李會榮

（山東省飼料質量檢驗所 濟南 250022）

飼料香味劑作為誘食劑，能把動物吸引到飼料周圍，并使之產生饑餓感、自在感，刺激唾液和消化液的分泌；能提高適口性，保證動物在高溫、斷奶、運輸、疾病等應激狀態(tài)下的采食量；能有效掩蓋飼料中的不良味道，使飼料充滿香甜氣味；能產生均一的氣味，使畜禽順利適應飼料配方和飼料原料的改變，促進幼齡動物提前斷奶，提早采食；還可以作為一種產品標記，使飼料產品更具競爭力。

國內外香味劑的檢測，主要是以氣相色譜或液相色譜為核心的檢測技術，近幾年我國食品行業(yè)也相繼發(fā)布了一些單一香味劑的產品標準及檢測方法。我國市場上銷售的飼料香味劑種類眾多，但目前尚無單一飼料香味劑的產品標準及檢測方法，更沒有飼料香味劑中多種成分同步檢測的方法。本研究針對飼料香味劑添加成分繁多復雜的特性，參照食品中單一香味劑的檢測方法，建立了氣相色譜法同步檢測飼料香味劑中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的方法，同時對方法的檢出限、準確度和精密度等進行了試驗驗證。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 分析純無水乙醇。

1.1.2 儀器和設備 分析天平（感量0.1mg）；Agilent6890N氣相色譜儀（具有FID檢測器和可程序升溫的柱溫箱）。

1.1.3 標準物質 乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯標準品純度大于98%。（1）乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標準貯備溶液：準確稱取乙基香蘭素0.1000g、乙基麥芽酚0.1000g于10ml棕色容量瓶中，加5ml無水乙醇溶解后，再準確量取椰子醛0.10ml、乙酸異戊酯0.10ml，用無水乙醇定容。該溶液中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的濃度均為10mg/ml。2～8℃保存，保質期1個月。（2）乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標準中間溶液：準確移取乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標準貯備溶液1ml，置于10ml棕色容量瓶中，用無水乙醇定容。該溶液中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的濃度均為1mg/ml。2～8℃保存，保質期1周。（3）乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標準工作溶液：準確移取適量乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標準貯備溶液（1）和混合標準中間溶液（2），分別配制成濃度為0.01、0.10、0.20、0.50、1.00和2.00mg/ml的混合標準工作溶液?，F用現配。

1.2 方法

1.2.1 氣相色譜參考條件 色譜柱：HP-5或同等效果的柱子，30m×0.25μm；進樣口溫度：240℃；不分流進樣；載氣流速：8.0ml/min；柱溫箱溫度：起始60℃，保持2min，以30℃/min的速率升溫至200℃，保持2min；檢測器溫度：260℃。試驗結果見圖1。結果表明：該色譜條件均能滿足色譜分析的需要。

圖1 乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標樣圖譜

1.2.2 提取條件的確定 由于檢測的四種物質均能溶解于無水乙醇[1-5]，因此選用無水乙醇作為提取劑。用空白的載體，添加不同濃度的乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯，選用振蕩器、旋渦混合器和手動振搖三種不同的方法提取后，上機測定其回收率。由于不同提取方式的回收率幾乎相同，且考慮到檢測的這四種物質均有揮發(fā)性，處理的步驟越簡單越好。因此，選用處理簡單且不需要其它輔助設備的手動振搖提取方式。即準確稱取試樣適量（精確至0.0002g）（使待測溶液中所測物的含量控制在0.01～2.00mg/ml之間），置于10ml棕色容量瓶中，加5ml無水乙醇，振蕩混勻，用無水乙醇定容至刻度?；靹蚝箪o置。取上清溶液，溶液過0.45μm的微孔濾膜，供上機測定。

2 結果

2.1 方法的線性范圍

將標準工作溶液依次從低濃度到高濃度進樣，每一濃度進樣三針，按其所得峰面積的平均值與對應的標準溶液濃度（mg/ml）作標準曲線，計算出回歸方程和相關系數。試驗結果見圖2。結果表明：乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯標準工作溶液在0.01～2.00MG/ML濃度范圍內有良好的線性關系，相關系數均達到0.99以上。

圖2 乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯標準曲線

2.2 標準溶液重復性

用1.00mg/ml乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的混合標準中間溶液連續(xù)進樣6次。試驗結果見表1。結果表明：同一濃度的標準溶液有較好的重復性，其RSD%均小于5.0%。

表1 混合標準中間溶液重復性檢測 （%）

2.3 最低定量限的確定

在空白載體中分別添加乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯各100mg/kg，試驗結果見圖3和表2。結果表明：在添加量為100mg/kg時，其回收率為80%以上，而添加量為100mg/kg以上其它濃度的回收率也均在80%以上。由于該方法中采用程序升溫的色譜條件，當添加量小于100mg/kg時，其信噪比不能滿足定量的要求，所以，將該方法的最低定量限定為100mg/kg。目前市場上常見的飼料香味劑中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的配方含量在2～100g/kg之間。所以，該定量限完全可以滿足實際生產中產品含量檢測的要求。

圖3 空白載體中添加乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯100mg/kg色譜圖

表2 方法最低定量限確定的檢測結果回收率 （%）

2.4 方法的準確度和精密度的測定

在空白載體中分別添加各100mg/kg、1000mg/kg、2000mg/kg、3000mg/kg、4000mg/kg、5000mg/kg和10000mg/kg濃度的乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯，每個濃度做4次重復，分別計算回收率。試驗結果見表3。在添加不同濃度的乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯時，不同的添加濃度均可得到較高的回收率，且相對標準偏差均小于10%。

2.5 方法的適用范圍

為考察本方法的適用性，從市場上收集了3個生產廠家的6個飼料香味劑樣品，其中2個果香型，2個奶香型，但這4個樣品無具體的含量規(guī)定；另2個樣品有標簽，測定結果均大于樣品添加含量的標示量。檢測結果見表4。結果表明：不同的生產廠家、不同成分的香味劑均可用該方法檢測。

表3 空白載體中添加回收的檢測結果 （%）

表4 方法適用范圍的驗證含量 （mg/kg）

2.6 干擾試驗

為考察其它香味劑是否對該方法有干擾，分別用濃度為2.00mg/ml桃醛（丙位十一內酯）和丁位葵內酯標準溶液，在與乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯相同的提取和色譜條件下上機測定，各種香味劑的出峰時間見表5，桃醛和丁位葵內酯的圖譜見圖4和圖5。試驗顯示，乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯與桃醛和丁位葵內酯的色譜峰有很好的分離，且對其定量無影響。結果表明：桃醛和丁位葵內酯對乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的測定均無干擾。

表5 各種香味劑及出峰時間

圖4 桃醛（丙位十一內酯）圖譜

圖5 丁位葵內酯圖譜

3 結論

以上試驗結果表明：本研究建立的飼料香味劑中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯同步檢測方法，色譜條件易于掌握，儀器性能穩(wěn)定，測試數據重復性好，回收率高，精密度和準確度均能滿足分析要求，且具有較好的定量限。