張興麗,李 娟

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院循環(huán)一科,黑龍江 佳木斯 154003)

目前認(rèn)為,CD40L不僅參與急性心肌梗死的發(fā)生發(fā)展,而且因其可對(duì) MM Ps的激活及刺激巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)組織因子而可能起到關(guān)鍵性的作用[1,2]。CD40L可通過(guò)其可溶性 CD40L的形式與 B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等于血管平滑肌上的 CD40相互作用,刺激這些細(xì)胞產(chǎn)生大量的與 AMI相關(guān)的生物活性因子:如 E-選擇素、黏附因子、細(xì)胞因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等 ,參與 AM I斑塊內(nèi)重要細(xì)胞成分的反應(yīng)調(diào)節(jié)[3]。給予急性心肌梗死患者長(zhǎng)期他汀類(lèi)藥物治療,可有效減輕體內(nèi)炎癥反應(yīng)并改善血管內(nèi)皮功能[4～6]。本實(shí)驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫法分別檢測(cè)對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組(A組 B組)血清 CD40L的濃度變化,探討瑞舒伐他汀對(duì)急性心肌梗死患者 CD40L濃度的變化的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院診斷為急性心肌梗死患者 48例為實(shí)驗(yàn)組,隨機(jī)分為 A、B兩組,每組 24例,A組入院后口服瑞舒伐他汀 10mg/qd兩周,其中男17例,女7例,年齡32～77歲 ,平均 (56.75±11.59)歲;B組入院后口服瑞舒伐他 汀 20mg/qd 兩 周 ,其男 16例 ,女 8例 ,年 齡 44～78歲 ,平 均(59.50±10.09)歲;另外選取健康對(duì)照組32例,取肘靜脈血分離血漿凍存待測(cè),其中男23例,女9例,年齡16～88歲,平均(49.37±17.64)歲。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

①2～4周內(nèi)發(fā)生出血性疾病。②感染、惡性腫瘤、自身免疫性疾病。③肝腎疾患、心肌炎、心肌病。④8周內(nèi)未曾應(yīng)用過(guò)免疫抑制劑和調(diào)脂藥物等,具有完整的臨床資料。

1.3 試驗(yàn)方法

對(duì)照組清晨采空腹肘靜脈血6mL,實(shí)驗(yàn)組分別采用藥前及用藥后兩周空腹肘靜脈血6mL,室溫下靜止30min,離心每分鐘3000轉(zhuǎn),離心15min后用 EP管留取2mL血清,儲(chǔ)存于-20℃冰箱中待測(cè)白細(xì)胞分化抗原40配體。采用常規(guī)酶聯(lián)免疫法法。主要藥品及試劑為瑞舒伐他汀、人白細(xì)胞分化抗原40配體定量檢測(cè)試劑盒 (ELISA)。

1.4 結(jié)果判定

測(cè)定450nm波長(zhǎng)下 OD值 ,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的 OD值,計(jì)算樣本申人白細(xì)胞分化抗原40配體含量。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的 OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的 OD值,在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。最終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (±s)表示,組間、計(jì)量資料比較采用兩獨(dú)立樣本的 t檢驗(yàn),用直線相關(guān)分析法分析相關(guān)指標(biāo)間相關(guān)性。計(jì)數(shù)資料比較采用 i2檢驗(yàn) ,不符合i2檢驗(yàn)應(yīng)用條件的情況 ,選擇Fisher精確概率法。P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組、正常對(duì)照組一般資料比較,各組間性別、年齡、吸煙史、高血壓病、糖尿病差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞ 0.05)。見(jiàn)表1。

實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組 CD40L水平顯著增高 (P＜0.01),見(jiàn)表2。

表2 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組 CD40L比較

實(shí)驗(yàn)組 B組與 A組用藥后 CD40L水平均顯著性下降(P ＜0.01);實(shí)驗(yàn)組 B組較 A組用藥后 CD40L水平顯著性下降 (P ＜ 0.05)。見(jiàn)表3。

表3 實(shí)驗(yàn)組(A、B組)用藥后 CD40L濃度

3 討論

急性心肌梗死是多種因素相互作用和影響的結(jié)果。目前研究已經(jīng)明確炎癥在導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程起著重要的作用,而動(dòng)脈粥樣斑塊的穩(wěn)定性與急性心肌梗死的病理基礎(chǔ)與發(fā)病過(guò)程緊密相關(guān)。Van derwal[7]等人對(duì)因急性冠脈事件死亡的人的尸撿標(biāo)本進(jìn)行研究,通過(guò)免疫組化等方法發(fā)現(xiàn)在板塊破裂出有大量巨噬細(xì)胞和 T淋巴細(xì)胞的表達(dá)。CD40L是一種跨膜糖蛋白,可溶性 CD40L具有強(qiáng)的生物活性,可與 B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞上的 CD40相互作用,刺激這些細(xì)胞產(chǎn)生大量與 AMI相關(guān)的生物活性因子,參與 AM I斑塊內(nèi)主要細(xì)胞成份的炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié),在這些過(guò)程中貫穿于急性心肌梗死的發(fā)生發(fā)展。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)[8]在實(shí)驗(yàn)大鼠體內(nèi)注射 CD40L的特異性抗體可明顯減輕動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成,并可影響進(jìn)展期的斑塊穩(wěn)定。我們通過(guò)對(duì)48例急性心肌梗死患者和32例對(duì)照組患者 CD40L研究發(fā)現(xiàn),急性心肌梗死患者 CD40L水平顯著增高,這與學(xué)者嚴(yán)金川[9]等研究得到的結(jié)果相似 ,嚴(yán)金川等應(yīng)用間按免疫熒光法和 ELISA法證實(shí),不穩(wěn)定性心絞痛患者外周血單核細(xì)胞表達(dá)及血清 sCD40L水平明顯高于對(duì)照組和穩(wěn)定性心絞痛患者:穩(wěn)定性心絞痛患者 sCD40L高于對(duì)照組,但其單核細(xì)胞表達(dá) CD40L與對(duì)照組無(wú)差異:PTCA患者前后 sCD40L有差異,而單核細(xì)胞表達(dá) CD40L無(wú)差異,提示不穩(wěn)定性心絞痛患者血清中升高的 sCD4OL可能來(lái)自不穩(wěn)定的斑塊,不穩(wěn)定性心絞痛患者 CD40L表達(dá)升高可能是由于患者血中存在刺激單核細(xì)胞高表達(dá) CD40L的成分。再次證實(shí)了急性心肌梗死患者 CD40L水平顯著增高,并且提示急性心肌梗死患者存在著動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定及炎癥反應(yīng),而 CD40L與斑塊的不穩(wěn)定性與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。

Schonbeck[10]對(duì)發(fā)現(xiàn)氧化低密度脂蛋白促進(jìn)人血管細(xì)胞表達(dá) CD40與 CD40L,并受他汀類(lèi)藥物抑制,同時(shí)動(dòng)脈粥樣硬斑塊塊的進(jìn)展受到抑制。在 AM I患者中應(yīng)盡早應(yīng)用他汀類(lèi)藥物干預(yù)[11],我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組 B組與 A組用藥后比用藥前 CD40L水平顯著降低,瑞舒伐他汀對(duì)抑制 CD40L存在顯著效果;實(shí)驗(yàn)組用藥后 B組較 A組 CD40L水平顯著降低,我們的結(jié)果與孟祥雁[12]等發(fā)現(xiàn)相似 ,孟祥雁等研究發(fā)現(xiàn)AMI患者應(yīng)用不同劑量瑞舒伐他汀可有效降低血清中sCD40L水平并呈劑量相關(guān)性。國(guó)外學(xué)者 Aukrust[13]研究發(fā)現(xiàn)他汀類(lèi)在抑制炎癥、改善血管平滑肌細(xì)胞功能的氧化過(guò)程、改善內(nèi)皮功能、抑制血栓形成等方面具有多向性效應(yīng)作用。我們的研究再一次表明用藥后實(shí)驗(yàn)組 B組與 A組CD40L平均存在明顯劑量依賴(lài)。長(zhǎng)期應(yīng)用大劑量瑞舒伐他汀過(guò)程中可能會(huì)降低血清炎癥因子更多,并且可能會(huì)減少冠狀動(dòng)脈斑塊基質(zhì)成分降解和炎癥反應(yīng),增加急性心肌梗死斑塊的穩(wěn)定性。抑制 CD40L有可能會(huì)降低急性心肌梗死的發(fā)生,以及延緩疾病的復(fù)發(fā)。

本研究中 CD40L水平可能是急性心肌梗死病變活動(dòng)性標(biāo)志物,有望成為預(yù)測(cè)心肌梗死及斑塊穩(wěn)定性與否的敏感指標(biāo),值得進(jìn)一步的研究;應(yīng)用他汀類(lèi)藥物調(diào)節(jié) CD40L能否在未來(lái)治療急性心肌梗死提供理論依據(jù),還需要更深入的研究。

[1]Schonbeck U,Mach F,Sukhova GK,et al.Regulation of matrix metalloproteinase expression in human vascular smooth muscle cells by T-lymphocytes: A role for CD40 sig naling in plaque rupture[J].Circ Res,1997,81:448-454

[2]Mach F,Schonbeck U,Bounnefoy JY,et al.Activation of monocyte macrophage functions related to acute atheroma complication by ligation of CD40:Induction of collagenase stromelysin and tissue factor[J].Circulation,1997,96:396-399

[3]吳歆華,張華,付海清,等.急性冠脈綜合征過(guò)氧化物酶體增生激活型受體γ與 CD40/CD40L表達(dá)的相關(guān)性研究 [J].海南醫(yī)學(xué),2007,18(01):43

[4]Ray K K,Cannon C P.Pathological changes in acute coronary syndromes:the role of statin therapy in the modulation of inflammation,endothelial function and coagulation[J].J Thromb Thrombolysis,2004,18(2):89-101

[5]Luo Y,Jiang D,Wen D,et al.Changes in serum interleukin-6 and high- sensitivity C- reactive protein levels in patients with acute coronary syndrome and their responses to simvastatin[J].Heart V essels,2004,19(6):257-262

[6]Naghavi M,Libby P,Falk E,et al.From v ulnerable plaque to vulnerable patient:a call for New definitions and risk assessment strategies:Part I[J].Circulation,2003,108(14):1664-1672

[7]Kochx M M,De-Meyer GR,Buyssens N,et al.Cell composition,replication,and apoptosis in atherosclerotic plaques after6months of cholesterol withdrawal[J].Circ Res,1998,83:378-387

[8]Sehonbeck U,Sukhova GK,Shimizu K,et al.Inhibition of CD40 signaling limits evolution of established atherosclerosis in mice[J].Proc Natl Acad Sci USA,2000,97(13):7458-7463

[9]嚴(yán)金川,吳宗貴,張玲珍,等.CD40配體高表達(dá)與壁穩(wěn)定型心絞痛之間的關(guān)系 [J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志,2001,9(5):409-412

[10]Schonbeck U,Sukhov a GK,Shinmizu K,et al.Inhibition of CD40 signaling limits ev olution of established atherosclerosis in mice[J].Proc Natl Acad Sci USA,2000,97(13):7458-7463

[11]Schwartz G G,Lsson AG,Ezekowitz M D,et al.Effect of atorvastatin on early recurrent ischemic ev ent in acte coronary syndrome:The M IRACLE study a randomized controlled trial[J].JAM A,2001,1711-1718

[12]孟祥雁,高長(zhǎng)斌.可溶性 CD40L與急性冠脈綜合征的臨床研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2010,(04):8-11

[13]Aukrust P,Muller F,Ueland T,et al.Enhanced levels of soluble and membrane-bound cd40 ligand in patients with unstable angina[J].Circulation,1999,100:614-620