林 英 李亞娜 陶慶春 楊會敏

1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院檢驗科，北京 100700；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗科，北京 100029

3432株臨床分離病原菌分布及耐藥性分析

林 英1李亞娜2陶慶春2楊會敏2

1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院檢驗科，北京 100700；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗科，北京 100029

目的了解臨床分離病原菌的分布狀況及其對常用抗菌藥物的耐藥情況，指導(dǎo)臨床合理用藥。 方法 采用微生物VITEK 32鑒定分析儀及相關(guān)鑒定卡對全年臨床分離菌進(jìn)行鑒定和藥物敏感試驗，用LIS系統(tǒng)軟件對其結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果 2010年5月1日～2011年4月30日筆者所在醫(yī)院共分離病原菌3 432株（真菌除外），其中革蘭陰性桿菌2 527株，占73.6%，革蘭陽性球菌905株，占26.4%。前5位的病原菌為：銅綠假單胞菌805株（23.5%）、大腸埃希菌610株（17.8%）、鮑曼復(fù)合醋酸鈣不動桿菌401株（11.7%）、金黃色葡萄球菌330株（9.6%）、肺炎克雷伯菌272株（7.9%）。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs的檢出率分別為48.0%和24.0%。MRSA和MRCNS的檢出率分別為83.3%和77.8%。VRE的比例較高，占腸球菌屬的21.5%。 結(jié)論 醫(yī)院感染病原菌的耐藥情況比較嚴(yán)重，應(yīng)定期對病原菌的耐藥性進(jìn)行監(jiān)測，以便指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗生素。

病原菌分布；抗生素；耐藥情況

隨著抗菌藥物在臨床上的廣泛應(yīng)用，細(xì)菌耐藥問題日趨嚴(yán)重。細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測對于臨床合理用藥，提高醫(yī)療水平和減少細(xì)菌耐藥都有著重要的意義?，F(xiàn)將2010年5月1日～2011年4月30日北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院的臨床分離病原菌的分布狀況和對常用抗生素的耐藥狀況進(jìn)行分析，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院2010年5月1日～2011年4月30日門診及住院患者分離的所有病原菌。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853，金黃色葡萄球菌ATCC29213。

1.1.2 儀器與試劑 血瓊脂培養(yǎng)基和麥糠凱培養(yǎng)基。細(xì)菌鑒定采用美國梅里埃公司的VITEK32細(xì)菌鑒定儀及其配套的鑒定卡和藥敏卡進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥物敏感性試驗。

1.2 方法

1.2.1 藥敏試驗 采用2009年美國臨床與實驗室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI）文件推薦的肉湯稀釋法對菌株進(jìn)行藥敏試驗[1]。

1.2.2 產(chǎn)ESBLs（超廣譜β-內(nèi)酰胺酶）菌株檢測 按照CLSI文件上規(guī)定的肉湯稀釋法對產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌進(jìn)行篩選和確證試驗。

1.2.3 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）與耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（MSCNS）的檢測 按照CLSI文件上規(guī)定的肉湯稀釋法對MRSA和MRCNS進(jìn)行檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用LIS系統(tǒng)軟件對細(xì)菌的鑒定和藥敏結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌的構(gòu)成比

2010年5月1日～2011年4月30日北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院共檢出病原菌3 432株（真菌除外），其中革蘭陰性桿菌2 527株，占73.6%，革蘭陽性球菌905株，占26.4%。前幾位的病原菌為：銅綠假單胞菌805株（23.5%）、大腸埃希菌610株（17.8%）、鮑曼復(fù)合醋酸鈣不動桿菌401株（11.7%）、金黃色葡萄球菌330株（9.6%）、肺炎克雷伯菌272株（7.9%），糞腸球菌171株（5.0%）、屎腸球菌153株（4.5%）。其構(gòu)成比見表1。

表1 臨床分離病原菌構(gòu)成比

2.2 藥敏結(jié)果

2.2.1 革蘭陰性菌

2.2.1.1 腸桿菌科 腸桿菌科細(xì)菌中以大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌為最常見的細(xì)菌。大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs的百分率為48%，肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs的百分率為24%。其中大腸埃希菌對碳青霉烯類藥物和酶抑制劑復(fù)方制劑、阿米卡星高度敏感，對頭孢菌素類耐藥率較高，對廣譜青霉素類，喹諾酮類則敏感性也較差。肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類藥物，酶抑制劑復(fù)方制劑，氨基糖苷類，喹諾酮類和三代頭孢菌素敏感性較好，對廣譜青霉素類耐藥性較強(qiáng)。2010年5月1日～2011年4月30日北京中醫(yī)藥大學(xué)附屬東方醫(yī)院臨床分離常見腸桿菌科細(xì)菌對常用抗生素的敏感耐藥率。見表2。

2.2.1.2 非發(fā)酵菌 非發(fā)酵菌中以銅綠假單胞菌、鮑曼復(fù)合醋酸鈣不動桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌最為常見。對阿米卡星和酶抑制劑復(fù)方制劑、喹諾酮類、碳青霉烯類藥物相對較敏感，而對廣譜青霉素類、頭孢菌素類耐藥性較強(qiáng)。401株鮑曼復(fù)合醋酸鈣不動桿菌僅對碳青霉烯類藥物和酶抑制劑復(fù)方制劑耐藥率相對較低，對其他藥物耐藥率達(dá)64.0%以上。嗜麥芽窄食單胞菌對CLSI推薦的左氧氟沙星、復(fù)方新諾明、米諾環(huán)素的敏感性分別為95.0%、97.0%、100.0%，敏感性較高。2010年5月1日～2011年4月30日北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院臨床分離常見非發(fā)酵菌對常用抗生素的敏感耐藥率，見表3。

表2 常見腸桿菌科細(xì)菌對常用抗生素的敏感耐藥率（%）

表3 常見非發(fā)酵菌對常用抗生素的敏感耐藥率（%）

2.2.2 革蘭陽性菌

2.2.2.1 葡萄球菌屬 葡萄球菌屬中以金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌最為常見。其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的百分率為83.3%，耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（MRCNS）的百分率為77.8%。葡萄球菌屬中對萬古霉素全部敏感，對呋喃妥因的敏感率高達(dá)99.7%，對利福平敏感率為82.2%，但對其他如青霉素類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、林可霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類藥物敏感性較低。2010年5月1日～2011年4月30日北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院臨床分離常見葡萄球菌對常用抗生素的敏感耐藥率見表4。

表4 常見葡萄球菌對常用抗生素的敏感耐藥率（%）

2.2.2.2 腸球菌屬 腸球菌屬中以屎腸球菌和糞腸球菌最為常見，耐萬古霉素腸球菌（VRE）占12.2%。腸球菌屬對呋喃妥因和萬古霉素的耐藥率較低，對其他如利福平、青霉素類、四環(huán)素類、喹諾酮類藥物耐藥率較高。2010年5月1日～2011年4月30日北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院臨床分離常見腸球菌對常用抗生素的敏感耐藥率見表5。

表5 常見腸球菌對常用抗生素的敏感耐藥率（%）

2.2.2.3 鏈球菌屬 共發(fā)現(xiàn)45株，對呋喃妥因和萬古霉素高度敏感，對青霉素的敏感率也較高，對其他的如氨基糖苷類、林可霉素類、磺胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥性較高。另外發(fā)現(xiàn)1例肺炎鏈球菌，對萬古霉素、紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、利福平和左氧氟沙星敏感，對青霉素、慶大霉素和呋喃妥因耐藥。

3 討論

本次監(jiān)測共收集到北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院病原菌3 432株，其中革蘭陰性桿菌2 527株，革蘭陽性球菌905株，革蘭陰性菌：革蘭陽性菌為2.8∶1。前幾位的病原菌為銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、鮑曼不動桿菌、金黃色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌。

抗生素的濫用給醫(yī)療界帶來了世界性的難題，細(xì)菌的耐藥性不斷升級，近年來多重耐藥的現(xiàn)象也已經(jīng)很普遍，甚至出現(xiàn)了泛耐藥的現(xiàn)象。本次監(jiān)測發(fā)現(xiàn)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs的檢出率分別為48.0%和24.0%。MRSA和MRCNS的檢出率分別為83.3%和77.8%。VRE的比例較高，占到腸球菌屬的21.5%，該院的耐藥情況也很嚴(yán)重。

腸桿菌科細(xì)菌對碳青霉烯類藥物的敏感性最高，本次監(jiān)測腸桿菌科細(xì)菌對亞胺培南和美羅培南的敏感率在99.8%以上；對阿米卡星、酶抑制劑復(fù)合制劑的敏感率也高達(dá)89.0%，可作為臨床經(jīng)驗用藥的優(yōu)選藥物；對頭孢菌素類和喹諾酮類藥物的敏感性較差。本次監(jiān)測大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的檢出率為48.0%和24.0%，其結(jié)果與北京醫(yī)院2008年的監(jiān)測結(jié)果接近[2]，低于2009年中國CHINET細(xì)菌耐藥監(jiān)測的結(jié)果[3]，也低于Mohnarin 2009年度報告華北地區(qū)的細(xì)菌耐藥監(jiān)測結(jié)果[4]。腸桿菌科細(xì)菌的耐藥機(jī)制很多，主要關(guān)注的是超廣譜β-內(nèi)酰胺酶、高產(chǎn)頭孢菌素酶（AmpC酶），這兩種酶易導(dǎo)致多重耐藥，還有極少數(shù)菌產(chǎn)碳青霉烯酶（碳青霉烯酶KPC），易導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生泛耐藥[5]。

非發(fā)酵菌中銅綠假單胞菌對阿米卡星的敏感率為67.0%，對左氧氟沙星、酶抑制劑復(fù)合制劑和碳青霉烯類藥物相對敏感，而對頭孢菌素類、廣譜青霉素類藥物耐藥性較強(qiáng)，其耐藥情況明顯較2009年中國CHINET細(xì)菌耐藥監(jiān)測嚴(yán)重，對藥物的敏感性結(jié)果也低于Mohnarin 2009年度報告華北地區(qū)的細(xì)菌耐藥監(jiān)測結(jié)果。鮑曼復(fù)合醋酸鈣不動桿菌僅對頭孢哌酮/舒巴坦的敏感率最高為44.0%，敏感率較Mohnarin 2009年度報告北京地區(qū)的水平低，對碳青霉烯類藥物相對敏感，敏感性較Mohnarin 2009年度報告北京地區(qū)的水平高，對其他藥物的耐藥率在64.0%以上，其耐藥程度也高于2009年中國CHINET細(xì)菌監(jiān)測的結(jié)果。耐藥情況不容樂觀。

葡萄球菌屬中MRSA和MRCNS的檢出率分別為83.3%和77.8%，其百分率高于北京醫(yī)院2005年至2008年連續(xù)監(jiān)測4年的結(jié)果，也遠(yuǎn)高于Mohnarin 2009年度報告華北地區(qū)和2009年中國CHINET細(xì)菌監(jiān)測的MRSA和MRCNS的水平，耐藥情況極其嚴(yán)重。金黃色葡萄球菌對萬古霉素和呋喃妥因全部敏感，對復(fù)方新諾明和利福平的敏感性也較高，對其他藥物如青霉素類，酶抑制劑復(fù)方制劑，氨基糖苷類，四環(huán)素類，大環(huán)內(nèi)酯類，喹諾酮類藥物敏感性較低。腸球菌屬VRE的百分率達(dá)12.2%，高于Mohnarin 2009年度報告華北地區(qū)和北京醫(yī)院2005 ～ 2008年連續(xù)4年的監(jiān)測結(jié)果。腸球菌數(shù)細(xì)菌以糞腸球菌和屎腸球菌為主，對萬古霉素敏感率為87.8%，對呋喃妥因的敏感率為67.2%，對利福平、青霉素類、喹諾酮類、四環(huán)素類藥物的敏感率較低。

由此可見該院的耐藥情況嚴(yán)重。隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，耐藥現(xiàn)象及其毒副作用日益突出，中藥的優(yōu)勢隨即顯現(xiàn)。中藥的抗感染作用主要不是直接抑菌作用，而是通過提高機(jī)體免疫力，間接殺滅病原體[6]。另外，中藥亦有增敏作用，不僅某些中藥之間存在增敏、增效作用，中藥對西藥也同樣存在。

已有大量報道中藥不論單味制劑還是復(fù)方制劑均具有不同程度的殺菌和抑菌效果。陳群等[7]報道中藥黃連等具有消除細(xì)菌R質(zhì)粒作用，可逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性。陳林娜等[8]通過中藥復(fù)方制劑（肺炎1號）對臨床耐藥菌株（MRSA菌株、產(chǎn)ESBLs肺炎克雷白桿菌）的體外抑菌試驗觀察，說明其對目前棘手的耐藥菌株有很好的抑菌作用。

中藥對耐藥菌的增敏作用和逆轉(zhuǎn)作用不可置疑，我國已開始致力于開發(fā)新的中藥，可望在不久的將來能開發(fā)出能對付細(xì)菌耐藥的有效藥物，開辟出治療細(xì)菌耐藥的新途徑。

[1]Approved stand M2-A8，M7-A6（M100-S19）.Wayne Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing S.19th ed[S].2010.

[2]艾效曼，陶鳳榮，宣天芝，等.北京近4年9 005株臨床分離細(xì)菌耐藥性監(jiān)測結(jié)果[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2011，26（1）：57-63.

[3]汪復(fù)，朱德妹，胡付品，等.2009年中國CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測[J].中國感染與化療雜志，2011，10（5）：325-334.

[4]艾效曼，陶鳳榮，許宏濤，等.Mohnarin 2009年度報告：華北地區(qū)細(xì)菌耐藥監(jiān)測[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2011， 27（7）：524-532.

[5]俞云松.革蘭陰性菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[M].北京：中國學(xué)術(shù)期刊電子雜志出版社，2010：88-96.

[6]溫燕，劉文輝.魚腥草注射液治療肺部感染48例[J].新中醫(yī)，2002，34（7）：65.

[7]陳群，陳南菊，王勝春.黃連對大腸桿菌R質(zhì)粒消除作用的實驗研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996，16（1）：37-38.

[8]陳林娜，周立勤，王漢敏，等.中藥對臨床耐藥菌株的體外抑菌試驗觀察[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2005，15（1）： 118-120.

Distribution and antibiotic resistance of 3432 clinic isolated pathogenic bacteria

LIN Ying1 LI Ya'na2 TAO Qingchun2 YANG Huimin2
1.Department of Clinical Laboratory,Dongzhimen Hospital of Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100700,China;2.Department of Clinical Laboratory,the Third Affiliated Hospital of Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China

Objective To investigate the distribution and antibiotic resistance of clinic isolated pathogenic bacteria from May 1,2010 to April 30,2011,and instruct the clinic to use drug reasonably.Methods The author Made the identification and antimicrobial susceptibility test of pathogenic bacteria by VITEK 32,analyzed the data with LIS system.Results A total of 3 432 clinical isolates(except fungi)were collected in the whole year,of which Gram-negative bacilli and Gram-positive cocci accounted for 73.6% and 26.4%.The dominant bacteria were Pseudomonas aeruginosa 23.5%(805),Escherichia coli 17.8%(610),Acinetobacter baumannii 11.7%(410),Staphylococcus aureus 9.6%(330),Klebsiella pneumoniae 7.9%(272).The detection rate of extended-spectrum beta-lactamases(ESBLs) to E.coli,Klebsiella pneumoniae were 48% and 24%.Methicillin resistant strains in S.aureus(MRSA) and coagulase negative Staphylococcus(MRCNS) accounted for 83.3% and 77.8% respectively.The resistant rate of Enterococcus to vancomycin was high(21.5%).Conclusion The antibiotic resistance of pathogenic bacteria was severely,it is essential to enhance the drug resistant surveillance so as to guide resonable clinical medicine.

Distribution of pathogenic bacteria;Antibiotic;Resistance

R331

A

2095-0616（2012）05-14-04

北京中醫(yī)藥大學(xué)自主選題項目（2009JYBZZ-JS096）。

2012-02-08）