俞向前，萬世平，顧武軍，楊曉峰，劉耀芳，朱建國，王衛(wèi)國，葉承榮

(1.上海市浦東新區(qū)動物疫病預防控制中心，上海 201202;2.上海市南匯長橋豬場，上海 201314;3.上海交通大學，上海 200240;4.上海市浦東新區(qū)農業(yè)服務中心，上海 201201)

在現(xiàn)行生豬養(yǎng)殖模式下，仔豬的斷奶向低齡化發(fā)展，斷奶應激產(chǎn)生的各種問題越來越突出，斷奶仔豬的飼養(yǎng)管理、環(huán)境控制、疾病預防與控制成為整個生豬養(yǎng)殖過程中最關鍵的環(huán)節(jié)。當前，斷奶仔豬主要采用抗生素類藥物及化學藥物進行疾病的預防與控制，然而其日益暴露的不同程度的藥物殘留危害促使人們轉而求助于毒副作用小、無殘留且不易誘生耐藥性的中藥制劑。復方中藥制劑富含多種活性成分，兼有藥物和營養(yǎng)雙重作用，具有提高仔豬采食量、促進生長、增強免疫、降低腹瀉率、促進消化器官發(fā)育、提高酶活性及改善動物產(chǎn)品品質的作用[1-2]。本試驗根據(jù)斷奶仔豬的飼養(yǎng)管理、環(huán)境控制、疾病預防與控制的實際需要，以益氣健脾、滋補肝腎、消積殺蟲為組方原則，將黨參、茯苓、山藥、黃芪、蓮子、薏仁等21味中藥，經(jīng)提純加工后再按一定比例添加到斷奶仔豬的基礎日糧中，研究復方中藥制劑對斷奶仔豬免疫機能及抗寄生蟲感染的影響，為中藥制劑在斷奶仔豬生產(chǎn)中的應用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 復方中藥添加劑 中藥添加劑其組分和重量份數(shù)為:黨參60份、茯芩60份、山藥60份、黃芪60份、蓮子20份、炒薏仁20份、蒼術20份、陳皮20份、何首烏60份、莬絲子20份、女貞子20份、旱蓮草20份、桔梗10份、焦神曲60份、白扁豆15份、貫眾20份、炒檳榔20份、南瓜子40份、蒲公英60份、馬齒莧60份、甘草12份等。各單味中藥均購自上海人和堂醫(yī)藥公司，粉碎研磨后按照基礎日糧的1.5%混勻添加，按療程服用，連續(xù)飼喂1周，停3 d，再服，30 d為1個療程。

1.1.2 主要試劑 血清免疫球蛋白試劑(批號:[2008]3402801)為德靈公司進口原裝試劑;肝素鈉、RMPI-1640培養(yǎng)液、96孔平底細胞培養(yǎng)板、Hank’s液、PHA、MTT、DMSO 溶液購自上海前塵生物技術有限公司。豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒(ELISA)(批號:20110622)、豬瘟病毒抗體檢測試劑盒(ELISA)(批號:20110623)均系龍巖蚨瑞生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 動物試驗設計 試驗在浦東新場養(yǎng)豬場進行，起止時間為2011年4-6月。試驗動物為同一保育舍的健康斷乳仔豬，出生日齡差不超過4 d，平均為30～35日齡，初始體重相近，組間差異不顯著。將試驗豬隨機分成2組，對照組30頭，飼喂基礎日糧;試驗組30頭，飼喂基礎日糧+1.5%中藥添加劑。疫苗注射時間:試驗前一周注射藍耳病疫苗，試驗前一周豬瘟一免，試驗1周后豬瘟疫苗二免，5周后豬瘟疫苗三免，兩組注射疫苗條件完全一致。豬舍、飼養(yǎng)條件、衛(wèi)生環(huán)境、飼料品質及其他飼養(yǎng)管理等均相同，自由采食和飲水。

1.2.2 血液樣品處理 分別在用藥1個療程和2個療程后，清晨空腹，從兩組活體前腔靜脈采血，每組隨機15頭。每頭豬無菌采集10 mL血液，分裝在3個離心管中，其中2管靜置1 h后，3000 r/min離心，取上清保存?zhèn)溆茫?管(加1%肝素鈉抗凝)立即送實驗室測定。

1.2.3 淋巴細胞轉化率的測定 采用比色法(MTT法)檢測淋巴細胞轉化功能，具體操作方法參照文獻[3]進行。按下列公式計算淋巴細胞轉化率:淋巴細胞轉化率(%)=(試驗組OD值一對照組OD值)/對照組OD值×100%。

1.2.4 豬瘟及藍耳病抗體水平的測定 取用藥1個療程和2個療程后制備的血清，分別用豬瘟抗體ELISA檢測方法測定豬瘟抗體水平以及藍耳病抗體ELISA檢測方法測定藍耳病抗體水平。具體檢測方法按試劑盒說明書進行。用酶標儀在450 nm波長處讀取吸光值(OD)，根據(jù)檢測試劑盒說明書，樣品OD值≥0.5，且其OD值與陰性對照OD值比值超過2倍者，為合格。

1.2.5 中藥添加劑對豬腸道寄生蟲蟲卵的抑制試驗 用藥1個療程和2個療程后，試驗組與對照組各采集5份新鮮糞便，每份取10 g置于50 mL小燒杯中，加入10 mL PBS，待糞便泡松軟后用玻璃棒充分攪碎攪勻，利用尼龍篩收集蟲卵并將蟲卵收集于干凈的小燒杯中，在顯微鏡下進行寄生蟲蟲卵計數(shù)。按以下公式計算減卵率(EPG為平均每克糞便中所荷蟲卵數(shù)):

1.2.6 試驗數(shù)據(jù)處理 采用統(tǒng)計學軟件SPASS 17.0對試驗數(shù)據(jù)進行處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗。P＜0.05為差異，有統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 中藥添加劑對斷奶仔豬淋巴細胞轉化率的影響 由實驗結果可見，2個療程后，試驗組比對照組的淋巴細胞轉化率顯著提高(P＜0.05)。結果表明，中藥添加劑可顯著改善斷奶仔豬的淋巴細胞轉化率，能顯著提高機體的細胞免疫功能。

2.2 中藥添加劑對豬瘟抗體水平的影響 由表1可見，試驗前對照組和試驗組兩組豬的豬瘟抗體合格率差異不顯著(P＞0.05);1個療程后，試驗組合格率與對照組差異不顯著(P＞0.05);2個療程后，試驗組合格率比對照組提高了17%，差異顯著(P＜0.05)。

表1 中藥添加劑對豬瘟抗體水平的影響

2.3 中藥添加劑對豬藍耳病抗體水平的影響 由表2可見，試驗前對照組和試驗組兩組豬藍耳病抗體合格率無差異(P＞0.05)，抗體水平基本一致;1個療程后，試驗組合格率比對照組提高了3%(P＞0.05);2個療程后，試驗組合格率比對照組提高了19%，差異顯著(P＜0.05)。

表2 中藥添加劑對豬藍耳病抗體水平的影響

2.4 中藥添加劑對豬腸道寄生蟲蟲卵的抑制效果由表3可知，用藥1個療程后，試驗組的減卵率為1%，與對照組結果進行方差分析，差異不顯著(P＞0.05);用藥2個療程后，試驗組的減卵率為47%，與對照組結果進行方差分析，差異顯著(P＜0.05)。

表3 中藥添加劑對豬腸道寄生蟲蟲卵的影響

3 討論

淋巴細胞與機體的免疫有極密切的關系，可分為T淋巴細胞和B淋巴細胞，B細胞可轉變?yōu)闈{細胞，抗體主要是由漿細胞合成并分泌到血漿中的。T細胞本身雖不直接產(chǎn)生抗體，但它可與B細胞合作產(chǎn)生抗體。T細胞是進行細胞免疫應答的主要功能細胞，是衡量淋巴細胞在外來因子刺激下增殖程度的一個重要指標。T細胞在接觸抗原前是靜止的，一旦受到抗原刺激，即會產(chǎn)生免疫應答反應。T淋巴細胞是體內主要的免疫活性細胞，在胸腺中發(fā)育成熟以后經(jīng)血液、淋巴循環(huán)運行定居于外周免疫器官，發(fā)揮免疫細胞的功能，以PHA作為促分裂因子來檢測淋巴細胞的轉化功能，其轉化率的高低常作為衡量機體免疫水平的指標，T淋巴細胞轉化率和白細胞吞噬率越高，意味著淋巴細胞在外來因子的刺激下增殖反應越強，機體的細胞免疫能力越強[4-5]。本試驗淋巴細胞轉化率的測定結果顯示中藥添加劑使用2個療程后，可顯著改善斷奶仔豬的淋巴細胞轉化率(P＜0.05)，能顯著提高機體的細胞免疫功能。

馬玉芳等[6]在基礎日糧中添加2種不同精制的中藥飼料添加劑，發(fā)現(xiàn)中藥添加劑能改善斷奶仔豬生長性能，并能促進免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)、補體(C3、C4)和白細胞介素-2的生成，增強機體免疫功能[7]。本試驗免疫力影響結果顯示1個療程后，試驗組的豬瘟和藍耳病抗體檢測合格率比對照組均提高了3%(P＞0.05)，2個療程后試驗組合格率比對照組分別提高了17%(P＜0.05)和19%(P＜0.05)，充分說明本中藥添加劑能提高斷奶仔豬免疫力。

中藥不僅可以直接通過其藥理作用對腸道內寄生蟲產(chǎn)生作用，抑制病原寄生蟲的發(fā)育，還可通過其綜合作用對寄生蟲產(chǎn)生驅蟲效果，調節(jié)機體的免疫功能，產(chǎn)生非特異性免疫，增強其抗病能力，配以致瀉藥，排出蟲體，再配以健脾胃藥調理脾胃，從而達到消除病原及其對組織細胞的損傷，恢復機體的正常生理功能[8]。本試驗中糞便蟲卵計數(shù)結果顯示，用藥1個療程后試驗組的減卵率為1%(P＞0.05)，用藥2個療程后試驗組的減卵率為47%(P＜0.05)，說明本研究應用的中草藥添加劑具有一定的抑制寄生蟲蟲卵的作用。

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[4]殷 超，陳 亮，王 勇，等.復方中藥制劑對仔豬免疫機能及消化酶活性的影響[J].畜牧與獸醫(yī)，2010，42(11):56-59.

[5]何正義，李福寶，吳翠娟，等.中藥制劑對豬T淋巴細胞轉化率和白細胞吞噬率的影響[J].動物醫(yī)學進展，2008，29(12):20-22.

[6]馬玉芳，劉建成，黃一帆，等.中藥飼料添加劑對仔豬生長性能和免疫功能的影響[J].福建農林大學學報(自然科學版)，2003，32(4):496-499.

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