沈 萍，史秋梅，高光平，董淑珍，尹海力，楊 超

(河北科技師范學(xué)院動物科技學(xué)院，河北 秦皇島，066600)

雞熱應(yīng)激嚴重危害養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，尤其是現(xiàn)代化生產(chǎn)增大了雞群的密度，提高了雞群內(nèi)溫度，妨礙了雞的散熱，過高的溫度會導(dǎo)致雞熱應(yīng)激，影響雞的生長發(fā)育及生產(chǎn)性能，甚至可造成疾病流行。因此，如何提高蛋雞對熱應(yīng)激的抵抗力是現(xiàn)在人們關(guān)注的熱點之一。

中草藥抗熱應(yīng)激的研究日益受到人們的關(guān)注，中草藥中含有多種營養(yǎng)成分和天然化學(xué)成分，如維生素、微量元素等，其作用是多靶點的，在防病治病的同時，還能促進生長、增強動物的免疫機能、提高機體整體抗病能力。本試驗通過蛋雞飲用不同濃度中草藥，在熱應(yīng)激條件下觀察其小腸黏膜上皮內(nèi)淋巴細胞變化來闡述中草藥對熱應(yīng)激的抵抗效果。

1 材料與方法

1．1 試驗材料

1．1．1 試驗動物 88日齡健康雛雞育成雞120只，品種為伊莎褐蛋雞。由河北科技師范學(xué)院牧場提供。

1．1．2 主要儀器與試劑 石蠟切片機、自動磨刀機、電熱恒溫水浴鍋、DMB5-5數(shù)碼生物顯微鏡，光學(xué)顯微鏡等;甲醛溶液、Bouin固定液、不同濃度酒精、二甲苯、蘇木素-伊紅染色液、蛋白甘油、鹽酸酒精、冰醋酸、石蠟、中性樹膠等。由河北科技師范學(xué)院動物科技學(xué)院基礎(chǔ)實驗室提供。

1．1．3 中草藥 主要由藿香、薄荷、知母、紅景天等7味中草藥組成的方劑。由河北省預(yù)防獸醫(yī)重點實驗室提供。

1．2 試驗方法

120只88日齡伊莎褐蛋雞隨機平均分為6個組，其中3個組為試驗組，分別飼喂高、中、低濃度中草藥，另3個組為對照組，一組中添加維生素C，一組置于高溫環(huán)境中，不添加任何藥物，最后一組于常溫環(huán)境中喂養(yǎng)。常溫環(huán)境約20℃，其余5組處于模擬高溫(27．6～33．7℃)環(huán)境中。具體設(shè)計如表1所示。

1．3 采樣及切片制備

1．3．1 采樣 試驗各組分別于試驗第1天、第4天、第8天和第10天隨機選取5只試驗雞，空腹稱取質(zhì)量后頸動脈放血處死，在小腸中段取約2 cm的腸段。

1．3．2 切片制備 將所取不同試驗組的小腸段及時置于Bouin液中固定→不同濃度酒精脫水→二甲苯透明→浸蠟→石蠟包埋→切片(5 μm)→HE染色。

1．3．3 淋巴細胞計數(shù)及統(tǒng)計 在顯微鏡下(400×)觀察，每只雞觀察5張切片，每張切片觀察5個絨毛，每個絨毛選取100個小腸上皮細胞，計算其中的淋巴細胞數(shù)量，記錄數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)經(jīng)整理后，用SPSS17．0進行統(tǒng)計分析，各組間的差異采用單因子方差分析，試驗結(jié)果用x±SD(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)表示。

表1 各試驗組的藥物分配方法

2 結(jié)果與分析

在試驗第1天雞的小腸黏膜上皮內(nèi)淋巴細胞數(shù)量之間除高濃度中草藥組與高溫對照組差異顯著外其余各組間差異不大(表2);試驗第4天時，除室溫對照組的淋巴細胞變化不大外，其余各組均有所增加，其中高濃度組增加最多，與室溫對照組間有極顯著的差異;而高溫對照組淋巴細胞也有所增加，可能是由于機體免疫機制啟動，以對抗外界高溫的刺激，導(dǎo)致機體內(nèi)淋巴細胞增多;試驗第8天時，室溫對照組淋巴細胞數(shù)仍無太大變化，高溫對照組，由于雞體自身的抵抗力不足以對抗外界的高溫環(huán)境，導(dǎo)致機體衰弱，淋巴細胞生成減少。其余4組淋巴細胞數(shù)均有所增加，以顯示出機體對外界的抵抗力增加，能有效抵抗外界的高溫刺激;試驗第10天時，室溫對照組中淋巴細胞數(shù)仍無太大變化，高溫對照組(圖1(a))中淋巴細胞數(shù)仍在減少，其余4組中淋巴細胞數(shù)仍在增加，3個中草藥組(圖1(b)，圖1(c)，圖1(d))中淋巴細胞數(shù)與Vc對照組(圖1(e))中的淋巴細胞數(shù)大體相等，且都遠大于高溫對照組和室溫對照組，差異極顯著，其中高濃度組的淋巴細胞數(shù)最多，而室溫對照組(圖1(f))的淋巴細胞數(shù)也高于高溫對照組，差異極顯著。試驗表明中草藥組和Vc組淋巴細胞數(shù)仍呈上升趨勢，且高濃度組淋巴細胞數(shù)最多，中草藥能有效抵抗高溫對雞體的不良刺激。

表2 各試驗組雞小腸上皮細胞內(nèi)淋巴細胞數(shù)量變化

3 討 論

腸上皮內(nèi)淋巴細胞是粘膜免疫系統(tǒng)中與腸腔內(nèi)抗原發(fā)生最直接接觸的免疫細胞，并與腸上皮細胞之間存在相互的免疫生理調(diào)節(jié)，在粘膜免疫中發(fā)揮著獨特的作用［1～3］。研究表明，腸上皮內(nèi)淋巴細胞，具有中和外源細胞毒作用及分泌淋巴因子等多種功能，在受到相應(yīng)刺激時可被激活，從而在腸道免疫中發(fā)揮著重要的作用，是腸道免疫的主要組成部分。同時也具有抗原呈遞功能，可將抗原呈遞給T細胞，產(chǎn)生食物免疫耐受，對機體有重要的免疫作用［3，4］。本試驗表明高溫應(yīng)激嚴重破壞蛋雞體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，導(dǎo)致機體熱衰竭、產(chǎn)蛋性能下降，而且對其免疫系統(tǒng)有抑制作用，腸上皮內(nèi)淋巴細胞數(shù)量明顯減少，表明腸道免疫功能下降，抵抗力減弱。通過觀察組織切片得知，熱應(yīng)激可以造成小腸的病理損傷性變化，病變主要涉及粘膜層。隨著試驗進行，小腸粘膜上皮細胞脫落加劇，從而抑制蛋白質(zhì)合成，降低了上皮細胞的更新率，使腸粘膜的上皮細胞再生能力下降，屏障機能減弱，以試驗第10天時最為嚴重。而3個中草藥組和Vc對照組淋巴細胞數(shù)持續(xù)增加，說明了該中草藥和Vc可有效抵抗高溫對機體免疫系統(tǒng)的抑制作用。因此，腸上皮內(nèi)淋巴細胞數(shù)量的變化能從一個方面反映了腸道黏膜免疫的狀態(tài)。

中草藥中的多糖成分具有免疫促進作用，是中草藥中重要的活性成分。試驗用的藿香中的多糖具有顯著的免疫促進作用，可不同程度地提高試驗動物淋巴細胞的轉(zhuǎn)化率，可使試驗動物機體內(nèi)的淋巴細胞數(shù)增加，尤其是T淋巴細胞［5］。試驗表明，中草藥組能增加小腸上皮淋巴細胞的數(shù)量，保持小腸上皮的完整性。藿香揮發(fā)油能促進胃液分泌，提高消化能力，對胃腸道有解痙作用。胃腸功能加強，食物被有效消化吸收，小腸上皮細胞因此生長旺盛，腸上皮細胞不斷地更新，以增強上皮的功能和耐受性，從而增強屏障作用。薄荷為傳統(tǒng)的辛涼解表藥，為疏散風(fēng)熱的要藥，昧辛、性涼，具有辟穢、疏肝、解毒的功效。在高溫條件下，薄荷的疏散風(fēng)熱作用可有效緩解高溫的刺激。薄荷及其有效成分均有解痙作用，能抑止胃腸平滑肌收縮，在胃腸受到不利刺激時能夠緩解不利刺激對其造成的傷害［6］。知母具有退熱、鎮(zhèn)靜、抗炎、利尿等作用。紅景天產(chǎn)于青藏高原，無污染，天然純凈，為青藏特有名貴藥材。能提升機體對有害刺激的非特異性抵抗力，加強機體的適應(yīng)性，具有抗腦缺氧、抗疲勞、活血止血、清肺止咳、化淤消腫、解熱退燒、滋補元氣等作用［7-9］。Vc可促進淋巴母細胞的生成，從而提高機體的免疫力，還可提高機體的應(yīng)激能力［10］。

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［4］楊倩，練高建，黃國慶，等．半胱胺對雞小腸粘膜中分泌型IgA細胞和上皮內(nèi)淋巴細胞的影響［J］．南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2002，25(2):89-92．

［5］朱金照，冷恩仁．白術(shù)、藿香等中藥對胃排空、腸推進影響的試驗研究［J］．中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2000，6(1):21-23．

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［10］王龍生，陳安國．維生素C和E在豬雞抗熱應(yīng)激中的研究與應(yīng)用［J］．飼料工業(yè)，2005，26(20):38-39．