馬雪松 鄒 兵 尹麗波 林桂梅*

（1 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110032；2 遼寧省鞍山市藥品檢驗(yàn)所，遼寧 鞍山 114006；3 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600）

枳實(shí)為蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培變種或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果[1]。枳實(shí)歷代有多種炮制方法，麩炒枳實(shí)緩和峻烈之性，以散積消痞力勝[2]。臨床多以麩炒枳實(shí)入藥，減緩破氣之功，故有必要對(duì)麩炒枳實(shí)工藝進(jìn)行優(yōu)化[3]。本試驗(yàn)以出膏率，辛弗林的含量及總黃酮含量為指標(biāo)，優(yōu)選麩炒枳實(shí)最佳炮制工藝。

1 儀器與材料

1.1 儀器

日本島津LC-20AT液相色譜儀；島津 LC-Solution工作站；METTLER AE240型十萬(wàn)分之一分析天平；FA1004B電子天平；KQ-250DB型超聲波清洗器。

1.2 材料

枳實(shí)經(jīng)鑒定為蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果；辛弗林、柚皮苷、橙皮苷對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；新橙皮苷購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，純度＞98%。色譜純甲醇、乙腈，純凈水，其它為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 辛弗林含量測(cè)定

2.1.1 對(duì)照品溶液制備

取辛弗林對(duì)照品精密稱(chēng)定，置25mL量瓶中加甲醇溶解稀釋至刻度，得0.1852 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備

精密稱(chēng)定枳實(shí)中粉1g置具塞錐形瓶中，加入甲醇100mL稱(chēng)定重量，超聲30min后補(bǔ)重，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液50mL至蒸發(fā)皿中稱(chēng)干膏重。干膏溶解后定容于10mL量瓶中，用0.45μm濾過(guò)。

2.1.3 測(cè)定條件

色譜柱：Diamonsil C18（5μm，200mm×4.6mm）；流動(dòng)相：甲醇-磷酸水溶液（0.18%磷酸，0.22%十二烷基硫酸鈉）58∶42；柱溫：40℃；流速：1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：275 nm；進(jìn)樣量：10μL。

2.1.4 方法學(xué)考察

2.1.4.1 線性范圍考察

精密吸取辛弗林對(duì)照品溶液1、2、5、10、15、20μL，進(jìn)樣，得辛弗林線性回歸方程，y＝699877x-21722，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999。表明辛弗林進(jìn)樣量在0.1852～3.704 μg線性關(guān)系良好。

2.1.4.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，RSD為1.3%，表明儀器精密度良好。

2.1.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液分別于0、1、2、4、8、24h進(jìn)樣分析，RSD為1.9%，表明穩(wěn)定性良好。

2.1.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一樣品6份，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定辛弗林平均含量為0.3662%，RSD為1.6%。

2.1.4.5 加樣回收率試驗(yàn)

加樣回收率為98.88%，RSD為2.2%。

2.2 總黃酮含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)定柚皮苷對(duì)照品置10mL量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，得0.0315 mg/mL對(duì)照品溶液。新橙皮苷及橙皮苷對(duì)照品制備方法同上，得0.0471mg/mL新橙皮苷對(duì)照品及0.0567mg/mL橙皮苷對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備

精密吸取2.1.2項(xiàng)下制得溶液2mL于100mL量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，用0.45μm濾膜濾過(guò)。

2.2.3 測(cè)定條件

色譜柱：Diamonsil C18（5μm，200mm×4.6mm）；流動(dòng)相：乙腈-水（磷酸調(diào)0.01%）20.5∶79.5；柱溫：35℃；流速：0.6 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；進(jìn)樣量：10μL。

2.2.4 方法學(xué)考察

2.2.4.1 線性范圍

分別精密吸取柚皮苷及新橙皮苷對(duì)照品1、5、10、20、50、100μL，進(jìn)樣得柚皮苷線性回歸方程，y＝2E+06x-22564，相關(guān)系數(shù)r＝0.9993，新橙皮苷線性回歸方程，y＝4E+06x+71311，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999。表明線性均良好。

精密吸取橙皮苷對(duì)照品1、2、5、10、15、20μL，進(jìn)樣得線性回歸方程，y＝2E+06x+30002，相關(guān)系數(shù)r＝0.9998。表明線性良好。

2.2.4.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液，測(cè)定柚皮苷RSD為0.8%，橙皮苷RSD為2.4%，新橙皮苷峰RSD1.8 %，結(jié)果精密度良好。

2.2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取試品溶液10μL，分別于0、1、2、4、8、24h進(jìn)樣分析，測(cè)定柚皮苷RSD為0.9%，橙皮苷RSD為1.8 %，新橙皮苷RSD為1.9 %，結(jié)果穩(wěn)定性良好。

2.2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)

經(jīng)測(cè)定樣品中柚皮苷平均含量為9.51%，RSD為1.3%；橙皮苷平均含量1. 27%，RSD為1.4 %，新橙皮苷平均含量12.34 %，RSD為1.5%。重復(fù)性良好。

2.2.4.5 加樣回收率試驗(yàn)

經(jīng)測(cè)定柚皮苷加樣回收率為99.13%，RSD為1.5%。橙皮苷加樣回收率為99.82%，RSD為0.9%。新橙皮苷加樣回收率為99.17%，RSD為1.8%。

3 麩炒工藝優(yōu)選

3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取炒制時(shí)間（A）、炒制溫度（B）、麩用量（C），三個(gè)因素，選用L9（3）4正交表，因素水平安排見(jiàn)表5，按2.1和2.2項(xiàng)下方法分別測(cè)定辛弗林、總黃酮含量以及出膏率，按加權(quán)平均法計(jì)算其綜合評(píng)分，其中辛弗林的含量、總黃酮含量以及出膏率的權(quán)重分別為0.4，0.4和0.2。

表1 因素水平表

3.2 試驗(yàn)方法

將鐵鍋加熱至所需溫度，均勻撒入定量麥麩，待煙起，投入凈枳實(shí)，適時(shí)出鍋，計(jì)算指標(biāo)的綜合評(píng)分。正交試驗(yàn)測(cè)定數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別見(jiàn)表2、表3，方差分析結(jié)果見(jiàn)表4。

表2 L9（3）4正交試驗(yàn)結(jié)果

組別 1 2 3 4 5 6 7 8 9柚皮苷(%)9.21 7.91 9.03 8.44 10.49 8.80 8.51 9.11 9.23橙皮苷(%)1.10 1.26 1.10 0.84 0.87 1.01 1.04 2.46 1.10新橙皮苷(%)12.30 12.6011.97 13.16 13.86 14.38 13.81 13.2013.56總黃酮(%)22.61 21.7722.10 22.44 25.22 24.20 23.36 24.7623.88

3.3 試驗(yàn)結(jié)果及分析

因素C對(duì)綜合評(píng)分結(jié)果有顯著影響。極差分析認(rèn)為各因素主次順序是C＞A＞B。最佳工藝條件定為A2B2C3。即每100 g藥材投麩20 g，于190-210 ℃炒制70～90s。

表3 麩炒枳實(shí)炮制正交試驗(yàn)因素水平分析

表4 方差分析表

4 討 論

枳實(shí)中黃酮類(lèi)含量約占20%，主要有橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷等[4]。本實(shí)驗(yàn)選柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷三種對(duì)照品作為黃酮指標(biāo)，對(duì)麩炒枳實(shí)工藝進(jìn)行優(yōu)選。以辛弗林含量、總黃酮含量以及出膏率作為指標(biāo)，對(duì)麩炒枳實(shí)的最佳炮制工藝進(jìn)行優(yōu)選，隨著炒制時(shí)間的增加，出膏率、辛弗林及總黃酮含量也隨之增減，當(dāng)炒制時(shí)間為70～90s時(shí)，綜合評(píng)分最優(yōu)。認(rèn)為炒制時(shí)間、麩用量和炒制溫度均為枳實(shí)中有效成分影響因素，其中炒制溫度有顯著性影響。本實(shí)驗(yàn)確立最佳工藝為進(jìn)一步探討麩炒枳實(shí)炮制作用提供了參考。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:230.

[2]賈天柱.中藥炮制學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2008:128-129.

[3]鄭虎占編著.中藥飲片應(yīng)用與標(biāo)準(zhǔn)化研究[M].北京:學(xué)苑出版社.2004:290.

[4]黃愛(ài)華,曹騁,曾元兒.藥物分析雜志[J].HPLC法測(cè)定不同規(guī)格酸橙枳實(shí)中新橙皮苷和柚皮苷的含量,2009,29(9):1448.