潘 琳 殷東風(fēng) 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院（沈陽110032）

乳巖寧湯是在臨床經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上研制而成，用于治療乳腺癌，并具有顯著療效，但未經(jīng)毒理實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)。為給臨床用藥提供安全的實(shí)驗(yàn)依據(jù)下。我們對(duì)其進(jìn)行了安全毒理學(xué)評(píng)價(jià)，為臨床用藥提供可靠的科學(xué)數(shù)據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料 1.1 實(shí)驗(yàn)藥物 乳巖寧湯由柴胡、黃芩、法半夏、太子參、炙甘草、莪術(shù)15g，生龍骨、生牡蠣、半枝蓮、白花蛇舌草各15g組成。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠50只，雌雄各半，4～6周齡，體重20±2g，一次性購自遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，分籠飼養(yǎng)，顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.3 主要器材 灌胃器、燒杯、量筒、天平。

2 方 法 2.1 乳巖寧方及其制備 由柴胡、黃芩、法半夏、太子參、甘草、半枝蓮、莪術(shù)、龍骨、牡蠣、白花蛇舌草等14味中藥組成，一次性購于北京同仁堂藥房，藥液煎煮按照中藥常規(guī)煎法進(jìn)行，濃縮至終濃度為2.7g·mL－1，無菌實(shí)驗(yàn)陰性，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 急性毒性實(shí)驗(yàn) 2.2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)：取昆明種小鼠10只，雌雄各半，體重20±2g，給藥前禁食12h，以乳巖寧含生藥3.57g／mL濃度按0.4mL／10g體重灌胃，給藥2次，上午、下午各1次，中間間隔8h，給藥后觀察小鼠一般情況。見小鼠活動(dòng)自如，進(jìn)食、飲水正常，大便呈濕潤(rùn)顆粒狀，10只小鼠72h內(nèi)無一只死亡，也無明顯中毒反應(yīng)，提示本品難以測(cè)出LD50，故選擇最大給藥量實(shí)驗(yàn)。

2.2.2 正式實(shí)驗(yàn)：最大耐受量（MTD）測(cè)定：取昆明種小鼠40只，雌雄各半，體重20±2g，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、乳巖寧低、中、高劑量4組。4組小鼠在灌胃給藥前均先禁食12h，均按0.4mL／10g體重灌胃，給藥2次，上午、下午各1次，中間間隔8h，最后一次給藥后2h結(jié)束禁食?？瞻讓?duì)照組予等體積生理鹽水，乳巖寧低、中、高劑量組分別按照142.8g／kg、285.3g／kg、428.2g／kg灌胃，連續(xù)觀察1周。

2.3 觀察指標(biāo) 2.3.1 每天觀察并記錄各組小鼠的體重、皮膚毛發(fā)、眼和粘膜的變化、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等及其中毒和死亡情況。

2.3.2 于用藥后24、48、72h、第7天分別檢測(cè)小鼠血常規(guī)、肝腎功。

2.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，脫頸處死小鼠，取心、肝、脾、肺、腎標(biāo)本固定、石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡觀察藥物對(duì)上述各臟器的影響。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS15.0軟件，單因素方差分析（ANOVA），數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，以P＜0.05為顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié) 果 3.1 給藥后實(shí)驗(yàn)組小鼠飲食正常 體重增加，活動(dòng)自如，皮毛光滑，大小便正常，無異常分泌物，無任何不良反應(yīng)，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束無小鼠死亡。實(shí)驗(yàn)前各組小鼠體重比較無明顯差異，實(shí)驗(yàn)后各組體重比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），如表1。

3.2 血常規(guī)及肝腎功的變化情況 血液指標(biāo)見表2。

3.3 大體病理形態(tài)學(xué)觀察 經(jīng)大體解剖和病理檢查，主要臟器無異常。

表1 各實(shí)驗(yàn)組小鼠體重情況

討 論 乳巖寧湯是由《傷寒論》的柴胡加龍骨牡蠣湯加減而來，主要由柴胡、黃芩、法半夏、太子參、炙甘草、生龍骨、生牡蠣、半枝蓮、莪術(shù)、白花蛇舌草等14味中藥組成，其以小柴胡湯［1］為主方和解少陽、調(diào)暢氣機(jī)，加入龍骨、牡蠣鎮(zhèn)定安神，輔以山慈菇、莪術(shù)、白花蛇舌草、浙貝母等解毒化瘀，軟堅(jiān)散結(jié)。研究表明方中人參的有效活性成分（人參皂苷Rg3）、黃芩甙、莪術(shù)油等［2－3］均有抑制腫瘤細(xì)胞增殖與浸潤(rùn)、抗腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡等多重作用。乳巖寧湯是臨床治療乳腺癌的經(jīng)驗(yàn)方，臨床上未發(fā)現(xiàn)任何明顯毒性反應(yīng)，故進(jìn)行本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以更好的指導(dǎo)臨床。因其毒性較小，在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)給昆明種小鼠灌胃無法測(cè)出其半數(shù)致死量（LD50），故改做小鼠最大給藥量實(shí)驗(yàn)。

乳巖寧湯臨床常用生藥口服劑量為2.77g／（kg·d），（按照成人體重60kg計(jì)算），受藥物濃度和給藥體積的影響，本實(shí)驗(yàn)設(shè)定小鼠的最大給藥量為428.2g生藥／（kg·d），即可供灌胃的最大濃度3.57g／mL，小鼠灌胃可承受的最大體積（0.8mL／20g體重），1d2次灌胃給藥，根據(jù)公式計(jì)算約為臨床患者擬用劑量的154.6倍（＞100倍）。據(jù)文獻(xiàn)［4］，按體重計(jì)算，小鼠ld最大給藥量相當(dāng)于成人臨床日用量的100倍以上則較為安全，可以提供臨床研究試用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給予小鼠最大給藥量后未見任何中毒癥狀及死亡現(xiàn)象，給藥后實(shí)驗(yàn)組小鼠飲食正常，體重增加，活動(dòng)自如，皮毛光滑，大小便正常，說明該藥無明顯毒性，臨床應(yīng)用是安全可靠的。

表2 用藥前后各實(shí)驗(yàn)組小鼠血常規(guī)及肝腎功的情況

［1］邢向榮，殷東風(fēng).運(yùn)用柴胡劑從肝論治提高惡性腫瘤患者生存質(zhì)量的臨床分析［J］.實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2007，21（1）：58－59.

［2］孫 燕，林洪生，朱允中等.長(zhǎng)春瑞濱合并順鉑（NP）加參一膠囊或安慰劑治療晚期非小細(xì)胞肺癌的多中心雙盲隨機(jī)臨床研究報(bào)告［J］.中國肺癌雜志，2006，9（3）：254－258.

［3］林小聰，劉新光陳小文等.黃芩甙對(duì)重組人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其動(dòng)力學(xué)分析［J］.癌癥，2004，23（8）：874－878.

［4］謝秀瓊.中藥劑制劑開發(fā)與應(yīng)用［M］.第二版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：540.