吳定昌，肖 婷，黃超林

（福建醫(yī)科大學(xué)附屬龍巖第一醫(yī)院·龍巖市第一醫(yī)院1.檢驗(yàn)科；2.中心實(shí)驗(yàn)室，福建 龍巖364000）

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一種由自身免疫障礙引致免疫系統(tǒng)攻擊關(guān)節(jié)的長期慢性炎癥，在任何年齡均可發(fā)生，在我國的發(fā)病率為0.3%－0.4%［1］。雖然目前對RA病因和發(fā)病機(jī)制的了解還不完全清楚，但已發(fā)現(xiàn)在關(guān)節(jié)軟骨被破壞的過程中，由滑膜細(xì)胞和淋巴細(xì)胞合成并釋放許多細(xì)胞因子，它們可以用于對RA進(jìn)行早期診斷的分子標(biāo)志物。目前應(yīng)用于早期RA的免疫學(xué)指標(biāo)主要有類風(fēng)濕因子（RF）、抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體、抗角蛋白抗體（AKA）、葡萄糖－6－磷酸異構(gòu)酶（GPI）、白細(xì)胞介素－17（IL－17）、腫瘤壞死因子－α（TNF－α）等［2，3］。本文以RA患病組、非RA患者組以及健康對照樣本為試驗(yàn)材料，測定血清中RF和抗CCP抗體濃度，采用受試者工作特征曲線（ROC曲線）評估它們對RA疾病的臨床診斷意義。

1 資料與方法

1.1 資料

收集2008年10月－2010年3月由本院臨床確診的RA患者117例，診斷均符合1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會修訂的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］；其中男性65例，女性52例，年齡范圍為16－72歲，平均41.8±14.6歲。RA患者均排除高血壓、糖尿病、肝腎疾病、腫瘤、急性感染和其他自身免疫性疾病等。非RA患者86例，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）31例、干燥綜合征（SS）23例、強(qiáng)直性脊柱炎（AS）18例、骨關(guān)節(jié)炎（OA）14例，年齡15－74歲。選取本院健康體檢合格者91例作為健康對照組，男52例，女39例，平均年齡39.6±11.5歲。對照組與RA患者組在性別、年齡方面無顯著差異（P＞0.05）。所有受試者于研究前3個月內(nèi)均未服用過任何免疫抑制劑及激素。

1.2 檢測指標(biāo)與方法

所有患者及健康對照組均空腹抽取靜脈血5 ml，3 000 r／min離心10 min分離血清，置于－20℃冰箱保存待檢。RF采用速率散射比濁法檢測，試劑盒采用上海川翔生物科技有限公司產(chǎn)品，在用全自動生化分析儀（日立7600）上進(jìn)行，其結(jié)果＞20 U／ml定為陽性臨界值。采用德國歐蒙公司酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法進(jìn)行抗CCP抗體檢測，具體操作按試劑說明書進(jìn)行，以結(jié)果＞15 U／ml定為陽性臨界值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

各組數(shù)據(jù)均以平均數(shù)（x）±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示。用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，對各組RF、抗CCP抗體濃度及陽性率進(jìn)行F檢驗(yàn)或χ2檢驗(yàn)；用ROC曲線分析血清RF、抗CCP抗體含量在RA診斷中的敏感性、特異性、曲線下面積等指標(biāo)。

2 結(jié)果

2.1 各組血清RF、抗CCP抗體含量比較

本研究中各組血清RF和抗CCP抗體含量檢測結(jié)果見表1。RA組血清RF含量為58.81±21.76 U／ml，顯著高于非RA組（15.12±12.48 U／ml）和健康對照組（8.76±4.17 U／ml）；血清RF含量在非RA組與健康對照組間差異不顯著（P＞0.05）。血清的RF陽性率在RA組、非RA組和健康對照組中分別為78.9%、20.9%和3.3%，差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）。RA組的抗CCP抗體濃度和陽性率分別為22.47±10.55 U／ml和73.5%，均顯著高于非RA組和健康對照組（P＜0.05）。健康對照組的抗CCP抗體濃度和陽性率均顯著低于非RA組（9.41±3.80 U／ml和5.8%）。

表1 各組血清RF、抗CCP抗體濃度比較

2.2 血清RF、抗CCP抗體檢測的ROC曲線分析

依據(jù)各組血清RF和抗CCP抗體檢測結(jié)果繪制ROC曲線，見圖1；各檢測指標(biāo)曲線下面積、敏感性（%）、特異性（%）、Youden指數(shù)結(jié)果見表2。RF診斷RA的ROC曲線下面積為0.929，95%的置信區(qū)間為0.900－0.958；抗CCP抗體診斷RA的ROC曲線下面積為0.946，95%的置信區(qū)間為0.922－0.971。RF／抗CCP抗體聯(lián)合檢測診類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的ROC曲線下面積為0.969，95%的置信區(qū)間為0.955－0.984。血清RF、抗CCP抗體單項(xiàng)檢測時，RF指標(biāo)的敏感性、特異性和Youden指數(shù)分別為0.785、0.962和1.747；抗CCP抗體指標(biāo)的敏感性、特異性和 Youden指數(shù)分別為0.870、0.928和1.798。RF／抗CCP抗體2個指標(biāo)聯(lián)合檢測時，敏感性、特異性和Youden指數(shù)分別達(dá)到0.947、0.911和1.858。

3 討論

圖1 血清RF、抗CCP抗體濃度的ROC曲線

表2 血清RF、抗CCP抗體濃度檢測的敏感度、特異度和Youden指數(shù)的比較

RF是一類自身抗體，針對IgG FC片段上抗原表位的一類自身抗體，包括Ig M、Ig A、IgG、IgD、IgE五型，其中Ig M被用于各種類風(fēng)濕疾病的檢測，大約70%－80%的RA患者RF為陽性，但并不特異。1998年Schellekens與同事證實(shí)瓜氨酸殘基是RA特異的抗中間絲相關(guān)蛋白抗體識別表位的必需成分，能與人莢膜上皮細(xì)胞的核周角質(zhì)顆粒及大鼠食管上皮細(xì)胞的角質(zhì)層反應(yīng)，與他們特異性結(jié)合，從而認(rèn)為瓜氨酸是RA血清抗中間絲相關(guān)蛋白相關(guān)抗體識別的主要抗原決定簇［5］。因此與RF一樣，血清中抗CCP抗體濃度對RA具有很好的敏感性和特異性，且抗CCP抗體陽性的RA患者骨破壞較抗CCP抗體陰性者嚴(yán)重。

國霞等（2011）采用ELISA檢測RA患者血清抗CCP抗體及RF濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們在RA患者的濃度顯著高于其他風(fēng)濕性疾病組和健康對照組（P＜0.01），且在RA活動組和RA非活動組中亦有明顯差異（P＜0.01）［6］。周郁等（2011）的研究發(fā)現(xiàn)對RA的實(shí)驗(yàn)室檢測RF敏感性略高于抗CCP抗體，但特異性遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如抗CCP抗體，兩者聯(lián)合檢測其特異性提高到98%；因此，對疑似患者進(jìn)行抗CCP抗體和RF聯(lián)合檢測可大大提高早期診斷率，有利于早期治療［7］。通過比較RA患者和非RA患者血清中抗CCP抗體和RF等細(xì)胞因子的濃度差異，楊吉娟等（2009）發(fā)現(xiàn)RA組患者RF和抗CCP抗體陽性率高于非RA組患者（P＜0.05），RA組中抗CCP抗體和RF敏感性、特異性分別為76.3%和79.6%［8］。本研究發(fā)現(xiàn)RA組血清RF和抗CCP抗體濃度和陽性率均顯著高于非RA組和健康對照組（P＜0.05）；RF指標(biāo)的敏感性、特異性和Youden指數(shù)分別為0.785、0.962和1.747，敏感性較抗CCP抗體指標(biāo)低，特異性比較抗CCP抗體指標(biāo)高；但當(dāng)使用RF／抗CCP抗體2個指標(biāo)聯(lián)合檢測時，敏感性有較大提高，達(dá)到0.947，而特異 性仍然不低于0.911。

本研究通過檢測血清中RF與抗CCP抗體濃度，探討了它們作為RA臨床診斷分子標(biāo)志物的可靠性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RF與抗CCP抗體均可用于RA疾病的臨床診斷，但將RF與抗CCP抗體指標(biāo)聯(lián)合檢測具有較好的特異性，還可提高RA的檢出率。本研究結(jié)果有助于提高RA的臨床診斷，及早采取有效治療措施改善患者預(yù)后。

［1］王銀山.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2008，10（10）：131.

［2］Brennan FM，McInnes IB.Evidence that cytokines play a role in rheumatoid arthritis［J］.The Journal of Clinical Investigation，2008，118（11）：3537.

［3］Lee AN，Beck CE，Hall M.Rheumatoid factor and anti－CCP autoantibodies in rheumatoid arthritis：a review［J］.Clinical Laboratory Science，2008，21（1）：15.

［4］Arnett FC，Edworthy SM，Bloch DA，et al.The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis［J］.Arthritis ＆ Rheumatism，1988，31（3）：315.

［5］Schellekens GA，De Jong B，Van Den Hoogen F，et al.Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by rheumatoid arthritis－specific autoantibodies［J］.Journal of Clinical Investigation，1998，101（1）：273.

［6］國 霞，欒清欣，劉豐海.應(yīng)用ROC曲線評價GPI、抗CCP抗體及RF在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的診斷價值［J］.醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2011，24（1）：20.

［7］周 郁，李 力，伏建峰，等.抗環(huán)瓜氨酸肽抗體和類風(fēng)濕因子聯(lián)合檢測在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用［J］.西北國防醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（1）：58.

［8］楊吉娟，宮 怡，竺 紅.抗CCP抗體、AKA和RF聯(lián)合檢測在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的價值［J］.寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2009，31（1）：43.