趙先亮，王士立

(1.濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司，山東 濟(jì)南250200;2.山東省醫(yī)藥生物技術(shù)研究中心，山東濟(jì)南250200)

胞磷膽堿鈉片中有效成分胞磷膽堿(cytidine diphosphate choline)為胞嘧啶核苷二磷酸膽的堿簡(jiǎn)稱(chēng)，為核酸類(lèi)衍生物，對(duì)各種腦損傷引起的意識(shí)障礙，包括精神、行為、記憶、學(xué)習(xí)有明顯改善，所以胞磷膽堿在中風(fēng)藥物中列為神經(jīng)保護(hù)劑。除改善中風(fēng)后癥狀及患者各項(xiàng)中樞神經(jīng)功能外，對(duì)帕金森綜合征［1］、癡呆癥［2］、青光眼［3］亦有一定療效。目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)廠家僅有兩家，為滿(mǎn)足市場(chǎng)需要，我公司對(duì)胞磷膽堿鈉片進(jìn)行了研發(fā)，通過(guò)對(duì)胞磷膽堿片的光照試驗(yàn)、加速試驗(yàn)及長(zhǎng)期室溫留樣試驗(yàn)觀察，以含量作為考察指標(biāo)，為藥品儲(chǔ)存、有效期的確定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SeriesIII Laballiance型高效液相色譜儀，WD－B恒溫加速試驗(yàn)箱(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠)，GZX－250光照箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)。

1.2 藥品與試藥 胞磷膽堿片(濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)090406、090407、090408)，乙腈(色譜純;美國(guó)天地)，磷酸(分析純;萊陽(yáng)康德化工有限公司)。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1.1 檢測(cè)方法 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液－甲醇(95∶5)為流動(dòng)相，流速1 mL·min－1;柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為276 nm。取5'－胞苷酸25 mg，置100 mL的量瓶中，加水稀釋制成每1 mL中含0.25 mg的溶液，取上述溶液適量，與胞磷膽堿鈉對(duì)照品溶液等量混合，搖勻，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，胞磷膽堿鈉與5'－胞苷酸的分離度應(yīng)符合要求。

2.1.2 測(cè)定法 取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于胞磷膽堿25 mg)，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液;另取105℃干燥4 h的胞磷膽堿鈉對(duì)照品適量，用水制成每1 mL中約含胞磷膽堿0.25 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取上述溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算即得。

2.1.3 線(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取105℃干燥4 h的胞磷膽堿鈉對(duì)照品21.70 mg(中檢所提供，含量以胞磷膽堿計(jì)95.69%)置25 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別取1、2、3、4、5 mL至10 mL的容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖。得回歸方程:A=9.61 ×103C －5.71×104，r=0.999 6，結(jié)果表明胞磷膽堿在 83.06 ～415.29 μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2 胞磷膽堿片的穩(wěn)定性研究

2.2.1 光照試驗(yàn) 取本品(批號(hào):090406)，除去外包裝，開(kāi)口置玻璃平皿中，放于GZX－250光照箱，照度為(4 500±500)lx中，分別于第5、10天取樣，依上述方法測(cè)定含量，并與0 d的結(jié)果進(jìn)行比較，觀察樣品在強(qiáng)光照射下的穩(wěn)定性，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 胞磷膽堿鈉片強(qiáng)光照射試驗(yàn)結(jié)果(批號(hào)090406)

2.2.2 高溫試驗(yàn) 取本品(批號(hào):090406)，除去外包裝，置玻璃平皿中，于60℃恒溫箱中放置，分別于第5、10天取樣，按考察項(xiàng)目檢查和測(cè)定，并與0 d的結(jié)果進(jìn)行比較，觀察樣品在高溫條件下的穩(wěn)定性，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 胞磷膽堿鈉片高溫試驗(yàn)結(jié)果(批號(hào)090406)

2.2.3 高濕試驗(yàn) 取本品(批號(hào):090406)，除去外包裝，開(kāi)口置玻璃平皿中，于25℃、相對(duì)濕度RH(90±5)%的密閉容器中放置，分別于第5、10天取樣，按考察項(xiàng)目檢查和測(cè)定，并與0天的結(jié)果進(jìn)行比較，觀察樣品在高濕條件下的穩(wěn)定性，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 胞磷膽堿鈉片高濕試驗(yàn)結(jié)果(批號(hào)090406)

2.2.4 經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn) 取胞磷膽堿鈉片三批(批號(hào)090406、090407、090408)在市售包裝條件下，于溫度(40±2)℃、(50±2)℃、(60±2)℃和 RH(75±5)%的條件下，放置6個(gè)月，分別于 0、1、2、3、6個(gè)月各取樣，依法測(cè)定含量。以lgC和時(shí)間t作回歸曲線(xiàn)，根據(jù)一級(jí)動(dòng)力學(xué)公式:

當(dāng)前，國(guó)內(nèi)城市地鐵大多采用110/35kV的兩級(jí)電壓集中供電方式。這種供電方式主要由外部電源、主變電所、中壓環(huán)網(wǎng)、牽引變電所和降壓變電所構(gòu)成。每個(gè)主變電所從城市電網(wǎng)引入2路110kV電源互為備用，降壓至地鐵所需的35kV中壓系統(tǒng)，然后通過(guò)中壓環(huán)網(wǎng)向牽引變電所和降壓變電所供電。中壓環(huán)網(wǎng)采用分區(qū)供電，幾個(gè)相鄰的牽引變電所通過(guò)串接的方式構(gòu)成一個(gè)供電分區(qū)。主變電所向每個(gè)供電分區(qū)的一個(gè)變電所供電，分區(qū)的其他變電所則通過(guò)串接的方式獲得電源。各個(gè)牽引變電所之間通過(guò)交流電纜連接，這樣就構(gòu)成了地鐵的集中供電系統(tǒng)，如圖2所示。

V=KC，即 dC/dt=KC

K=dC/C×1/dt

積分得:K=(1/t)×ln(Ct/C0)

即:lnCt=lnC0+Kt

分別計(jì)算出40、50、60℃的K值，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 胞磷膽堿鈉片加速試驗(yàn)結(jié)果(批號(hào)090406)

2.2.5 有效期估算 經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)的理論依據(jù)是arrhenius方程:K=Ze－E/RT，經(jīng)推導(dǎo)換算得通式為:lnK=A+B/T，K 為負(fù)數(shù)則為 ln(－ K)=A+B/T［4］。

式中:T為絕對(duì)溫度;R為氣體常數(shù);E為活化能，對(duì)某一具體反應(yīng)為常數(shù);K為速度常數(shù)，是化學(xué)反應(yīng)的一個(gè)特征數(shù)值，與濃度無(wú)關(guān)。

根據(jù)上式及一級(jí)動(dòng)力學(xué)公式lnCt=lnC0+Kt計(jì)算得出K25℃的值，再依據(jù)t=(1/K)×ln(Ct/C0)估算有效期，其中C0為每批的初始含量，Ct為本品規(guī)定的最低含量限度，根據(jù)表4至表6數(shù)據(jù)可以看出，隨著胞磷膽堿鈉的分解含量降低，有關(guān)物質(zhì)增加，為保證有效期內(nèi)有關(guān)物質(zhì)符合規(guī)定，確定Ct為 95.0%，結(jié)果見(jiàn)表 5、表 6。

表5 三批胞磷膽堿鈉片動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)

表6 K25℃及有效期

根據(jù)090407批、090409批加速試驗(yàn)結(jié)果，同法計(jì)算，其回歸方程分別為:ln(－K)= －8 172.4/T+20.03、ln(－K)=－9 764.3/T+24.90，得出其估算有效期分別為83個(gè)月、135個(gè)月。

2.2.6 長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn) 樣品批號(hào):090406，090407，090408。按上市包裝，置溫度(25±2)℃、相對(duì)濕度(60±10)%的條件下放置36個(gè)月。分別于第3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月、24個(gè)月、36個(gè)月末取樣，比較外觀后，測(cè)試各項(xiàng)指標(biāo)，將結(jié)果與0個(gè)月比較，結(jié)果見(jiàn)表7。

3 討論

本研究重點(diǎn)考察了胞磷膽堿鈉片的化學(xué)穩(wěn)定性，主要采用了光照試驗(yàn)、60℃高溫試驗(yàn)、高濕試驗(yàn)、經(jīng)典恒溫?zé)峒铀僭囼?yàn)、長(zhǎng)期試驗(yàn)。加速試驗(yàn)是在超常條件下進(jìn)行的，其目的在于通過(guò)加速藥物的化學(xué)或物理變化，觀察藥物的穩(wěn)定性，預(yù)測(cè)其有效期，為藥品儲(chǔ)存、有效期的確定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3.1 光照試驗(yàn) 本品在強(qiáng)光條件下考察10 d，外觀、有關(guān)物質(zhì)、溶出度、含量等各項(xiàng)理化指標(biāo)基本無(wú)明顯改變，表明本品在強(qiáng)光條件下性質(zhì)基本穩(wěn)定。

3.2 高溫試驗(yàn) 本品在60℃高溫條件下考察10 d，外觀、有關(guān)物質(zhì)、溶出度、含量等各項(xiàng)理化指標(biāo)基本沒(méi)有明顯改變，表明本品在高溫條件下性質(zhì)基本穩(wěn)定。

3.3 高濕試驗(yàn) 本品在高濕條件下考察10 d，外觀、有關(guān)物質(zhì)、溶出度、含量等各項(xiàng)理化指標(biāo)基本沒(méi)有明顯改變，表明本品在高濕條件下性質(zhì)基本穩(wěn)定。

3.4 經(jīng)典恒溫?zé)峒铀僭囼?yàn) 由經(jīng)典恒溫?zé)峒铀僭囼?yàn)結(jié)果表明，三批樣品的回歸方程分別是ln(－K)=－8 533.4/T+21.14、ln(－K)= －8 172.4/T+20.03、ln(－K)= －9 764.3/T+24.90，分解5%的時(shí)間分別是100個(gè)月，83個(gè)月，135個(gè)月，說(shuō)明胞磷膽堿鈉片具有非常好的穩(wěn)定性，考慮到產(chǎn)品市場(chǎng)消耗周期及銷(xiāo)售后的環(huán)境變動(dòng)等因素，可將本產(chǎn)品有效期定為36個(gè)月。

3.5 長(zhǎng)期試驗(yàn) 通過(guò)對(duì)三批樣品長(zhǎng)期試驗(yàn)考察，在36個(gè)月內(nèi)樣品質(zhì)量同0月相比基本沒(méi)有變化，與經(jīng)典恒溫?zé)峒铀僭囼?yàn)預(yù)測(cè)有效期吻合。

［1］Ross BM，Mamalias N，Moszczynska A，et al.Elevated activity of phospholipid biosynthetic enzymes in substantia nigra of patients with Parkinson's disease［J］.Neuroscience，2001，102(4):899 －904.

［2］王曉燕.胞磷膽堿鈉的臨床應(yīng)用［J］.華夏醫(yī)藥，2003，7(3):73－75。

［3］Rejda R，Toezolowski J，Kurkowski J，et al.Oral citicoline treatment improves visual pathway function in glaucoma［J］.Med Sci Monit，2003，9(3):124 －128.

［4］趙先亮，周曰玲，張翠娟.酪酸梭菌二聯(lián)活菌散及膠囊的加速穩(wěn)定性試驗(yàn)［J］.齊魯藥事，2009，28(4):241－244.