李曉飛，晏 容，劉 云，婁方明

(遵義醫(yī)學(xué)院， 貴州 遵義 563099)

氣質(zhì)聯(lián)用分析眼斑芫菁揮發(fā)性成分

李曉飛，晏 容，劉 云，婁方明

(遵義醫(yī)學(xué)院， 貴州 遵義 563099)

目的研究眼斑芫菁的揮發(fā)油性成分,確定揮發(fā)性成分的化學(xué)成分組成。方法采用水蒸氣蒸餾法提取眼斑芫菁的揮發(fā)性成分,并采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)其進(jìn)行分析鑒定。結(jié)果從眼斑芫菁中共檢出64種揮發(fā)性成分，其中40種物質(zhì)結(jié)構(gòu)得以鑒定，以酸類(lèi)物質(zhì)含量最多。其中相對(duì)百分含量較高的有(E)-9-十八碳烯酸(9.69%)、硬脂酸(5.01%)、1,13-十四碳(3.00%)、亞油酸(1.69%)等。結(jié)論眼斑芫菁中含有大量揮發(fā)性成分，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)能夠很好的對(duì)其分離和鑒定。

眼斑芫菁；揮發(fā)性成分；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

眼斑芫菁MylabriscichoriiLinnaeus，屬昆蟲(chóng)綱鞘翅目芫菁科(Mylabris)昆蟲(chóng)，俗稱(chēng)斑蝥、黃黑小斑蝥，是一種重要的抗癌昆蟲(chóng)藥物。長(zhǎng)江流域及以南各省區(qū)均有眼斑芫菁的生長(zhǎng)地，貴州省羅甸縣盛產(chǎn)芫菁【1,2】，包括眼斑芫菁和大斑芫菁。兩種芫菁均性辛，熱；有大毒；歸肝、胃、腎經(jīng)；具有破結(jié)攻毒，除血積、利尿的功能【3】，已經(jīng)成為抗腫瘤的重要中藥材，可治療原發(fā)性肝癌、賁門(mén)癌、喉癌、胃癌、食道癌、消化道腫瘤等癌癥【4 -7】。芫菁有特殊的氣味，含有大量揮發(fā)性物質(zhì)，聞之過(guò)久就會(huì)使人產(chǎn)生窒息之感，因此，其揮發(fā)性物質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)也有必要進(jìn)行深入的研究。而且從民間的應(yīng)用中，我們發(fā)現(xiàn)斑蝥的揮發(fā)性成分可能具有一定的藥用價(jià)值。基于此，我們對(duì)貴州產(chǎn)眼斑芫菁的揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行了氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析和鑒定,期望可以更好地利用眼斑芫菁這一特色藥用昆蟲(chóng)。

1 材料與儀器

1.1 材料 眼斑芫菁于2009年7月購(gòu)自貴州羅甸，經(jīng)筆者鑒定為眼斑芫菁MylabriscichoriiLinnaeus；分析純無(wú)水硫酸鈉；分析純正己烷。

1.2 儀器 美國(guó)Agilent公司生產(chǎn)6890-5973N氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；梅特勒-托利多公司生產(chǎn)AL204型電子天平(1/10000)；上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)DHG-9123A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱；揮發(fā)油測(cè)定器。

2 揮發(fā)油提取

將眼斑芫菁在50℃下烘干，粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩。取過(guò)篩后的樣品100 g于500 mL圓底燒瓶中，加入蒸餾水至漫過(guò)樣品并超出2～3 cm，接上揮發(fā)油測(cè)定器，參照2010版藥典一部附錄XD對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行提取，時(shí)間為3～4 h，在提取過(guò)程中預(yù)先在測(cè)定器中加入正己烷5 mL，以收集揮發(fā)性物質(zhì)從而減少揮發(fā)性物質(zhì)溶于水造成的損失。4 h后正己烷呈淡橙色，具特殊氣味。將正己烷與水分離并經(jīng)無(wú)水Na2SO4脫水干燥，得純凈的富含揮發(fā)油的正己烷提取物，轉(zhuǎn)入具塞小三角瓶中，4℃下密封保存待測(cè)。在采用GC-MS分析前以0.45 μm微孔濾膜對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾。

3 GC-MS分析

采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析所提取的揮發(fā)性成分，所得結(jié)果用峰面積歸一化法計(jì)算樣品中各組分的相對(duì)百分含量，每種物質(zhì)的結(jié)構(gòu)通過(guò)質(zhì)譜圖進(jìn)行解析，并與美國(guó)Wiley7Nist05、NIST05兩種質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算機(jī)檢索比對(duì),從而鑒定出結(jié)構(gòu)。

色譜條件：HP-5MS(5%苯取代甲基硅酮)色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；程序升溫：50 ℃保持5 min,以3 ℃·min- 1升至150 ℃，以4 ℃·min- 1升至230 ℃,保持5 min；汽化室溫度：260℃；載氣：高純 He，流速：1 mL·min- 1；進(jìn)樣量：3 μl；分流比20∶1。

質(zhì)譜條件：離子源溫度∶230 ℃；四極桿溫度∶150℃；電離方式∶EI，電子能量∶70 eV；溶劑延遲∶4 min；質(zhì)量掃描范圍m/ z ∶30～500。

譜圖積分參數(shù)：初始面積截出：15；初始峰寬：0.064；初始閥值：14.0；積分時(shí)間5～60 min。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果經(jīng)GC-MS分析，從揮發(fā)性成分所形成的總離子流圖中共發(fā)現(xiàn)有64個(gè)化合物，總離子流圖見(jiàn)圖1；其中對(duì)質(zhì)譜圖相似度大于85%的物質(zhì)進(jìn)行分析鑒定，則有40個(gè)成分得到確認(rèn)，鑒定結(jié)果(見(jiàn)表1)。

圖1 眼斑芫菁揮發(fā)性成分總離子流圖

表1 眼斑芫菁揮發(fā)性成分的GC-MS 分析結(jié)果

5 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，眼斑芫菁的揮發(fā)性成分組成還是非常豐富，其總離子流圖譜組成復(fù)雜，有眾多微量小峰還無(wú)法得以確證。鑒定的40種化合物的相對(duì)百分含量總和僅占檢出成33.53%，鑒定個(gè)數(shù)也只占62.5%，表明仍有大量的微量成分僅僅通過(guò)質(zhì)譜還無(wú)法分析出來(lái)。在所鑒定成分中，以酸類(lèi)物質(zhì)含量最多。其中相對(duì)百分含量較高的(E)-9-十八碳烯酸(9.69%)、硬脂酸(5.01%)、1,13-十四碳(3.00%)、二烯亞油酸(1.69%)等。在下一步研究中，我們將考察從眼斑芫菁中提取的揮發(fā)性物質(zhì)是否具有抗癌活性，并尋找出相應(yīng)的活性物質(zhì)。GC-MS聯(lián)用技術(shù)廣泛用于動(dòng)、植物揮發(fā)油、精油及低極性化合物的分析，用本法分析眼斑芫菁的揮發(fā)性成分，快速且全面，非常有效。通過(guò)對(duì)眼斑芫菁揮發(fā)性成分的分析鑒定及含量測(cè)定,為綜合開(kāi)發(fā)利用該藥用資源提供了科學(xué)的依據(jù)。

【1】 孫國(guó)祥，雒翠霞，王真.斑蝥HPLC數(shù)字化指紋圖譜研究【J】.藥物分析雜志,2008,28(7):1031-1036.

【2】 高陽(yáng),于治國(guó),畢開(kāi)順.斑蝥藥材指紋圖譜分析方法研究【J】.中成藥,2005,27(1):4-6.

【3】 中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部【S】.2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.233.

【4】 金偉,王亞威,周宗祥,等.斑蝥素對(duì)HL260 細(xì)胞和QGY7703 細(xì)胞的作用研究【J】.中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2001,29(4):42-43

【5】 李曉飛,侯曉暉,陳祥盛.芫菁斑蝥素對(duì)喉癌細(xì)胞和胃癌細(xì)胞的抑制作用【J】.昆蟲(chóng)學(xué)報(bào),2009,52(9):946-951.

【6】 安中原,王正,趙越.斑蝥素及其衍生物的抗腫瘤研究進(jìn)展【J】.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2009，5(1)：128-130.

【7】 李麗娜,南克俊,張茜.復(fù)方斑蝥注射液聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞增殖與凋亡的影響【J】.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2011,19(3):438-440.

AnalysisofvolatilecomponentsfromMylabriscichoriiLinnaeusby GC-MS

Lixiaofei,Yanrong,Liuyun,Loufangming

(Zunyi Medical College,Guizhou Zunyi 563099,China)

ObjectiveTo study the volatile components fromMylabriscichoriiLinnaeusand further determine the chemical structure of these components.MethodsVolatile components were extracted by steam distillation and the chemical structure was analyzed by GC-MS.ResultsSixty-four volatile components were detected by GC-MS,in which 40 components were identified.The main constituents of 40 components were (E)-9-Octadecenoic acid (9.69%),Octadecanoic acid (5.01%),1,13-Tetradecadiene (3.00%) and 9,12-Octadecadienoic acid (1.69%).ConclusionMylabriscichoriiLinnaeuscontains plenty of volatile components and GC-MS could be well used to isolate and identify the volatile components.

MylabriscichoriiLinnaeus;volatile components;GC-MS

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(NO：81260488)；貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長(zhǎng)資金項(xiàng)目(NO：黔省專(zhuān)合字【2010】48)；貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開(kāi)發(fā)專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目(NO：黔科合社字【2009】5042)；貴州省科技廳項(xiàng)目(NO：黔科合J字LKZ【2011】01)；貴州省中藥現(xiàn)代化項(xiàng)目(NO:黔科合ZY字【2012】3009)。

婁方明，男，副教授，研究方向：中藥成分分析，E-mail:Lousen1977@126.com。

S899.9

A

1000-2715(2012)05-0375-04

【收稿2012-07-27；修回2012-09-29】

(編輯：譚秀榮)