馮建忠 惠慧

兩種不同方法測定注射用阿魏酸鈉的含量

馮建忠 惠慧

目的 比較注射用阿魏酸鈉含量的兩種不同測定方法。方法 分別采用紫外分光光度(UV)法及高效液相色譜(HPLC)測定。UV法采用純化水為溶劑，310 nm為測定波長;HPLC法采用Waters XTerra RP18(4.6 mm ×250 mm，5 μm) 色譜柱，流動相為甲醇-水(62∶38)，流速為1 ml/min，檢測波長為310 nm。結(jié)果 UV法中阿魏酸鈉在6.216～14.504 μg/ml范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈良好線性關(guān)系(r=0.999 9)，平均回收率99.71%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.92%。HPLC法中阿魏酸鈉在44.08～220.4 μg/min范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9997)，平均回收率98.79%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.61%。結(jié)論 兩種方法含量測定結(jié)果無明顯差異，均可作為注射用阿魏酸鈉含量測定的方法，可將UV法用于制劑半成品含量控制，而將HPLC法用于成品的含量控制，可縮短檢驗(yàn)時間，保證制劑質(zhì)量。

注射用阿魏酸鈉;紫外分光光度法;高效液相色譜法;含量測定

阿魏酸鈉是阿魏酸(4-羥基-3-甲氧基肉桂酸)的鈉鹽，阿魏酸普遍存在于當(dāng)歸、川芎等中藥材中，是一種血管內(nèi)皮保護(hù)劑，能拮抗內(nèi)皮素引起的血管收縮及升壓、減輕血管內(nèi)皮損傷、松弛血管平滑肌、抑制血小板聚集。臨床主要用于動脈粥樣硬化、冠心病、腦血管病、糖尿病性血管病變等血管性病癥的輔助治療［1-2］，亦可用于偏頭疼、血管性頭痛的治療。目前，在2010版藥典中采用高氯酸滴定法進(jìn)行注射用阿魏酸鈉含量測定［3］，筆者采用紫外分光光度法及高效液相色譜法，測定其含量，兩法可較好地排除干擾，獲得滿意的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

美國Waters高效液相色譜儀(包括1525二元高壓梯度泵、717自動進(jìn)樣器、2487雙波長紫外檢測器、Empower操作平臺);UV-2401PC(日本島津公司);FA1004B型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。注射用阿魏酸鈉(規(guī)格：0.3 g，批號：0911207，山東羅欣藥業(yè)股份有限公司);阿魏酸鈉對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：773-9405，純度為99.9%);甲醇(色譜純);水為純化水;其他試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 紫外-可見分光光度法測定

1.2.1.1 貯備液的制備院 精密稱取阿魏酸鈉25 mg，置于50 ml量瓶中，用純化水稀釋至刻度，搖勻，配制成518 μg/ml的貯備液。

1.2.1.2 測定波長的選擇 取貯備液適量，用純化水配制成濃度為10 μg/ml的溶液，用純化水作空白對照，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示，阿魏酸鈉在310 nm波長處有最大吸收，故選擇310 nm為測定波長［4］。

1.2.1.3 線性關(guān)系考察 精密量取含阿魏酸鈉518 μg/ml的貯備液 300、400、500、600、700 μl，分別置于 25 ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度分別為6.216、8.288、10.360、12.432、14.504 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，將配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液以純化水為空白對照，在310 nm波長處測定吸光度，以吸光度(A)對濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：C=19.432A-0.0399(r=0.9999)。結(jié)果顯示，阿魏酸鈉濃度在6.216～14.504 μg/ml范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈良好線性關(guān)系。

1.2.1.4 回收率試驗(yàn) 精密稱取阿魏酸鈉12 mg，以純化水溶解配制成濃度為 9.624、12.030、14.436 μg/ml的溶液，每個濃度各配制3份，在310 nm處分別測定吸光度A值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計算回收率，平均回收率為99.71%、RSD為0.92%。

1.2.1.5 精密度試驗(yàn) 取2.3項(xiàng)下高、中、低三個濃度的溶液3組，每組3份，每日連續(xù)測定5次，連續(xù)測定3 d，在310nm處分別測定吸光度A值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計算含量，日內(nèi)，日間平均RSD值分別為0.3%、0.43%。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液(批號0911207)，于制備后0、2、4、6、8、12 h，按含量測定方法操作分別測定其吸收度，RSD為1.05%，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.2.2 高效液相色譜法測定

1.2.2.1 色譜條件 色譜柱：XTerra RP18(250 mm×4.6 mm，5 μm); 流動相：甲醇-水(62∶38)，使用前 0.45 μm 的濾膜抽濾，超聲脫氣;流速為1.0 ml/min;檢測波長310 nm，靈敏度 2.000 AUFS，柱溫 30 ℃，進(jìn)樣量 20 μl。

1.2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸鈉對照品25 mg，置50 ml容量瓶中，用流動相定容到50 ml，搖勻，得含阿魏酸鈉對照品504 μg/ml的儲備液。

1.2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取注射用阿魏酸鈉25 mg，置50 ml容量瓶中，用流動相定容到50 ml，搖勻，超聲脫氣10 min，用0.45 μm微孔濾膜過濾，制成含量為518 μg/ml的測試樣品溶液。

1.2.2.4 專屬性試驗(yàn) 分別取上述對照品和供試品溶液200 μl置于10 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，按“1.2.2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣20 μl，記錄色譜圖。由圖可見，在該色譜條件下，阿魏酸鈉能達(dá)到基線分離，且峰形穩(wěn)定，保留時間約4.52 min，塔板數(shù)大于3 000。同樣稀釋做空白對照試驗(yàn)，結(jié)果表明，輔料對測定阿魏酸鈉含量無干擾。

1.2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取對照品溶液100、150、200、250、300 μl，分別置于 10 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得濃度分別為 5.04、7.56、10.08、12.60、15.12 μg/ml的溶液，分別進(jìn)樣20 μl，重復(fù)5次，以峰面積(A)對濃度(C，μg/ml)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：A=62443C+33860(r=0.9997)。結(jié)果顯示，阿魏酸鈉濃度在44.08～220.4 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.2.6 回收率試驗(yàn) 精密量取阿魏酸鈉對照品儲備液適量，用流動相稀釋配制成濃度為 9.792、12.240、14.688 μg/ml的溶液，每個濃度各配制3份，在上述色譜條件下進(jìn)行操作，分別進(jìn)樣20 μl，將峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，以測得量與加入量比值計算回收率。平均回收率為98.79%，RSD為1.61%。

1.2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.5項(xiàng)下制備的濃度為10.08 μg/ml的溶液，放置 0、2、4、6、8、10 h 后，按上述色譜條件進(jìn)樣20 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，按阿魏酸鈉的回歸方程計算，RSD為0.17%。

表1 兩種方法樣品含量測定結(jié)果(n=3)

2 結(jié)果

取注射用阿魏酸鈉樣品3批，按“供試品溶液的制備”方法制備樣品溶液。HPLC法在上述色譜條件進(jìn)樣20 μl，測定色譜峰面積，按阿魏酸鈉的回歸方程求算樣品含量;UV法在310nm處測定溶液的吸光度A值，代入回歸方程計算阿魏酸鈉的含量，2種方法的含量測定結(jié)果見表1。

3 討論

實(shí)驗(yàn)研究并確定了供試品溶液的制備方法，方法簡便，重復(fù)性好。精密度、穩(wěn)定性、加樣回收率均能滿足定量要求，故兩種方法均可用于注射用阿魏酸鈉的含量測定。采用H PLC法測定制劑含量雖然準(zhǔn)確，但操作較為費(fèi)時;UV法操作簡便，對使用者要求不高，因此，UV法更顯優(yōu)勢。

［1］劉會榮.阿魏酸鈉的藥理作用與臨床應(yīng)用.中國藥業(yè)，2005，14(3)：78-79.

［2］靖會，姚凌云，李教社，等.國內(nèi)阿魏酸鈉的藥理研究進(jìn)展.西北藥學(xué)雜志，2002，17(5)：236-238.

［3］國家藥典委員會編.中國藥典(二部).2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：411.

［4］陳炳巖.紫外分光光度法測定阿魏酸鈉氯化鈉注射液中阿魏酸鈉的含量.海峽藥學(xué)，2004，16(5)：88-89.

221300 江蘇省邳州市人民醫(yī)院藥劑科(馮建忠);徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科(惠慧)

惠慧