張萬強(qiáng)，楊麗平，宋慶慧，朱 嘉，王 震，馬 淵△

(1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院藥理室，北京 100102;2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

白脈軟膏是藏醫(yī)臨床常用的消腫、止痛、干黃水的傳統(tǒng)藏藥配方，是藏醫(yī)治療骨關(guān)節(jié)疾病的代表方劑［6、7］。依據(jù)傳統(tǒng)藏醫(yī)學(xué)骨傷治療理論，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究技術(shù)方法和指標(biāo)，對(duì)藏藥中治療骨關(guān)節(jié)病的經(jīng)典方劑如白脈軟膏等所含有效成分的作用及其機(jī)制的研究，不僅能夠充實(shí)和豐富藏醫(yī)學(xué)理論，更能夠?yàn)楣顷P(guān)節(jié)疾病的治療尋找新的更安全有效的治療藥物。本研究以機(jī)械法建立家兔橈骨骨折模型，觀察白脈軟膏對(duì)骨折愈合過程的影響，并與傳統(tǒng)骨傷治療藥物傷科接骨片進(jìn)行比較。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)新西蘭大白兔60只，體重 2.5kg～3.0kg，雌雄各半，單籠飼養(yǎng)，由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼養(yǎng)于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院基礎(chǔ)理論研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室。

1.1.2 儀器 自主研制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物步態(tài)測(cè)試系統(tǒng)及分析軟件，自主研制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物軟組織張力測(cè)試儀，WDT電子萬能試驗(yàn)機(jī)(深圳市凱強(qiáng)利試驗(yàn)儀器有限公司)，東方紅F30-IIF200 max X線攝片機(jī)(北京醫(yī)用射線機(jī)廠)，AO-820組織切片機(jī)(美國(guó))，400倍奧林巴斯光學(xué)顯微鏡(日本)。

1.1.3 藥品及試劑 白脈軟膏由奇正(北京)傳統(tǒng)藏醫(yī)藥外治研究院有限公司提供，傷科接骨片為大連美羅中藥廠有限公司產(chǎn)品(批號(hào)國(guó)藥準(zhǔn)字221021461)，烏拉坦、慶大霉素均購自中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 按照隨機(jī)分組法，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、骨折模型組、傷科接骨片給藥組(0.35g/kg)、白脈軟膏低、中、高劑量組(0.33、0.67、1.34g/kg，以 5cm/g計(jì)外敷)。

1.2.2 骨折模型制備 主要實(shí)驗(yàn)流程參考侯筱魁等研究報(bào)道［8］，具體如下:各組動(dòng)物麻醉后，右前腿剪毛后消毒皮膚，切開皮膚暴露橈骨，采用電子萬能材料實(shí)驗(yàn)機(jī)造成骨折模型，形成家兔橈骨骨折模型，骨折不固定，縫合皮膚，包扎傷口。術(shù)后用慶大霉素4 mg/kg肌注3 d預(yù)防感染，造模后拍攝X光片以確認(rèn)骨折模型是否成功，正常組動(dòng)物不進(jìn)行骨折造模。

1.2.3 給藥處理 各實(shí)驗(yàn)組術(shù)后每天按劑量分別給予相應(yīng)藥物，傷科接骨片組動(dòng)物灌胃給予傷科接骨片，白脈軟膏組動(dòng)物于骨折處外敷相應(yīng)劑量白脈軟膏，每日給藥1次。

1.2.4 觀察 骨折7d基本著地后，通過采集家兔行走時(shí)雙前肢的步態(tài)曲線，測(cè)量患側(cè)與健側(cè)肢著地最大力值，3d測(cè)試1次，以后每周1次 ，共計(jì)10次。通過對(duì)正常皮膚與腫脹皮膚表面張力的測(cè)試，確定骨折動(dòng)物皮膚表面張力的恢復(fù)情況。.

外骨痂與骨折線評(píng)分及標(biāo)本采集參考已有報(bào)道［9］，分別于骨折后第 7、14、60 天拍攝患肢 X 線片，采用盲法X線讀片，評(píng)價(jià)兩項(xiàng)參數(shù)根據(jù)骨折愈合過程中外骨痂和骨折線的變化規(guī)律，將外骨痂和骨折線按文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行X線評(píng)分分析。給藥60d處死各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，后取骨折局部組織，10%福爾馬林固定，乙酸脫鈣，常規(guī)制成脫鈣石蠟切片，HE染色觀察。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較用 One-way ANOVA，兩兩顯著性比較采用LSD法，顯著性標(biāo)準(zhǔn)為 P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿著地力的影響

外用白脈軟膏高劑量組動(dòng)物骨折13d后患肢著地力明顯高于骨折模型組，外用白脈軟膏中低劑量及口服傷科接骨片可明顯升高骨折16d后動(dòng)物的患肢著地力，骨折47d后各組動(dòng)物患肢著地力均恢復(fù)至生理水平，各組間無顯著性差異。

2.2 外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿肌張力的影響

骨折模型動(dòng)物傷腿肌張力明顯升高，口服傷科接骨片可進(jìn)一步升高模型動(dòng)物骨折后1d至9d的患肢肌張力，表現(xiàn)為下陷深度降低。白脈軟膏低、中劑量外用可升高患肢肌張力，高劑量則表現(xiàn)出降低肌張力的作用。

2.3 外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中骨痂X射線掃描評(píng)分的影響

骨折模型動(dòng)物骨折后第7、14天及第60天骨痂X射線掃描評(píng)分明顯低于正常對(duì)照組。口服傷科接骨片對(duì)骨折模型動(dòng)物骨痂處X射線評(píng)分沒有影響。外用白脈軟膏低及高劑量可分別升高模型動(dòng)物第14天及第60天骨痂處X射線掃描評(píng)分。

2.4 外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折60d后骨痂形成的影響

正常對(duì)照組鏡下骨組織形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常，可見密質(zhì)骨呈板層狀，骨陷窩排列整齊有序，結(jié)構(gòu)完整，未見骨組織缺損及其他病理改變。

骨折模型組、傷科接骨片組及白脈軟膏低、中劑量組鏡下可見，骨痂處有新生骨小梁和間斷的新生骨板。白脈軟膏高劑量組鏡下可見新骨生長(zhǎng)，新生骨組織為骨小梁和新生骨板，并有較多的骨小梁間隙(見圖1)。

圖1 外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折60d后骨痂形成處骨組織結(jié)構(gòu)的影響

3 討論

從以上數(shù)據(jù)可知，采用電子萬能材料實(shí)驗(yàn)機(jī)造成家兔橈骨骨折動(dòng)物模型，其表現(xiàn)出多方面與臨床骨折相似的功能學(xué)及病理結(jié)構(gòu)等方面的損傷性改變，傳統(tǒng)骨傷治療藥物傷科接骨片可以升高患肢著地力和肌張力，表現(xiàn)出促進(jìn)患肢功能改善，促進(jìn)其骨傷愈合的作用，說明該骨折模型動(dòng)物可以比較客觀地反映骨折及愈合過程中的功能、生理及病理學(xué)改變，并可用于相關(guān)干預(yù)藥物的研究。該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型數(shù)據(jù)與以往報(bào)道相符［10～12］，相關(guān)藥物研究數(shù)據(jù)可靠。

我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中有許多治療骨關(guān)節(jié)疾病的藥物長(zhǎng)久在民間流傳，其中以藏族傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)最具有鮮明特色。傳統(tǒng)藏醫(yī)骨傷科治療方法是藏醫(yī)學(xué)的重要組成部分，它是藏族人民在特有的生產(chǎn)生活習(xí)俗及地理環(huán)境中，同自然尤其是同傷病長(zhǎng)期斗爭(zhēng)的經(jīng)驗(yàn)結(jié)晶。藏醫(yī)學(xué)把骨、關(guān)節(jié)及其周圍軟組織的疾病，統(tǒng)稱為“關(guān)節(jié)黃水病”。白脈和干黃水方劑是藏醫(yī)中治療骨傷疾病的主要藥物，白脈軟膏是藏醫(yī)臨床上常用的消腫、止痛、干黃水的傳統(tǒng)藏藥經(jīng)典復(fù)方，是藏醫(yī)治療骨關(guān)節(jié)疾病的代表方劑［13］。

本研究表明，外用白脈軟膏及口服傷科接骨片均可明顯增加骨折模型動(dòng)物患肢著地力，外用白脈軟膏低、中劑量及口服傷科接骨片可以增加患肢肌張力，白脈軟膏高劑量給藥組則表現(xiàn)出降低患肢肌張力的作用，提示外用白脈軟膏對(duì)肌張力具有雙相調(diào)節(jié)的特點(diǎn)。研究中還發(fā)現(xiàn)，外用白脈軟膏可分別升高模型動(dòng)物骨折后第14天及第60天骨痂處X射線掃描評(píng)分，對(duì)骨痂形成處骨小梁和骨板新生具有明顯的促進(jìn)作用，提示白脈軟膏可加速骨痂的愈合過程以及骨痂處骨小梁的成熟過程［14］，對(duì)骨痂形成局部的骨代謝具有調(diào)節(jié)作用。

依據(jù)傳統(tǒng)藏醫(yī)學(xué)骨傷治療理論，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究技術(shù)方法和指標(biāo)，對(duì)藏藥中治療骨關(guān)節(jié)病的經(jīng)典方劑所含有效成分的作用及其機(jī)制進(jìn)行研究，不僅能夠充實(shí)和豐富藏醫(yī)學(xué)理論，更能夠?yàn)槁怨顷P(guān)節(jié)病的治療尋找新的更安全的治療藥物。我們的研究結(jié)果表明，外用白脈軟膏對(duì)骨折模型動(dòng)物骨傷愈合過程具有明顯的促進(jìn)作用，其促進(jìn)骨傷愈合作用與傳統(tǒng)骨傷治療藥物傷科接骨片相近，其對(duì)肌張力具有雙相調(diào)節(jié)的作用特點(diǎn)，并對(duì)骨痂形成過程中骨小梁和骨板的新生和骨痂成熟具有明顯的促進(jìn)作用。而白脈軟膏治療骨傷的藥效學(xué)特點(diǎn)及物質(zhì)基礎(chǔ)有待于進(jìn)一步深入研究。

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