★ 丁志軍 廖銀根 羅美蘭 譚志江 (江西省皮膚病專(zhuān)科醫(yī)院 南昌330001)

多指標(biāo)正交試驗(yàn)優(yōu)選雙花解毒顆粒中水提部分提取工藝

★ 丁志軍*廖銀根 羅美蘭 譚志江 (江西省皮膚病專(zhuān)科醫(yī)院 南昌330001)

目的:優(yōu)選雙花解毒顆粒水提部分提取工藝。方法:采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以綠原酸、芍藥苷含量及干膏率為指標(biāo)，選取L9(34)正交表，優(yōu)化提取工藝中加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間3個(gè)因素。結(jié)果:以飲片投料，加12倍量的水煎煮2次，第一次1．5 h，第二次1．0 h為最佳工藝。結(jié)論:該工藝穩(wěn)定可靠，可用于生產(chǎn)。

雙花解毒顆粒;正交試驗(yàn);綜合評(píng)分法;高效液相色譜法

雙花解毒顆粒系江西省皮膚病專(zhuān)科醫(yī)院中醫(yī)科專(zhuān)家經(jīng)十幾年臨床總結(jié)，擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)(專(zhuān)利號(hào):ZL200410033920．X)的經(jīng)驗(yàn)方。其由金銀花、連翹、菊花、赤芍等八味中藥組成，具有清熱解毒，祛瘀排膿的功效。臨床上主要用于治療由風(fēng)、熱、濕毒所致的痤瘡、面部接觸性皮炎等皮膚病。為了將雙花解毒湯劑更好地應(yīng)用于臨床上，江西省皮膚病專(zhuān)科醫(yī)院根據(jù)其有效成分的性質(zhì)和藥理作用，將處方中藥物分為水提組和醇提組分別提取，研究開(kāi)發(fā)出服用、攜帶方便的雙花解毒顆粒劑?，F(xiàn)就其水提組工藝研究報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜系統(tǒng)(安捷倫科技有限公司);CP225D微量天平(德國(guó)Sartorius);KQ-500E型醫(yī)用超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

綠原酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110753-200413);芍藥苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110736-200833)。甲醇為色譜純，其余所有試劑均為分析純。本試驗(yàn)中所用的藥材均由安徽亳州提供。

2 方法與結(jié)果

2．1 考察指標(biāo)的確定

雙花解毒顆粒處方中有多味中藥，有效成分眾多，因此以干膏率作為考察指標(biāo)之一較全面合理;同時(shí)選取君藥金銀花、臣藥菊花都含的有效成分綠原酸，另一臣藥赤芍中有效成分芍藥苷含量作為考察指標(biāo)，符合中藥多靶點(diǎn)，多方位的原則［1－2］。

2．2 考察指標(biāo)的測(cè)定方法

2．2．1 干膏率的測(cè)定方法 精密移取正交試驗(yàn)提取濃縮液50 ml，平行3份，分別置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，并于105℃干燥3 h，迅速取出，置于干燥器中放置30 min，迅速精密稱(chēng)定干膏重量。干膏率(%)=干膏重(mg)×濃縮液總量(ml)/取樣量(ml)/生藥總量(mg)×100%。

2．2．2 綠原酸、芍藥苷含量測(cè)定方法 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):色譜柱為 Phenomenex C18(4．6 mm ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇(A)－1%磷酸溶液(B)梯度洗脫，洗脫條件見(jiàn)表1;DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)327 nm(綠原酸)，230 nm(芍藥苷);流速:0．8 ml/min;柱溫:40 ℃。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫

對(duì)照品溶液的配制:取綠原酸對(duì)照品、芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置棕色量瓶中，加甲醇溶解制成每1 ml分別含0．34 mg，0．11 mg的對(duì)照品溶液，即得(10℃以下保存)。

線性關(guān)系考察:精密吸取混合對(duì)照品溶液2．0，4．0，6．0，8．0，10．0 μl分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，綠原酸的回歸方程為 Y=119 381．86X+0．47，線性范圍為 0．68 －3．40 μg(r=0．999 8);芍藥苷的回歸方程為 Y=554 197．55X+0．34，線性范圍為 0．22 －1．10 μg(r=0．999 6)。

供試品溶液的配制:精密量取提取濃縮液15 ml，水浴蒸干，轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率250 W，頻率35 kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。

陰性對(duì)照溶液的制備:按處方比例，稱(chēng)取本處方中除金銀花、菊花、黃芩、黃柏外的各味藥材，分別加10倍水，煎煮兩次，每次2 h，減壓濃縮，定容至2000 ml，按上述供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液;另按處方比例同法制備缺赤芍、黃芩、黃柏的陰性對(duì)照溶液。

測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各5 μl，注入液相色譜儀測(cè)定其峰面積，計(jì)算綠原酸、芍藥苷含量。液相圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．3 正交試驗(yàn)法優(yōu)選提取工藝

2．3．1 確定權(quán)重系數(shù) 以綠原酸、芍藥苷含量及干膏率3項(xiàng)指標(biāo)為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，其權(quán)重采用層次分析法(AHP)進(jìn)行分析［3］。

建立評(píng)價(jià)目標(biāo)樹(shù)雙花解毒顆粒提取工藝總評(píng)價(jià)目標(biāo)可通過(guò)指標(biāo)性成分、浸出物次級(jí)目標(biāo)來(lái)反映，指標(biāo)性成分通過(guò)綠原酸、芍藥苷2個(gè)目標(biāo)來(lái)反映。

構(gòu)成兩兩比較優(yōu)先矩陣比較同一層次目標(biāo)的相對(duì)重要性，并構(gòu)成兩兩比較矩陣。目標(biāo)樹(shù)中3項(xiàng)目標(biāo)成對(duì)比較的優(yōu)先矩陣見(jiàn)表2，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表3。

目標(biāo) 綠原酸 芍藥苷 干膏率綠原酸135芍藥苷 1/3 1 3干膏率1/5 1/3 1

表3 3項(xiàng)目標(biāo)成對(duì)比較評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

w1=2．466 21/(2．466 21+1．000 00+0．405 48)=0．636 98，同理可得:w2=0．258 28，w3=0．104 73。

計(jì)算權(quán)重系數(shù)隨機(jī)一致性比率 按公式CR=CI/RI計(jì)算隨機(jī)一致性比率為受檢驗(yàn)層次的次目標(biāo)數(shù))，查找相應(yīng)的平均隨機(jī)一致性指標(biāo)RI(random index)，見(jiàn)表 4。

表4 平均隨機(jī)一致性指標(biāo)RI表

2．3．2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 經(jīng)過(guò)預(yù)試驗(yàn)，多方考察影響水煎煮的因素，選擇加水量(A)、提取時(shí)間(B)、提取次數(shù)(C)為影響水煎煮的主因素，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，以綠原酸、芍藥苷含量及干膏率綜合得分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用L9(34)正交表安排試驗(yàn)，因素水平與正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表5－6。

表5 因素水平

2．3．3 正交試驗(yàn)安排及結(jié)果 按處方(除黃柏和黃芩外)比例稱(chēng)取金銀花、菊花、赤芍等六味藥材135 g，共9份。根據(jù)L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表，將金銀花和菊花提取揮發(fā)油，過(guò)濾，濾液另存，備用;藥渣與其它四味藥材加水混合提取，提取完畢后，將不同條件下的水提液與上述濾液混合，分別濃縮至適量，定容至2000 ml，稱(chēng)定重量，備用。以綠原酸、芍藥苷含量及干膏率為考察指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表6～7。

表6 正交試驗(yàn)結(jié)果

表7 方差分析結(jié)果

由直觀分析可知，綜合評(píng)分?jǐn)?shù)據(jù)的極差大小顯示各因素主次為C＞A＞B，方差分析結(jié)果表明，A、C為主要因素，B為次要因素。綜合分析，考慮到工業(yè)生產(chǎn)節(jié)省時(shí)間，提高效率，最終確定最佳工藝為:加12倍量水煎煮2次，第一次1．5 h，第二次1．0 h。

2．3．4 最佳提取工藝驗(yàn)證 為了進(jìn)一步驗(yàn)證正交試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，以確保提取工藝合理可行，按上述最佳工藝條件重復(fù)安排3批試驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 最佳提取工藝驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

在測(cè)定指標(biāo)成分含量時(shí)，以HPLC同時(shí)測(cè)定雙花解毒顆粒提取液中綠原酸、芍藥苷含量，對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行了考察，分離效果理想，重現(xiàn)性好，考慮到本文主要報(bào)道提取工藝研究，故暫未將其列入正文。

本試驗(yàn)采用正交試驗(yàn)的方法，以金銀花和菊花中綠原酸、赤芍中芍藥苷含量及干膏率為指標(biāo)，運(yùn)用多指標(biāo)綜合評(píng)分法優(yōu)化提取工藝中加水量，煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)3個(gè)因素，得到最佳工藝，并經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)最終確定提取工藝為12倍量水煎煮2次，第一次1．5 h，第二次1．0 h。結(jié)果表明優(yōu)選的提取工藝簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)。

［1］王筱亮，張玉杰，陳明霞，等．多指標(biāo)正交試驗(yàn)優(yōu)選酸棗仁最佳提取工藝［J］．中國(guó)中藥雜志，2005，30(10):753．

［2］李麗，周軍，張瑩，等．多指標(biāo)綜合評(píng)分法優(yōu)化痛風(fēng)寧顆粒提取工藝［J］．中成藥，2007，29(2):82．

［3］任愛(ài)農(nóng)，盧愛(ài)玲，田耀洲，等．層次分析法用于中藥復(fù)方提取工藝的多指標(biāo)權(quán)重研究［J］．中國(guó)中藥雜志，2008，33(4):372 －374．

Optimization of Extraction Technology of the Water Extraction Part in Shuanghua Detoxification Granules by Orthogonal Design with Multi-targets

DING Zhi-jun，LIAO Yin-gen，LUO Mei-lan，TAN Zhi-jiang
Jiangxi Specialized subject hospital of skin，Nanchang 330001，China

Objective:To optimize the extraction technology for the water extraction part in Shuanghua detoxification Granules．Methods:With the yield of extracts yield and the contents of Chlorogenic acid and Paeoniflorin as indexes，orthogonal table L9(34)was used in the experiment of extracting in water to study the effect of technological parameters(the dosage of water，extraction times，the time of extraction)on the content of Chlorogenic acid and Paeoniflorin．Results:The optimum process is that water is used as extracting solution adding 12 times amount of solution，extracting 2 times，1．5 hours for the first time and 1．0 hour for the second time．Conclusion:The extraction process is stable and suitable for industrial production．

Shuanghua detoxification;Orthogonal test;Grading methods;HPLC

R 284．2

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丁志軍(1981－)，男，漢族，工程師/中藥師，碩士，研究方向?yàn)橹兴幹苿?/p>

2011-11-20)