北京市西城區(qū)藥品檢驗(yàn)所（100037）趙鳴舒 安瑩 王靜 張仕杰 宿威 王敏

伴隨著藥品制假水平的不斷提高，近年來(lái)對(duì)于中成藥非法添加的研究日趨深入[1][2][3][4][5][6][7][8][9][10]，但并沒(méi)有關(guān)于中藥飲片對(duì)非法添加檢驗(yàn)方法影響的相關(guān)研究。為了能更深入地研究非法添加的檢驗(yàn)方法，避免因中藥飲片自身因素而影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，北京市西城區(qū)藥品檢驗(yàn)所的檢驗(yàn)人員特地針對(duì)中藥飲片進(jìn)行了非法添加的檢驗(yàn)，從而可以有效地避免假陽(yáng)性現(xiàn)象的產(chǎn)生。

通過(guò)前期對(duì)轄區(qū)醫(yī)院制劑非法添加的檢驗(yàn)，檢驗(yàn)人員發(fā)現(xiàn)激素類成分即可應(yīng)用于止咳平喘類藥品中，也可應(yīng)用于祛風(fēng)除濕類藥品中，而且激素類成分的相關(guān)檢驗(yàn)方法抗干擾能力較差，假陽(yáng)性、假陰性率較高。此次，檢驗(yàn)人員針對(duì)目前止咳平喘類藥品和祛風(fēng)除濕類藥品中常用的中藥飲片，應(yīng)用醋酸潑尼松非法添加的檢驗(yàn)方法進(jìn)行全面檢測(cè)，評(píng)估中藥飲片對(duì)相關(guān)檢驗(yàn)方法的影響程度。

1 儀器與試藥

1.1儀器 LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津公司)；AE240型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2試藥 醋酸潑尼松對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，100012-200706）。青黛、沒(méi)藥、雞血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、連翹、當(dāng)歸、白芷、丹參（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為1170-200001、120967-201104、121173-200902、121027-200403、120970-200904、120949-200504、120993-200403、120908-200613、120927-200613、120945-200406、120923-200509）。乙腈、四氫呋喃為色譜純，其余為分析純，水為純化水。

附表2 色譜圖結(jié)果舉例

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

2..1.1色譜柱 Agilent C18柱（150mm×4.6mm，5um）；流動(dòng)相：乙腈-水（33∶67）；檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；流速：1.0mL/min。2.1.2梯度洗脫方法 色譜柱：Agilent C18柱（150mm×4.6mm，5um）；流動(dòng)相：A（水-四氫呋喃=100∶1），B（乙腈-水-四氫呋喃=80∶20∶1）；梯度洗脫程序（見(jiàn)附表1）；檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；流速：1.0mL/min。

2.2 溶液制備

2.2.1對(duì)照品溶液制備 精密稱取醋酸潑尼松對(duì)照品10mg，置100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為醋酸潑尼松對(duì)照品溶液。

附表1 梯度洗脫程序表

2.2.2供試品溶液制備 精密稱取青黛對(duì)照藥材1g，置于100mL量瓶中，加入甲醇適量，超聲處理（功率250W，頻率35kHz）30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為青黛供試品溶液。同樣方法分別制成沒(méi)藥、雞血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、連翹、當(dāng)歸、白芷、丹參供試品溶液。

2.2.3陽(yáng)性對(duì)照液的制備 精密量取醋酸潑尼松對(duì)照品溶液1mL，置10mL量瓶中，加青黛供試品溶液稀釋至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，即得。同法分別制成沒(méi)藥、雞血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、連翹、當(dāng)歸、白芷、丹參陽(yáng)性對(duì)照溶液。

2.3HPLC法測(cè)定

2.3.1精取醋酸潑尼松對(duì)照品溶液、供試品溶液和陽(yáng)性對(duì)照液各20uL，分別注入液相色譜儀，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果顯示：青黛、雞血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、連翹、當(dāng)歸、白芷的供試品色譜中未出現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰；相應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照液色譜中出現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。沒(méi)藥、丹參供試品色譜中出現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰；相應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照液色譜中，與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰數(shù)值明顯增大。（色譜圖舉例見(jiàn)附表2）。

2.3.2梯度洗脫法測(cè)定 精取醋酸潑尼松對(duì)照品溶液；沒(méi)藥、丹參供試品溶液和相應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照液各20uL，分別注入液相色譜儀，按照“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果顯示：供試品色譜中未出現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰；相應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照液色譜中出現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。

2.4樣品分析 “2.1.1”項(xiàng)下色譜條件是《中國(guó)藥典》2010年版二部[11]對(duì)醋酸潑尼松的檢測(cè)方法，青黛、雞血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、連翹、當(dāng)歸、白芷等9味中藥飲片對(duì)該方法無(wú)干擾，而沒(méi)藥、丹參只有在按照“2.1.2”項(xiàng)下梯度洗脫檢測(cè)系統(tǒng)中，才對(duì)檢測(cè)方法無(wú)干擾。但是梯度洗脫方法存在操作過(guò)程繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、色譜圖影響因素多等缺點(diǎn)。因此，如果要對(duì)成藥進(jìn)行醋酸潑尼松的非法添加檢測(cè)時(shí)，應(yīng)考慮到上述的干擾因素，靈活利用各種方法排查藥品的非法添加情況。

3 討論

中藥成分復(fù)雜，單味藥中就可能含有多種成分。近年來(lái)，伴隨著藥品制假工藝的不斷提高，中成藥中非法添加西藥成分的案例已經(jīng)屢見(jiàn)不鮮。當(dāng)前對(duì)于非法添加的檢驗(yàn)，僅僅停留在非法添加成分是否可以檢測(cè)到或某一品種成藥可以測(cè)到非法添加成分，而未考慮中藥材對(duì)相關(guān)檢測(cè)方法的影響。此次，檢驗(yàn)人員僅對(duì)部分藥材進(jìn)行了醋酸潑尼松非法添加的檢驗(yàn)，就發(fā)現(xiàn)2種飲片對(duì)部分檢驗(yàn)方法有明顯影響。因此，檢驗(yàn)人員在進(jìn)行非法添加方法研發(fā)的時(shí)候，首先應(yīng)考慮到中藥自身的影響因素，需要進(jìn)行全面地、系統(tǒng)地研究，明確各類干擾因素后，再進(jìn)行相關(guān)研究，有效地降低相關(guān)方法假陽(yáng)性、假陰性出現(xiàn)的概率，確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

研究中藥飲片對(duì)非法添加方法的影響，首先應(yīng)考慮到相關(guān)非法添加成分的藥效，有的放矢地排查相關(guān)飲片，并不需要對(duì)所有市面上的飲片進(jìn)行排查。在發(fā)現(xiàn)僅有少數(shù)對(duì)相關(guān)方法有影響時(shí)，可以采取更為精密、先進(jìn)的儀器進(jìn)行檢測(cè)。確定其影響因子以后，再重新引入相關(guān)方法中，確保非法添加檢測(cè)方法的科學(xué)性和準(zhǔn)確性，提高相關(guān)方法的抗干擾能力。