數(shù)=12只眼）

表1 各組實驗性結(jié)膜炎家兔各時期結(jié)膜病變評分（±s，樣本數(shù)=12只眼）

注：治療前各組比較，P＞0.05。治療后，①與溶劑組相比，P＜0.05；②與0.21 g/ml秦菊滴眼液組相比，P＜0.05；③與0.105 g/ml秦菊滴眼液組相比，P＜0.05（單因素方差分析）

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2.2 角膜病變

治療前至治療后14 d，各組實驗兔眼未發(fā)現(xiàn)有角膜病變。

2.3 治愈率比較

比較14天后各組病變評分為0、1和2的眼數(shù)，計算各組的治愈率（表2）。0.42 g/ml秦菊滴眼液組和珍珠明目滴眼液組的治愈率均高于溶劑組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；但這2組之間的差異不明顯（P＞0.05）。0.105 g/ml、0.21 g/ml秦菊滴眼液組與溶劑組分別比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表2）。

表2 各組實驗性結(jié)膜炎家兔治療14 d后的病變評分和治愈率

3 討論

結(jié)膜分為上皮層及固有層。上皮層由多層結(jié)膜上皮細胞構(gòu)成，上皮細胞層內(nèi)含有杯狀細胞，固有層內(nèi)含有結(jié)締組織、血管及神經(jīng)系統(tǒng)。結(jié)膜大部分表面暴露于外界，當防御能力減弱或外界致病因素增強時，會引起結(jié)膜組織的炎癥發(fā)生〔3〕。特別說明的是，進入結(jié)膜的異物，如金屬、木材碎屑、塵埃顆粒及手術(shù)縫線等，由于其抗原性不同和對結(jié)膜的局部物理刺激，可引起不同程度的結(jié)膜炎癥反應。結(jié)膜炎主要體征有結(jié)膜充血、分泌物、乳頭增生、結(jié)膜水腫和濾泡等。如果炎癥持續(xù)時間長，可造成瞼結(jié)膜肥厚、粗糙、伴有眥角潰瘍或潰瘍性瞼緣炎。

秦菊滴眼液由秦艽、秦皮和菊花組成。秦艽具有抗炎、調(diào)節(jié)中樞系統(tǒng)、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、保肝、抗氧化、升血糖等作用〔4〕；秦皮具有抗病原微生物、抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗氧化以及神經(jīng)保護和血管保護等作用〔5〕；菊花具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗菌、抗衰老、抗腫瘤等作用〔6〕。秦菊滴眼液中的3味藥都有抗炎作用，協(xié)同使用有助于對家兔實驗性結(jié)膜炎的治療。珍珠明目滴眼液對實驗性結(jié)膜炎有治療作用〔7〕，我們因此選用此藥作為陽性對照。

使用結(jié)膜下縫線的方法〔2〕，使異物進入結(jié)膜，造成家兔非感染性結(jié)膜炎，病變主要以炎癥反應和免疫反應為主，因此抗炎是治療此類結(jié)膜炎的首選。結(jié)膜炎一般很少影響角膜，我們在實驗中也將角膜因素加以考慮，以防出現(xiàn)角膜受累的情況。

我們在實驗中發(fā)現(xiàn)，0.42 g/ml秦菊滴眼液組病變第7天顯著輕于0.21 g/ml秦菊滴眼液組，第14天顯著輕于0.105 g/ml秦菊滴眼液組；第7天，珍珠明目滴眼液組病變也輕于0.21 g/ml秦菊滴眼液組；第14天，0.42 g/ml秦菊滴眼液組和珍珠明目滴眼液組結(jié)膜病變顯著輕于溶劑對照組，它們的治愈率也顯著高于溶劑組，說明高濃度的秦菊滴眼液有效，低濃度的藥物不足以抑制異物所造成的結(jié)膜炎癥。

我們只觀察了治療14 d的病變情況，這是因為，結(jié)膜下埋線首先造成結(jié)膜的急性炎癥，表現(xiàn)為結(jié)膜極度充血，水腫和大量分泌物，以后結(jié)膜病變逐漸減輕，第7天時，埋線的結(jié)膜下存在大量炎癥細胞，第14天時，埋線被纖維組織部分包裹〔8〕。因此，只要埋線存在，炎癥會一直存在，只有當纖維組織將其包裹，隔離機體的免疫系統(tǒng)，炎癥才會消失。在第14天時，結(jié)膜病變已出現(xiàn)自愈傾向，藥物對以后的結(jié)膜病變影響較小。

臨床上慢性結(jié)膜炎病因復雜〔9〕，治愈比較困難〔10〕，但是不論何種結(jié)膜炎，抗炎是首要任務，秦菊滴眼液是中藥制劑，具有廣泛的抗炎作用，為治療慢性結(jié)膜炎增加了一種選擇。

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Experimental study of Qinju eye drops on rabbits experimental conjunctivitis

LIU Hongwei，GUO Song，WANG Wen，et al.Beijing Tongren Eye Center，Beijing Tongren Hospital，Capital Medical University；Beijing Ophthalmology&Visual Sciences Key Lab；Beijing Institute of Ophthalmology，Beijing 100005，China

OBJECTIVETo examine the clinical effects of Qinju eye drops on rabbit experimental conjunctivitis.METHODSConjunctivitis was prepared by subconjunctival line embedding.Qinju eye drops（0.42，0.21 and 0.105g/ml）were used for treatment，solutions for negative control and Zhenzhu Mingmu eye drops for positive control group.Conjunctival lesion and corneal lesion were examined and recorded before treatment and on the 7th and 14th day after treatment.RESULTSOn the 14th day，the conjunctival lesions of Qinju（0.42g/ml）and Zhenzhu Mingmu eye drops group were significantly lighter than that of solutions group（P＜0.05）.The cure rates of Qinju（0.42g/ml）andZhenzhuMingmueyedropsgroupweresignificantlyhigherthanthatof solutions group（P＜0.05）.CONCLUSIONSQinju eye drops（0.42g/ml）had some therapeutic effects on rabbit experimental conjunctivitis.

Qinju eye drops；experimental conjunctivitis；cure rate；rabbit；subconjunctival line embedding

R285.5；R777.31

A

1002-4379（2012）04-0239-03

北京市科技計劃課題資助項目（Y0204002041331）

1首都醫(yī)科大學附屬北京同仁醫(yī)院，北京同仁眼科中心；北京市眼科學與視覺科學重點實驗室；北京市眼科研究所，北京100005

2北京博雅康泰生物工程科技有限公司

劉宏偉，E-mail：hw65@sohu.com