徐國防 李 爽 劉長纓 李曉蘇

1.鄭州人民醫(yī)院醫(yī)務(wù)科，河南鄭州 450003；2.河南省人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河南鄭州 450000

木通皂苷D在不同pH值和溫度下的穩(wěn)定性

徐國防1李 爽1劉長纓1李曉蘇2▲

1.鄭州人民醫(yī)院醫(yī)務(wù)科，河南鄭州 450003；2.河南省人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河南鄭州 450000

目的研究木通皂苷D在不同的pH值和溫度下的穩(wěn)定性。方法 采用高效液相色譜法測定不同pH值的磷酸鹽緩沖液中木通皂苷D濃度。 結(jié)果 方法的精密度（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD）≤6.4%，準(zhǔn)確度（相對誤差，RE）≤±4.7%。木通皂苷D在中性和弱堿性的環(huán)境中比較穩(wěn)定，但在強(qiáng)酸和堿性環(huán)境中易分解，其降解速率還隨溫度的升高而加快。結(jié)論 試驗表明木通皂苷D的降解具有pH值和溫度依賴性，其在室溫條件下的穩(wěn)定性可以滿足分析測定的需求。

木通皂苷D；穩(wěn)定性

木通皂苷D是中藥續(xù)斷中的主要有效成分之一，其含量達(dá)2%以上[1]。續(xù)斷具有預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥，促進(jìn)骨愈合等療效[2]，最早見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其應(yīng)用已有數(shù)千年的歷史[3-6]。此外，它還具有抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)作用[7-8]。

木通皂苷D的分子結(jié)構(gòu)中有一個酯鍵，而酯鍵常常是不穩(wěn)定的，尤其是在酸性或堿性條件下，已有關(guān)于此酯鍵在220℃斷裂的報道[9]。見圖1。為了更好地理解其物理和化學(xué)性質(zhì)，進(jìn)一步研究和開發(fā)木通皂苷D和續(xù)斷藥材，本資料采用高效液相色譜法測定了木通皂苷D在不同pH值的磷酸鹽緩沖液中的降解速率，并考察了溫度對降解速率的影響。

圖1 木通皂苷D在220℃下的降解反應(yīng)

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-10 AT型液相色譜儀（日本島津公司），SPD-10 A型紫外檢測器（日本島津公司），Anastar色譜工作站（天津奧特塞恩斯儀器有限公司）。木通皂苷D對照品（批號：111685-200401）和β-谷甾醇對照品（批號：110851-200403）均購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇、乙腈均為色譜純，其他為分析純。

1.2 溶液配制

緩沖溶液：0.1 mol/L的磷酸鹽緩沖液若干份，分別用磷酸溶液或氫氧化鈉溶液（11 mol/L）調(diào)節(jié)至 pH1.5、3.0、5.0、6.5、7.4、9.1 和 11.1，供試驗用。

木通皂苷D溶液：用pH為1.5的磷酸鹽緩沖液配制成含木通皂苷D 155 μg/mL的溶液若干份，分別于4℃、25℃、60℃、80℃水浴，每個溫度水平雙樣本分析。

內(nèi)標(biāo)溶液：將β-谷甾醇對照品溶解在甲醇中制成0.4 μg/mL的溶液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性[10]

色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-乙腈-水（20:35:45，v/v）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：205 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：室溫。

在上述色譜條件下試驗，理論塔板數(shù)按木通皂苷D和β-谷甾醇計算均不低于4 000，且無雜質(zhì)峰干擾。

空白樣品溶液試驗：不含木通皂苷D和β-谷甾醇的磷酸鹽緩沖液進(jìn)樣后色譜圖見圖3（A），可見，空白樣品中在被測組分峰位上沒有吸收峰，故對測定無干擾。在該條件下的典型色譜圖見圖2（B、C）。

1.4 測定方法驗證

圖2 木通皂苷D典型色譜圖：（A）空白樣品；（B）空白樣品添加木通皂苷D（100 μg/mL）和內(nèi)標(biāo)（β-谷甾醇，0.4 μg/mL）；（C）pH為5.0的樣品溶液在37 ℃水浴24 h后進(jìn)樣的色譜圖

在上述條件下，木通皂苷D的線性范圍為10～250 μg/mL，典型的線性方程為：Y=7.0×10-3X+1.8×10-2，r=0.998 6。木通皂苷D的定量下限（LLOQ）為2μg/mL。用低、中、高濃度分別為10、50、250μg/mL的質(zhì)量控制樣品溶液驗證方法的日內(nèi)和日間精密度（n=18），結(jié)果，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別≤5.9 %和6.4%（n=6）。方法的相對誤差在±4.7 %范圍內(nèi)。

2 結(jié)果

2.1 酸度的影響

木通皂苷D在從1.5到11.1不同pH值的磷酸鹽緩沖液中放置一定的時間，抽取適量測定，計算其濃度的自然對數(shù)值，繪制降解曲線，見圖3。

圖3 37℃下，木桶皂苷D在不同pH值溶液中的降解曲線

可見，在中性和弱酸性條件下，木通皂苷D是穩(wěn)定的，37℃24 h內(nèi)木通皂苷D的濃度幾乎不下降。當(dāng)pH值從6.5上升或者下降時，木通皂苷D的穩(wěn)定性逐漸變差，在pH值1.5和11.1時，其t0.9分別為70.2 h和65.8 h。木通皂苷D在強(qiáng)酸和強(qiáng)堿條件下比中性和弱酸性條件下降解速率快，這與其他多數(shù)酯類相似。

2.2 溫度的影響

pH1.5的緩沖溶液中，木通皂苷D在不同溫度條件下放置一定時間，抽取適量測定，計算其濃度的自然對數(shù)值，繪制降解曲線。見圖4。

可見，木通皂苷D隨著溫度的升高降解速率加快，而且在整個試驗溫度范圍內(nèi)，阿倫尼烏斯降解曲線基本為一條直線（r=0.999 6）。試驗表明，溫度能夠影響木通皂苷D的穩(wěn)定性，且低溫條件下更穩(wěn)定。

圖4 pH1.5下，木桶皂苷D在不同溫度條件下的降解曲線

3 討論

川續(xù)斷的主要結(jié)論成分是三萜皂苷，現(xiàn)已分離鑒定出23種三萜皂苷[11]。本資料采用高效液相色譜法測定木桶皂苷D，并用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析，內(nèi)標(biāo)物在測定前即加入，不受存放條件的影響，分析方法準(zhǔn)確可靠。有文獻(xiàn)[9]報道木桶皂苷D在220℃酯鍵斷裂，生成新的化合物，但在本資料所述試驗條件下的降解產(chǎn)物沒有確認(rèn)，有待進(jìn)一步研究。此外，使用不同加工方法處理續(xù)斷，其中的皂苷D含量發(fā)生變化[12]，而本資料只考察了水溶液中木桶皂苷D的穩(wěn)定性，這是因為本研究的目的是為藥代動力學(xué)研究建立分析方法時做參考，也僅考察了溫度和pH值對其穩(wěn)定性的影響，這是由于二者是溶液中物質(zhì)穩(wěn)定性的最重要和最常見的影響因素，限于時間關(guān)系，沒有進(jìn)一步考察其他的影響因素。

[1]國家藥典委員會.中國藥典一部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：231.

[2]楊中林.木通皂苷D在制備防治骨病藥物中的應(yīng)用：中國，1209116[P].2005年7月6日.

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Stability of akebia saponin D at different pH value and temperatures

XU Guofang1 LI Shuang1 LIU Changying1 LI Xiaosu2
1.Medical department, People's Hospital of Zhengzhou City, Zhengzhou 450003, China; 2.Department of respiratory medicine, Henan Provincial People's Hospital, Zhengzhou 450000,China

Objective Stability of akebia saponin D was investigated in sodium phosphate buffers with different pH value and temperature.Methods Akebia saponin D in sodium phosphate buffers with different pH value and temperature was quantified using a high-performance liquid chromatography method.Results The precision of the method was within 6.4%(RSD) and the accuracy was within ±4.7%(RE).The akebia saponin D was stable in neutral and weak acidic conditions,but decomposed under strong acidic and basic conditions, which was pH- and temperature-dependent.Decomposition rate speeded up with the rise of temperature.Conclusion The results showed that the decomposition of akebia saponin D was pH- and temperature - dependent.The nine-tenths life is long enough for analyzing at room temperature.

Akebia saponin D;Stability

R914

B

2095-0616（2012）06-74-02

▲通訊作者

2012-02-01）