姚文冰

廣西北海食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 北海 536000

HPLC法測定雙黃連注射液中木犀草苷的含量

姚文冰

廣西北海食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 北海 536000

目的:建立高效液相色譜法同時(shí)測定雙黃連注射液中木犀草苷含量的方法。方法:采用高效液相色譜法。色譜柱為Agilent ZORBAX SB－phenyl(4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈(A)—0.5%冰醋酸(B)(A+B=100%)作梯度洗脫，流速:0.8 ml*min－1，檢測波長為350nm，柱溫為室溫，供試品進(jìn)樣量30μL、對照品進(jìn)樣量10μL。結(jié)果:木犀草苷的進(jìn)樣量在0.82～4.91μg(r=0.9999)范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系;平均回收率為103.31%，RSD為1.87%(n=6)。結(jié)論:表明該方法簡單、快速、準(zhǔn)確，可用于雙黃連注射液的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法雙黃連注射液;木犀草苷

雙黃連注射液是由金銀花、黃芩、連翹三味藥材經(jīng)提取加工而成復(fù)方制劑，具有清熱解毒，清宣風(fēng)熱。用于外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽痛。適用于病毒及細(xì)菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃體炎、咽炎等。目前，雙黃連注射液收載于《衛(wèi)生部中藥成方制劑》，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只收載了黃芩苷的含量測定方法，未見金銀花的含量測定方法，因此本文通過系統(tǒng)摸索，增加了高效液相色譜法測定雙黃連注射液中木犀草苷指標(biāo)性成分的含量。本方法準(zhǔn)確、可靠，有效用于雙黃連注射液的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1200 型高效液相色譜儀(美國Agi lent公司);CP225D型電子天平(德國賽多利斯公司);AW－120型電子天平(西班牙COBOS公司)。

木犀草苷對照品(中國藥品生物制品檢定所;批號為110795－200806);雙黃連注射液(湖北香連藥業(yè)有限責(zé)任公司，編號:1、2、3);乙腈為色譜純，其它試劑為分析純，水為超純水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Agilent ZORBAX SB－phenyl(4.6mm×250mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈(A)—0.5%冰醋酸(B)(A+B=100%)作梯度洗脫，t=0→30min，A:10%→70%;t=30→40min，A:70%→30%;t=40→45min，A:30%→10%。檢測波長:350nm;流速:0.8 ml*min－1;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:供試品30?L、對照品10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液配制

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12h以上的木犀草苷對照品適量，加入50%甲醇制成每1mL含木犀草苷40μg對照品溶液，作為對照品儲(chǔ)備液。

2.2.2 供試品溶液配制

精密量取本品20ml，置水浴上濃縮至約1ml，加中性氧化鋁2g，攪拌混勻后，至中性氧化鋁柱(粒度量100～200目)，5g，內(nèi)徑1cm)上，用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇適量，溫?zé)崾谷芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，制得供試品溶液(1)。該法制備的供試品溶液所得的峰形、出峰時(shí)間及分離都可達(dá)到較好效果。

2.2.3 陰性樣品溶液配制

取不含金銀花的陰性樣品，采用供試品溶液制備方法(2.2.2)制備陰性樣品溶液，進(jìn)樣分析。

2.3 專屬性考察

分別吸取木犀草苷對照品溶液10μL、供試品溶液、陰性樣品溶液各30μL進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測。結(jié)果供試品溶液中木犀草苷與雜峰完全分離，陰性樣品溶液無干擾。譜圖見圖1、2、3。

2.4 線性關(guān)系考察

分別取“2.2.1”的木犀草苷對照品溶液，加50%甲醇制成每1mL含木犀草苷0.16μg對照品溶液，作為系列濃度的對照品溶液。依次自動(dòng)進(jìn)樣5、10、15、20、25、30μL，記錄色譜圖。以對照品進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得到結(jié)果見表1，結(jié)果表明，各組分在表1濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。

表1 木犀草苷的線性與范圍

2.5 精密度考察

精密吸取對“2.2.1”的木犀草苷對照品溶液各10uL，在相同的色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，分別測定峰面積的積分值。木犀草苷的RSD分別為0.32%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，于室溫下0、2、4、6、8、12、24h分別按上述色譜條件測定，得到木犀草苷的RSD分別為0.86%(n=6)，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品(編號:3)共6份，，按供試品溶液制備方法平行制備溶液并測定，木犀草苷的平均含量2.80μg*ml－1，RSD分別為1.87%(n=6)，表明分析方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品(編號:3)10ml，分別精密加入一定量的木犀草苷對照品，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表2，木犀草苷的平均回收率為103.31%，RSD分別為1.87%(n=6)。

表2 加樣回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

2.9 樣品含量測定

取3批雙黃連注射液，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按最佳色譜條件測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果

3 結(jié)論

通過對雙黃連注射液中的木犀草苷含量的連續(xù)測定的色譜條件的摸索和陰性溶液干擾試驗(yàn)、樣品穩(wěn)定性、精密度及回收實(shí)驗(yàn)的研究，表明該方法可行，可用于雙黃連注射液中木犀草苷含量的分析。

［1］ 國家藥典委員會(huì)編．中華人民共和國藥典(一部)［S］．2010年版．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:611．

Determination of luteolin in Shuanghuanglian injection by HPLC

YAO Wen－bing
Guangxi Beihai Institute for Food and Drug Control，Beihai 536000，China

OBJECTIVE:To establish a HPLC method for the content determination of luteolin in Shuanghuanglian injection.METHODS:HPLC method was adopted.Agilent ZORBAX SB－phenyl(4.6mm×250mm，5μm)column was used.Acetonitrile－0.5%acetic acid was used as mobile phase at the flow rate of 0.8 ml*min－1，and the detection wavelength was set at 350 nm.colum temperature for room temperature，for try products into sample volume 30μL，and controlled products into sample volume 10μL.RESULTS:The linear ranges of luteolin was 0.82～4.91μg(R=0.9999)respectively.The average recoverie was 103.31%，RSD=1.87%，(n=6)，respectively.CONCLUSION:The method is simple，rapid and accurate，which can be used for quality control of Shuanghuanglian injection.

High performance liquid chromatography;Shuanghuanglian injection;luteolin

R927.2

A

1007－8517(2012)15－0046－02

2012.05.27)