黎增強(qiáng)，左衛(wèi)東，張 付，李冬日，王慧君

（1.廣州市公安局荔灣區(qū)分局，廣東 廣州 510140；2.中山市公安局阜沙分局，廣東 中山 528434；3.南方醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)系，廣東 廣州 510515）

死亡時間推斷研究進(jìn)展

黎增強(qiáng)1，左衛(wèi)東2，張 付3，李冬日3，王慧君3

（1.廣州市公安局荔灣區(qū)分局，廣東 廣州 510140；2.中山市公安局阜沙分局，廣東 中山 528434；3.南方醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)系，廣東 廣州 510515）

死亡時間（postmortem interval，PMI）推斷始終是法醫(yī)實(shí)踐工作的重點(diǎn)和難點(diǎn)。本文從傳統(tǒng)死亡時間推斷方法、機(jī)體死后核酸和組織降解、玻璃體液成分變化、組織生化等方面，對2002年以后各種死亡時間推斷方法的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行介紹和比較，以期對法醫(yī)學(xué)死亡時間推斷研究提供新的思路。

法醫(yī)病理學(xué)；死亡時間；綜述[文獻(xiàn)類型]

死亡時間在法醫(yī)學(xué)中又稱死后間隔時間。死亡時間的準(zhǔn)確有效推斷，是法醫(yī)學(xué)實(shí)踐工作中最核心的任務(wù)之一。傳統(tǒng)方法主要根據(jù)尸體現(xiàn)象、組織超生反應(yīng)、胃內(nèi)容物消化程度、昆蟲生長規(guī)律等對死亡時間進(jìn)行推斷。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的不斷深入和檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步，一些全新的死亡時間推斷方法逐漸被引入法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，如遺傳物質(zhì)含量變化、玻璃體液成分分析、組織生物化學(xué)變化、腐敗降解規(guī)律等，對傳統(tǒng)方法起到了有效的輔助和補(bǔ)充作用。本文對2002年后死亡時間推斷方法的研究和發(fā)展進(jìn)行綜述。

1 傳統(tǒng)死亡時間推斷方法

1.1 尸溫

尸溫作為經(jīng)典的死亡時間推斷方法已有上百年歷史，操作簡便快捷、成本低廉、結(jié)果相對可靠，至今仍然在法醫(yī)實(shí)踐工作中發(fā)揮著不可替代的作用。但是，尸溫變化受季節(jié)變化、環(huán)境溫度、尸體衣著、肥胖程度等諸多因素影響，并且在不同地區(qū)、不同緯度間存在一定差異，因此仍有相關(guān)研究不斷對其進(jìn)行歸納和完善。

直腸是經(jīng)典的尸溫測量部位，Honjyo等[1]通過對肛溫和其他5個部位的尸溫進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，從理論上證實(shí)了操作簡便的直腸尸溫是實(shí)踐工作的首選。另有學(xué)者認(rèn)為顱內(nèi)腦組織溫度下降的規(guī)律性較好，可通過測量顱腔和鼓室溫度變化進(jìn)行溺死等情況的死亡時間推斷[2]。同時，尸溫測量方法也得到了更新，紅外線法應(yīng)用于測量尸體鼓室溫度，可避免溫度計測量鼓室溫度時造成耳膜損傷和出血等弊端[3]。

1.2 超生反應(yīng)

超生反應(yīng)是指個體死亡后的一定時期內(nèi)，組織器官對物理和化學(xué)刺激做出功能以及形態(tài)上的反應(yīng)。死后骨骼肌的興奮性不斷下降，根據(jù)骨骼肌對機(jī)械刺激和電刺激的興奮性推斷死亡時間一直是研究的熱點(diǎn)。Elmas等[4]根據(jù)死因?qū)⒋笫蠓譃橹舷ⅰ⒓毙允а?、慢性失?組，通過比較腓腸肌電刺激興奮性，發(fā)現(xiàn)起始潛伏期這一指標(biāo)在3組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，據(jù)此認(rèn)為該指標(biāo)可作為推斷死亡時間的依據(jù)。

1.3 尸僵

常溫下尸僵規(guī)律已經(jīng)有了比較系統(tǒng)的研究和總結(jié)，而低溫條件下的尸僵情況仍處于探索階段。Varetto等[5]在4℃條件下對146例人尸體膝關(guān)節(jié)的尸僵進(jìn)行了詳細(xì)觀察，發(fā)現(xiàn)10 d內(nèi)全部尸體的尸僵處于高峰狀態(tài)，11～17d開始由完全尸僵轉(zhuǎn)為部分尸僵，17d后逐漸緩解并消失。該研究為高寒地區(qū)或低溫冷凍尸體的死亡時間推斷提出了一個新的方法。

1.4 尸斑

死后由于血液淤滯，血液在重力作用下向低處體表分布而產(chǎn)生尸斑，影響尸斑色澤的主要因素為血紅蛋白和黑色素。有研究[6]通過分光光度計對尸斑的色度、色澤等指標(biāo)進(jìn)行定量分析，結(jié)果表明死后72h內(nèi)尸斑變化與死亡時間具有較好相關(guān)性，這種對死后早期尸體現(xiàn)象進(jìn)行量化分析的方法為死亡時間推斷提供了新的思路。

2 核酸成分降解推斷死亡時間

隨著法醫(yī)實(shí)踐工作對死亡時間推斷精確性的要求不斷提高，僅僅靠傳統(tǒng)的大體和組織學(xué)方法已經(jīng)無法滿足需要，因此越來越多的法醫(yī)學(xué)者開始采用分子生物學(xué)方法推斷死亡時間。死后在自溶作用影響下組織細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA成分逐漸發(fā)生分解，大量研究表明機(jī)體的同種細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)含量相對恒定，因此核酸成分降解過程隨死亡時間延長表現(xiàn)出一定的相關(guān)性，可用于死亡時間推斷。

2.1 死后DNA含量變化

DNA主要分布于細(xì)胞核內(nèi)染色體，機(jī)體死亡后細(xì)胞核發(fā)生核固縮、核碎裂、核溶解，DNA逐漸被分解為單鏈和小片段，含量逐漸減少消失。目前檢測組織細(xì)胞DNA含量的技術(shù)主要有DNA組織化學(xué)測定技術(shù)、計算機(jī)圖像分析技術(shù)（image analysis technology，IAT）、流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）等。由于各種組織器官所處環(huán)境不同，細(xì)胞內(nèi)DNA穩(wěn)定性和降解規(guī)律不盡相同，因此找到降解緩慢、與死亡時間相關(guān)性好的組織DNA和精確便捷的檢測技術(shù)成為了法醫(yī)學(xué)者的研究重點(diǎn)。

肌肉組織自溶相對緩慢、取材方便，肝細(xì)胞內(nèi)DNA含量豐富，而脾主要成分為二倍體淋巴細(xì)胞，胞核DNA降解緩慢，均適合于死亡時間推斷。相關(guān)研究[7-16]表明，組織細(xì)胞內(nèi)DNA相關(guān)性較好但穩(wěn)定性不高，3～4d內(nèi)基本完全降解。但有學(xué)者[17-18]發(fā)現(xiàn)牙髓和骨髓在外周致密組織的保護(hù)下，內(nèi)部的DNA降解緩慢，可用于研究腐敗尸體和較長死亡時間的推斷，但目前相關(guān)研究主要采用離體組織，其實(shí)際應(yīng)用價值仍需進(jìn)一步證實(shí)。相關(guān)研究見表1。

表1 動物和人部分組織器官細(xì)胞核DNA降解與死亡時間相關(guān)性

2.2 死后RNA含量變化

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為RNA在死后易于分解，因此不適合用于死亡時間推斷及腐敗尸體的研究。但目前有學(xué)者認(rèn)為，某些類型的RNA在特定條件下（如低溫）仍可在死后較長時間內(nèi)保持穩(wěn)定。Bauer等[19]采用熒光毛細(xì)管RT-PCR技術(shù)在4℃下對離體人血液和人尸體腦組織中mRNA成分進(jìn)行定量分析，實(shí)驗(yàn)表明人體血液樣本中mRNA含量于3d內(nèi)平穩(wěn)下降（r=0.843），而腦組織mRNA降解可延至死后6 d（r=0.791）。此外，大量動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)肺、腦、脾、骨骼肌、腎、視網(wǎng)膜等mRNA含量隨死亡時間延長而規(guī)律性降解，最長可推斷死后14d內(nèi)的死亡時間。

研究表明可以通過測定某些管家基因mRNA含量的時序性降解規(guī)律推斷死亡時間，其中甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）mRNA在大鼠死后腦組織中多位點(diǎn)降解與死亡時間具有較好相關(guān)性，6個位點(diǎn)在20℃條件下死后12d內(nèi)呈規(guī)律性降解（R2=0.956～0.980）[20]。

2.3 優(yōu)勢和局限性

由于DNA具有較好的穩(wěn)定性和精確的定量方法（如FCM），因此普遍認(rèn)為較適合用于死亡時間推斷，相關(guān)研究也更加全面、深入，并涉及多種人體組織和器官。而RNA因穩(wěn)定性差、組織差異性大，相關(guān)研究仍處于初步探索階段。但腦組織中RNA顯示出較好的穩(wěn)定性，可能成為今后研究的重點(diǎn)。

核酸在死后受酶解作用而逐漸分解，影響此過程的因素很多，如溫度、濕度、環(huán)境情況等，因此通過核酸分解推斷死亡時間需對各種因素進(jìn)行綜合分析。

3 組織腐敗降解推斷死亡時間

蛋白質(zhì)約占人體質(zhì)量的20%，是形成人體細(xì)胞、組織和器官的基礎(chǔ)。死后在多種蛋白水解酶和腐敗菌的作用下，機(jī)體蛋白質(zhì)成分逐漸分解成為氨基酸和小分子含氮物質(zhì)。通過免疫印跡、免疫組化法結(jié)合圖像分析技術(shù)對死后蛋白質(zhì)含量進(jìn)行半定量測定，可擬合出蛋白質(zhì)與死亡時間關(guān)系曲線，對死亡時間進(jìn)行有效推斷。目前相關(guān)研究涉及多種組織器官，獲得了大量死后蛋白質(zhì)降解規(guī)律（表2）。

表2 動物和人部分組織器官蛋白質(zhì)降解與死亡時間相關(guān)性

蛋白質(zhì)降解規(guī)律與核酸相似，曲線呈直線型或拋物線形變化。某些蛋白成分性質(zhì)穩(wěn)定，降解過程相對緩慢平穩(wěn)，與死亡時間相關(guān)性好，如肝肌動蛋白、微管蛋白和甲狀腺球蛋白等。但是蛋白質(zhì)的降解過程同樣受到環(huán)境溫度和腐敗菌等條件影響，其實(shí)際應(yīng)用價值仍有待進(jìn)一步深入研究。

4 玻璃體液成分變化

玻璃體液在法醫(yī)學(xué)的應(yīng)用已有幾十年歷史，死亡時間推斷是其中最主要的作用之一。玻璃體液中99%為水分，含有20多種微量的離子成分和部分血清小分子物質(zhì)。傳統(tǒng)方法主要通過生化分析儀對死后玻璃體液中各種微量成分進(jìn)行定量分析，研究濃度變化與死亡時間之間的相關(guān)性。

4.1 離子成分

以往研究證實(shí)，離子成分中[K+]濃度與死亡時間的相關(guān)性最好。有學(xué)者對家兔玻璃體液中21種離子進(jìn)行了對比研究，發(fā)現(xiàn)13種離子與死亡時間具有相關(guān)性，其中[K+]的相關(guān)性最好（R2=0.9827）[27]。人體玻璃體液表現(xiàn)出類似規(guī)律，其中11種離子隨死亡時間呈規(guī)律性變化，[K+]在死后72h內(nèi)與死亡時間相關(guān)性最佳[28-29]。

4.2 酶、核酸和蛋白質(zhì)成分

玻璃體液中某些酶的濃度死后表現(xiàn)出規(guī)律性降低，如羥丁酸脫氫酶、膽堿酯酶、乳酸脫氫酶，相關(guān)系數(shù)約為0.985[30]。玻璃體液中存在少量細(xì)胞成分，因此胞核溶解產(chǎn)生的核酸降解產(chǎn)物，如次黃嘌呤[Hx]等，在死后持續(xù)升高[31]。與組織蛋白降解類似，死后玻璃體液中蛋白成分不斷分解，某些小分子代謝產(chǎn)物如天冬氨酸、谷氨酸和?；撬岬入S死亡時間延長而持續(xù)升高，具有較好的相關(guān)性[32]。

4.3 統(tǒng)計方法的改進(jìn)

Mu?oz等[33-34]對傳統(tǒng)的[K+]及[Hx]與死亡時間回歸方程進(jìn)行了全新的統(tǒng)計擬合，將死亡時間作為自變量，并將[K+]和[Hx]作為因變量，經(jīng)回歸分析發(fā)現(xiàn)新的方程表現(xiàn)出了更好的相關(guān)性。但此種統(tǒng)計方法的適用范圍和實(shí)際應(yīng)用價值仍需進(jìn)一步的研究。

5 組織生化

機(jī)體死亡后組織中的各種化學(xué)物質(zhì)功能停止、生物活性消失、濃度逐漸降低，通過生化物質(zhì)含量變化進(jìn)行死亡時間推斷是法醫(yī)病理學(xué)的重要研究方向。

質(zhì)子磁共振波譜（1H-MRS）技術(shù)可利用磁共振和化學(xué)位移作用對一系列原子和化合物進(jìn)行分析和測定，是一種不破壞組織的無創(chuàng)檢查。Banaschak等[35]采用1H-MRS技術(shù)對死后豬的大腦代謝分解產(chǎn)物進(jìn)行研究，結(jié)果顯示3周內(nèi)顱內(nèi)某些成分含量持續(xù)降低至消失，如N-乙酰天門冬氨酸（N-acetylaspartate，NAA）、肌酸（creatine，Cr）、乳酸鹽；而某些成分含量持續(xù)增加，如血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme，ACE）。對家兔死后腦組織的研究發(fā)現(xiàn)，24h內(nèi)腦組織中NAA和Cr峰下面積隨死亡時間延長而減少，NAA與Cr含量比值、膽固醇與Cr含量比值隨死亡時間的延長而降低[36]。但該方法仍處于探索階段，受溫度、濕度、腐敗菌等條件影響，并且顱內(nèi)出現(xiàn)的腐敗氣泡會影響儀器檢測結(jié)果。

肝、脾、腎等組織負(fù)責(zé)多種激素成分的代謝任務(wù)。研究發(fā)現(xiàn)大鼠肝、脾中內(nèi)皮素、血栓素、皮質(zhì)醇含量[37]以及腎上腺素含量在死后規(guī)律性降低。

肌肉組織是能量代謝的重要器官，死后ATP和糖原等能量物質(zhì)的降解程度可用于推斷死亡時間。動物實(shí)驗(yàn)[38]證實(shí)大鼠死后24 h內(nèi)心肌、骨骼肌中ATP含量及腓腸肌的糖原含量規(guī)律性減少。同時，骨骼肌pH值規(guī)律性下降[39]。

體液生化成分的變化規(guī)律也是研究死亡時間的方法之一。血液中含有大量離子和小分子物質(zhì)，有研究發(fā)現(xiàn)死后氯化物、鉀、鈉與死亡時間之間存在較好的雙對數(shù)關(guān)系[40]。腦脊液成分復(fù)雜，死后人體腦脊液中14種蛋白成分呈規(guī)律性升高[41]。此外，有研究[42]證實(shí)尿液中的血管性假血友病因子（von Willebrand factor，vWF）含量隨死亡時間延長而規(guī)律性升高，并且與死亡原因無相關(guān)性。

6 其他方法

死亡時間推斷需要對尸體死后狀態(tài)進(jìn)行多方面的分析和研究，一些死后的特殊變化以及某些生理指標(biāo)可以起到有效的輔助作用。越來越多的研究表明，死后的電阻抗[43-44]、腐敗氣體壓力[45]、腐敗微生物ATP含量[46]、組織生物力學(xué)[47]和眼內(nèi)壓[48]等指標(biāo)可為死亡時間推斷提供有力的支持。

7 展 望

本文總結(jié)了2002年以來死亡時間推斷相關(guān)研究，死亡時間推斷法的多樣性從另一方面也說明了這一問題的復(fù)雜性和判斷的困難程度。首先，機(jī)體死后受多種因素影響，如溫度、環(huán)境、氣候、尸體狀況、衣著、腐敗細(xì)菌和昆蟲等。這就要求在未來研究死亡時間的過程中不能僅局限于某種指標(biāo)的變化，而應(yīng)該同時導(dǎo)入多種參數(shù)進(jìn)行綜合分析，尤其有必要將溫度等環(huán)境因素納入統(tǒng)計方程之中。其次，應(yīng)明確死亡原因，排除不同死因?qū)λ劳鰰r間推斷方式產(chǎn)生的影響。

法醫(yī)學(xué)是一門實(shí)踐性的學(xué)科，任何一種新的推斷方法不能僅僅停留在實(shí)驗(yàn)室和統(tǒng)計學(xué)的數(shù)據(jù)之中，必須符合法醫(yī)學(xué)實(shí)踐工作的要求。相信隨著法醫(yī)工作者的不斷努力和研究工作的深入開展，死亡時間推斷研究將會取得進(jìn)一步的突破。

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2011-02-21）

（本文編輯：張建華）

Latest Progress in Postmortem Interval Estimation

LI Zeng-qiang1,ZUO Wei-dong2,ZHANG Fu3,LI Dong-ri3,WANG Hui-jun3
（1.Liwan Branch of Guangzhou Public Security Bureau,Guangzhou 510140,China;2.Fusha Branch of Zhongshan Public Security Bureau,Zhongshan 528434,China;3.Department of Forensic Medicine,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China）

Accurate estimation of the postmortem interval（PMI）has been one of the most important and complicated issues in the forensic practice.In order to provide novel perspectives for the future research concerning PMI,the advantages and disadvantages of related traditional methods,postmortem degradation of nucleic acid and tissue,the componential change of vitreous humor and histological biochemistry since 2002 have been introduced and compared in this review.

forensic pathology;postmortem interval;review[publication type]

DF795.1

A

10.3969/j.issn.1004-5619.2012.04.012

1004-5619（2012）04-0287-06

黎增強(qiáng)（1976—），男，福建長汀人，副主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)病理學(xué)工作；E-mail：lzqwlzqw@tom.com

王慧君，女，教授，博士研究生導(dǎo)師，主要從事法醫(yī)病理學(xué)、法醫(yī)毒理學(xué)研究；E-mail：hjwang@fimmu.com