，，

(1.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江杭州 310058；2.嘉興市畜牧獸醫(yī)局，浙江嘉興 314050)

目前，豬瘟(HC)、口蹄疫(FMD)、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)仍是威脅養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病，為國家規(guī)定強(qiáng)制免疫的生豬病種[1]。按照傳統(tǒng)免疫程序，一般采用首免注射豬繁殖與呼吸綜合征疫苗，7～10 d后注射豬瘟、口蹄疫疫苗，2個(gè)月后二免。這種程序比較復(fù)雜，特別是反復(fù)捕捉和注射，造成人力浪費(fèi)，而且會(huì)對豬只造成很大應(yīng)激反應(yīng)，免疫效果不佳。為提高免疫工作效率和HC、FMD、PRRS三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫的免疫效果，特進(jìn)行本試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)在嘉興市某自繁自養(yǎng)規(guī)模豬場進(jìn)行，該豬場常年存欄母豬300頭，經(jīng)檢測供試仔豬均為HC、FMD、PRRS抗體陰性。

1.2試驗(yàn)疫苗 HC活疫苗(細(xì)胞苗，由杭州薦量生物藥廠生產(chǎn)，批號(hào)201004108)；FMD油乳劑滅活苗(中牧蘭州生物藥廠生產(chǎn)，批號(hào)201101002)；PRRS油乳劑滅活疫苗(由中牧公司生產(chǎn)，批號(hào)201006002)。

1.3檢測試劑 HC和FMD O型正向血凝抗原檢測試劑和稀釋劑均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)(批號(hào)分別為20110515和20110520)，PRRS抗體檢測ELISA試劑盒由法國LSI公司生產(chǎn)(批號(hào)2-VETPRA-008)。

1.4檢測方法 采用正向間接血凝試驗(yàn)和ELISA[2-3]。

1.5安全試驗(yàn) 隨機(jī)選擇健康狀況良好、飼養(yǎng)條件一致、體重15～25 kg斷奶仔豬20頭，分為A、B兩組，每組10頭，A組注射HC、FMD和PRRS疫苗，B組注射HC、FMD疫苗。嚴(yán)格按疫苗說明書操作，注苗后每1 h測量一次體溫，共測3～4次，同時(shí)觀察注射局部的反應(yīng)和全身反應(yīng)。供試疫苗均順利通過安全試驗(yàn)。

1.6試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)一：選擇日齡相近、飼養(yǎng)條件一致，健康狀況良好的斷奶仔豬150頭，分成A、B、C三組，每組50頭。A組按照傳統(tǒng)免疫程序注射HC和FMD疫苗；B組按照傳統(tǒng)的免疫程序分別注射HC、FMD、PRRS疫苗；C組按照同時(shí)分點(diǎn)注射HC、FMD、PRRS疫苗，具體免疫程序詳見表1。

免疫注射后20～30 d采集血液分離血清，進(jìn)行抗體檢測。HCV、FMDV抗體用正向間接血凝試驗(yàn)法檢測；PRRSV抗體用ELISA法檢測(PRRSV抗體效價(jià)≥1∶32，HCV抗體效價(jià)≥1∶32為免疫合格，ELISA法合格率見試劑盒說明書)。

試驗(yàn)二：豬場PRRSV感染情況監(jiān)測：隨機(jī)選擇3頭未經(jīng)PRRS疫苗免疫母豬所產(chǎn)仔豬15頭(日齡為50日齡)進(jìn)行PRRSV感染情況檢測。

表1 仔豬接種不同疫苗的免疫程序

1.7飼養(yǎng)管理 按試驗(yàn)設(shè)計(jì)，各組單獨(dú)一圈，隔離飼養(yǎng)。飼養(yǎng)管理程序按常規(guī)進(jìn)行，臨床觀察記錄不同試驗(yàn)時(shí)期試驗(yàn)豬群的母豬繁殖障礙(返情、流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、木乃伊)和仔豬成活、死亡、淘汰等情況。

2 結(jié)果與分析

2.1試驗(yàn)期間各組試驗(yàn)豬只均未見明顯免疫副作用 該項(xiàng)結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[4-5]基本一致。

2.2試驗(yàn)A組、B組50～60日齡HC、FMD 2種疫苗同時(shí)免疫后28 d豬瘟抗體檢測結(jié)果 詳見表2。

表2 HC疫苗二免后28 d抗體檢測結(jié)果

由表2可見，HC二免后28 d，免疫注射過FMD疫苗的B組HC抗體水平明顯高于A組(未注射PRRS疫苗的豬瘟抗體水平)，免疫抗體的合格率達(dá)到90.0%，與A組(合格率24.0%)相比，差異顯著(P<0.05)。

2.3C組HC、FMD、PRRS三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫后的抗體檢測結(jié)果 詳見表3、表4、表5。

表3 三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫后HCV抗體檢測結(jié)果

由表3可見，C組HC、FMD、PRRS三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射后，對HC抗體水平未見明顯抑制作用，首免20 d后抗體合格率達(dá)到68.0%，平均抗體滴度為25.4，二免28 d后抗體合格率達(dá)到91.7%，平均抗體滴度為28.9，具有良好的免疫保護(hù)作用。

表4 三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫后FMDV抗體水平

由表4可見，HC、FMD、PRRS三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射后，對FMDV抗體水平未見明顯抑制作用，首免20 d后抗體合格率達(dá)到80.0%，平均抗體滴度為27.2，二免28 d后抗體合格率達(dá)到81.3%，平均抗體滴度為28.0，具有良好的免疫保護(hù)作用。

表5 三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫后PRRSV抗體水平檢測結(jié)果

由表5可見，C組豬的PRRS母源抗體陽性率為16.0%，經(jīng)PRRS首免、二免后的抗體陽性率雖略有提高，分別為26.0%和31.3%，但抗體水平仍然不高。通過跟蹤觀察，該批仔豬均未出現(xiàn)PRRS臨床癥狀。

2.4豬場PRRSV感染情況監(jiān)測結(jié)果 詳見表6。

表6 豬場PRRSV感染情況

由表6可見，經(jīng)ELISA檢測，隨機(jī)選擇3頭未經(jīng)PRRS疫苗免疫母豬所產(chǎn)仔豬15頭，經(jīng)PRRSV感染情況檢測，PRRS陽性率達(dá)到60.0%。

2.5免疫前后PRRS發(fā)病情況比較 根據(jù)豬場2008～2011年的連續(xù)跟蹤調(diào)查，進(jìn)行HC、FMD、PRRS三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫后，乳豬PRRS發(fā)病率由2008年的18.7%降至2009年0.4%，2010年和2011年則未見發(fā)??；斷奶仔豬發(fā)病率則由2008年的21.8%降至2009年的1.5%和2010年的0.7%，死亡率由原來的17.2%降至2009年的0.9%和2010年的0.2%，2011年則未見發(fā)病死亡。PRRS得到了有效控制(詳見表7)。

表7 三種疫苗免疫前后PRRS發(fā)病情況調(diào)查

3 小結(jié)與討論

3.1經(jīng)本次試驗(yàn)，HC、FMD、PRRS三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫注射后，未見產(chǎn)生相互間的抑制和干擾作用。仔豬30～35日齡、60～65日齡兩次同時(shí)接種PRRS、HC、FMD三種疫苗，抗體檢測均超過免疫合格水平，表明三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫注射是可行的，這與國內(nèi)其他相關(guān)報(bào)道基本一致[6]。

3.2本次試驗(yàn)PRRS母源抗體陽性率達(dá)到16.0%，說明該豬場還存在隱性感染情況，總體抗體陽性率普遍較低,原因可能與目前采用的PRRS抗體檢測ELISA試劑盒只對豬血清中抗PRRSV的N蛋白敏感有關(guān)。且不能定性定量檢測PRRS免疫抗體，故檢測方法有待進(jìn)一步改進(jìn)[7]。

3.3PRRS感染豬對呼吸系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)影響較大[8，9]，對HC等疫苗的免疫效果可產(chǎn)生抑制作用，可能引起HC免疫失敗情況。從試驗(yàn)情況看，已感染PRRSV的仔豬，不接種PRRS疫苗，HC二免后28 d，平均抗體水平為22.8，只有24.0%的仔豬免疫抗體滴度達(dá)到有效免疫保護(hù)水平；而接種PRRS疫苗，HC二免后28 d，平均抗體水平為27.5，仔豬免疫抗體滴度超過有效免疫保護(hù)水平，HC免疫抗體合格率達(dá)90.0%。

3.4檢測結(jié)果顯示，HC和FMD二免后抗體水平普遍高于一免后抗體水平，并能達(dá)到國家規(guī)定的群體合格率在70%以上的要求。因此，HC和FMD嚴(yán)格實(shí)施二次免疫能有效提高機(jī)體的抵抗力，防止重大疫病發(fā)生。

3.5在實(shí)際生產(chǎn)中，原來三種疫苗分別免疫注射，必須多次抓豬給豬只造成反復(fù)應(yīng)激；本試驗(yàn)采用三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫，省工省力，可減少不良應(yīng)激。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，已有部分地區(qū)將此種免疫程序運(yùn)用到生產(chǎn)實(shí)踐，效果良好[10-11]。

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[3]農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《高致病性禽流感防治技術(shù)規(guī)范》等14種動(dòng)物疫病防治技術(shù)規(guī)范的通知[Z].農(nóng)醫(yī)發(fā)[2007]12號(hào).北京：農(nóng)業(yè)部，2007.

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