朱琦，吳炳忠，沈曉霞

（1.浙江省中藥研究所有限公司，浙江 杭州 310023；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，浙江 杭州 310023）

產(chǎn)地和采收時(shí)間對(duì)梔子中梔子苷含量的影響△

朱琦1*，吳炳忠2，沈曉霞1

（1.浙江省中藥研究所有限公司，浙江 杭州 310023；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，浙江 杭州 310023）

目的：考察不同產(chǎn)地和采收時(shí)間對(duì)梔子中梔子苷含量的影響。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地、不同采集時(shí)間梔子中梔子苷含量。色譜柱：Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈－水（15∶85），流速：1.0mL·min－1，柱溫：30℃，波長(zhǎng)：238nm。結(jié)果：各產(chǎn)區(qū)同一時(shí)間采集的梔子中梔子苷含量從高到低排列：安吉＞縉云東渡＞麗水蓮都＞溫州泰順＞淳安楓樹嶺。收集樣品中梔子苷含量在9月中旬剛結(jié)果時(shí)最高。

梔子；高效液相色譜法；梔子苷；含量

梔子Gardenia jasminoidesEllis為茜草科常綠灌木，以成熟果實(shí)入藥，又稱山梔、生山梔子，屬常用中藥，在我國(guó)臨床應(yīng)用已有1 600多年歷史。《中國(guó)藥典》2010版規(guī)定梔子藥材的含量測(cè)定成分為梔子苷［1］。《中國(guó)藥典》規(guī)定梔子的采收時(shí)間是9～11月果實(shí)成熟呈黃色時(shí)，但產(chǎn)地調(diào)查發(fā)現(xiàn)9月大部分梔子均剛剛結(jié)果，梔子為青色果實(shí)，10月大部分為青色果實(shí)，小部分為半紅半青果實(shí)，11、12月為全紅成熟果實(shí)；梔子產(chǎn)區(qū)梔子采摘期均在11月左右。本文對(duì)不同產(chǎn)地、對(duì)《中國(guó)藥典》規(guī)定的不同采收期的梔子進(jìn)行了梔子苷含量的測(cè)定，綜合研究?jī)煞N因素對(duì)梔子苷含量的影響，為梔子確定適宜采收時(shí)間提供了理論依據(jù)。

1 儀器與材料

Agilent 1100高效液相色譜儀，Senco R-501旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，KQ-100DB數(shù)控超聲波清洗器，DHG-9140電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，AB 204-S電子天平；乙腈（色譜純）、甲醇（分析純）、梔子苷對(duì)照品（含量測(cè)定用，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110749-200613）；無水乙醇（分析純），95%乙醇（分析純）。

實(shí)驗(yàn)用的梔子干燥成熟果實(shí)采于安吉、縉云東渡、麗水蓮都、溫州泰順、淳安楓樹嶺，經(jīng)浙江省中藥研究所俞旭平教授鑒定為梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 收集各產(chǎn)地不同時(shí)間新鮮梔子各1kg，切片烘干后，各取100 g粉碎備用。

取藥材粉末（過四號(hào)篩）約0.1 g精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取濾液10mL，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18鍵合硅膠柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈 －水（15∶85），流速：1.0mL·min－1，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm。

2.3 繪制梔子苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取梔子苷對(duì)照品12 mg，用甲醇（色譜純）定容于100mL容量瓶中，即得120μg·mL－1得梔子苷對(duì)照品溶液，梔子苷對(duì)照品色譜圖見圖1。梔子苷在20～120μg峰面積A與其質(zhì)量M呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其回歸方程為：A＝312.2M＋17.95，r＝0.999 4，n＝6。

圖1 梔子苷對(duì)照品圖譜

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取梔子苷對(duì)照品溶液（40μg·mL－1）10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD＝1.62%，表明該方法測(cè)定梔子苷，儀器精密度符合要求。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取剛配好梔子苷對(duì)照品溶液1.5mL，24 h內(nèi)不定期測(cè)定其峰面積，結(jié)果 RSD＝1.20%（n＝7），表明梔子苷用該方法在該儀器24 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果較穩(wěn)定，符合要求。

精密吸取上述梔子苷對(duì)照品溶液10μL，每隔一定時(shí)間段測(cè)定兩次，其積分面積RSD＝2.81%（n＝3），表明梔子苷用該方法在該儀器2009-09-01～2010-05-31測(cè)定結(jié)果較穩(wěn)定，符合要求。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取縉云東渡同一批梔子藥材，分別制備6份供試品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣10μL，測(cè)得梔子苷平均含量為4.71%，RSD＝2.1%，結(jié)果表明方法重復(fù)性較好。

2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱定已知含量的縉云東渡梔子藥材粉末6份，每份0.05 g，再分別精密加入濃度為0.235 5 mg·mL－1的對(duì)照品10mL，之后分別精密加入15mL的50%甲醇。按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，取10μL在上述色譜條件下測(cè)定梔子苷的含量，結(jié)果表明該方法的回收率良好，見表1。

表1 梔子苷加樣回收率試驗(yàn)

2.8 不同產(chǎn)地及不同采集時(shí)間梔子中梔子苷含量測(cè)定

2.8.1 不同產(chǎn)地梔子藥材的梔子苷含量測(cè)定 取2009年11月14日各地采集的樣品，按上述條件測(cè)定梔子苷含量，結(jié)果見表2。按梔子藥材中梔子苷含量從高到低排序，分別為安吉、縉云、麗水、溫州泰順、淳安楓樹嶺。

表2 同一采集時(shí)間不同產(chǎn)地梔子中梔子苷含量

2.8.2 成熟期梔子的不同采收時(shí)間藥材的含量測(cè)定 結(jié)果見表3。2009年11月14日為首摘時(shí)間。由表3中可看出，成熟果實(shí)早期采摘的含量較高。

表3 不同采集時(shí)間梔子中梔子苷含量比較

2.8.3 不同成熟度梔子新鮮藥材中梔子苷含量 結(jié)果見表4?？煽闯鰲d子苷含量在梔子剛結(jié)果時(shí)較高，梔子果實(shí)由青變紅時(shí)和完全成熟時(shí)含量較低。隨著成熟度提高含量逐漸降低。

表4 不同采集時(shí)間相同產(chǎn)地梔子（鮮）中梔子苷含量（2010年）／%

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)磐安楓樹嶺、臨安於潛等地所采梔子，均采用50℃干燥8 h［2］進(jìn)行干燥。并測(cè)定梔子苷折干率，其值均在32%～40%，干燥過程對(duì)梔子苷含量未產(chǎn)生影響。

經(jīng)采集比較安吉、縉云東渡、麗水蓮都、溫州泰順、淳安楓樹嶺等地采摘期的成熟梔子，曬干后梔子中梔子苷含量均達(dá)到了《中國(guó)藥典》規(guī)定的1.8%的標(biāo)準(zhǔn)，證實(shí)其均為質(zhì)量?jī)?yōu)良的梔子藥材，其中尤以安吉產(chǎn)的梔子（干貨）中梔子苷含量最高，為6.07%，在實(shí)驗(yàn)過程收集2010年樣品（相同時(shí)間段不同產(chǎn)地的梔子）中，以9月中旬剛結(jié)果梔子中梔子苷含量最高。

本實(shí)驗(yàn)詳細(xì)研究梔子苷在果實(shí)發(fā)育過程中的累積規(guī)律，可以為梔子的采收提供更加科學(xué)的依據(jù)?！吨袊?guó)藥典》僅規(guī)定了梔子苷的含量作為有效成分的指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)所采梔子中梔子苷的含量均符合《中國(guó)藥典》規(guī)定。因此，在實(shí)際應(yīng)用中若純粹提取梔子苷，建議采摘梔子青果提取。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：231.

［2］黃銳，唐燦，姚建，等.梔子果實(shí)干燥工藝優(yōu)選研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（7）：37-39.

Influences of Different Origins and Collection Time on Content of Geniposide in Gardeniae Fructus

ZHU Qi1，SHEN Xiao-xia1WU Bing-zhong2
（1.Zhe Jiang Resrrch Institute Of Trrditiionrl Chinese Medicin Co.Ltd，Hangzhou 310023，China；2.Second Affiliated Hospital Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310023，China）

Objective：Investigate the influence of different origins and collection time on content of geniposide in Gardeniae Fructus.Methods：HPLC was used to determine content of geniposide in Gardenia from different origins and different collection time.Diamonsil C18chromatographic column（250mm ×4.6mm，5μm）was used with themobile phase being acetonitrile-water（15∶85），the column temperature being 30℃，the flow rate being 1.0mL·min－1，the detection wavelength being 238nm.Results：Geniposide contents in Gardeniae Fructus from each region at the same collection time from high to low were Anji，DongDu（JinYun），LianDu（LiShui），TaiShun（WenZhou），XiaoHeShan），F(xiàn)engShuLing.The highest content of Geniposide in Gardeniae Fructus was in themiddle of September when it is just bear fruit.

Gardenia；HPLC；Gardeniae Fructus；Content

浙江省重大科技專項(xiàng)（2009C12091）

* ［通訊作者］朱琦，Tel：（0571）85229698，E-mail：zhuqiqi1985＠yahoo.com.cn

2011-08-30）