李光州，陳曉珍，Mishig Dumaa，4，易進(jìn)海，張國林，羅應(yīng)剛*

1成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，成都611137;2 中國科學(xué)院成都生物研究所，成都610041;3四川省中醫(yī)藥科學(xué)院藥物化學(xué)研究所，成都610041;4Institute of Chemistry and Chemical Technology of the Mongolian Academy of Sciences，Ulaanbaatar 210351，Mongolia

唇形科兔唇花屬植物主要分布于伊朗、阿富汗、蒙古、俄羅斯和我國的內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅、陜西和新疆等地，全球約有30 種，大部分物種在我國均有分布［1］。該屬植物具有多種生物活性，主要用于治療各種出血、冠心病、心絞痛及潰瘍病等［2-5］。前蘇聯(lián)科學(xué)家對(duì)該屬植物的化學(xué)成分進(jìn)行了深入研究，從中主要分離得到了二萜類、黃酮類、香豆素類、環(huán)烯醚萜苷類和多糖等［5-15］。

冬青葉兔唇花(Lagochilus ilicifolius)是唇形科兔唇花屬多年生植物，多生于海拔830～2000 m 的沙地及緩坡半荒漠灌叢中，主要分布于蒙古和我國的內(nèi)蒙古，寧夏，甘肅，陜西北部等地［1］。但是，國內(nèi)外還沒有冬青葉兔唇花化學(xué)成分研究的報(bào)道。為了明確該植物的化學(xué)成分，我們采用GC-MS 聯(lián)用技術(shù)對(duì)冬青葉兔唇花地上部分的非極性成分進(jìn)行了分析，并利用峰面積歸一化法確定各成分的相對(duì)含量。我們從冬青葉兔唇花地上部分的非極性成分中分離、鑒定了52 種成分，占非極性成分總量的92.61%，主要包括脂肪酸酯、長鏈烷烴、單萜、倍半萜、甾體及芳香化合物等。

1 材料、儀器與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

冬青葉兔唇花(L. ilicifolius)地上部分于2009年7 月采自蒙古科布多省，由蒙古科學(xué)院植物研究所Ch.Sanchir 教授鑒定，憑證標(biāo)本保存于蒙古科學(xué)院化學(xué)與化學(xué)工藝研究所天然產(chǎn)物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室。95%乙醇、石油醚、乙酸乙酯(工業(yè)純，成都科龍化工試劑廠)，后兩種溶劑在使用前均通過重蒸處理;氯仿(分析純，重慶吉元化學(xué)有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

GC(Focus)-MS(Polaris Q)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Thermo Scientific 公司);Buchi RE-121 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi 公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品的制備

冬青葉兔唇花地上部分(3.5 kg)經(jīng)自然風(fēng)干、粉碎，用95%乙醇室溫下浸提三次(30 L × 10 天/次)，合并提取液，減壓回收乙醇得總浸膏480 g。利用硅膠(200～300 mesh)對(duì)總浸膏進(jìn)行柱層析分離，洗脫液為石油醚-乙酸乙酯(100∶0，20∶1，10∶1，5∶1;各6 L)，TLC 分析、收集，將其中0～8 L 洗脫液的溶劑回收得棕褐色油狀樣品(10. 499 g，得率0.3%)——冬青葉兔唇花地上部分的非極性成分。該油狀物經(jīng)少量氯仿溶解后轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，定容至刻度，搖勻，作為GC-MS 供試品溶液。

1.3.2 GC-MS 分析條件

氣相色譜條件:色譜柱為ThermoTR-5ms SQC毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm i.d.);程序升溫條件:初始溫度80 ℃(保留4 min)，以3 ℃/min 升溫至300℃，保持10 min;載氣為高純He(99.999%)，載氣流量1 mL/min;進(jìn)樣口溫度260 ℃;不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1 μL。

質(zhì)譜條件:離子源為EI 源;離子源溫度250 ℃;電子能量70 eV;倍增器電壓1688 V;質(zhì)量范圍100～650 amu。數(shù)據(jù)處理及質(zhì)譜檢索:通過Xcalibur 工作站，結(jié)合NIST2008 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫進(jìn)行檢索，采用色譜峰面積歸一化法計(jì)算各成分的相對(duì)百分含量。

2 結(jié)果與討論

按上述實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行GC-MS 聯(lián)用分析，獲得了冬青葉兔唇花地上部分非極性成分的總離子流圖(圖1)，以峰面積歸一法確定其中各成分的相對(duì)百分含量。所得質(zhì)譜信息經(jīng)計(jì)算機(jī)以NIST2008 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)合人工譜圖解析并查對(duì)相關(guān)資料對(duì)基峰、質(zhì)荷比和相對(duì)豐度等方面進(jìn)行直觀比較、分析和鑒定［16］，結(jié)果見表1。

圖1 冬青葉兔唇花地上部分非極性性成分總離子流圖Fig.1 TLC of the nonpolar constituents of the aerial parts of L.ilicifolius

表1 冬青葉兔唇花地上部分非極性成分Table 1 Nonpolar constituents of the aerial parts of L.ilicifolius

3 8.76 Benzene，1-methyl-2-(1-methylethyl)-1-甲基-2［1-甲基乙基］苯 923 C10H14 134 0.03 4 18.77 β-Cubebeneβ-蓽澄茄油烯 778 C15H24 204 0.31 5 19.13 Thujopsene 羅漢柏烯 740 C15H24 204 0.30 6 19.90 Ylangene 衣蘭烯 788 C15H24 204 0.55 7 20.52 Naphthalene，1，2，3，4，4a，7-hexahydro-1，6-dimethyl-4-(1-methylethyl)-1，2，3，4，4a，7-六氫-1，6-二甲基-4-(1-甲基乙基)萘 790 C15H24 204 0.17 8 20.91 Naphthalene，1，2，3，4，4a，5，6，8a-octahydro-7-methyl-4-methylene-1-(1-methylethyl)-，(1α，4aβ，8aα)-(1α，4aβ，8aα)-1，2，3，4，4a，5，6，8a-八氫-7-甲基-4-亞甲基-1-(1-甲基乙基)萘775 C15H24 204 0.20 9 21.31 (–)-Aristolene 馬兜鈴烯 811 C15H24 204 0.25 10 21.83 2，5-Octadecadiynoic acid，methyl ester2，5-十八碳二炔酸甲酯 788 C19H30O2 290 0.05 11 23.11 (+)-Cuparene(+)-花側(cè)柏烯 801 C15H22 202 3.70 12 23.28 β-Iononeβ-紫羅酮 720 C13H20O 192 1.34 13 24.28 Naphthalene，1，2，4a，5，6，8a-hexahydro-4，7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-，(1α，4aα，8aα)-(1α，4aα，8aα)-1，2，4a，5，6，8a-六氫-4，7-二甲基-1-(1-甲基乙基)萘781 C15H24 204 0.36 14 25.16 2(4H)-Benzofuranone，5，6，7，7a-tetrahydro-4，4，7a-trimethyl-，(R)-(R)-5，6，7，7a-四氫-4，7，7a-三甲基-2-(4H)-苯并呋喃酮 841 C11H16O2 180 0.73 15 25.41 Cadala-1(10)，3，8-triene1(10)，3，8-杜松三烯 739 C15H22 202 0.14 16 26.20 Naphthalene，1，2-dihydro-1，5，8-trimethyl1，2-二氫-1，5，8-三甲基萘 691 C13H16 172 0.03 17 28.69 Falcarinol 鐮葉芹醇 717 C17H24O 244 0.04 18 29.00 Benzene，1-methyl-4-(2-propenyl)-1-甲基-4-(2-丙烯基)苯 888 C10H12 132 0.60 19 29.92 Benzene，4-ethenyl-1，2-dimethyl-1，2-二甲基-4-乙烯基苯 886 C10H12 132 0.59 20 30.39 Azulene，1，4-dimethyl-7-(1-methylethyl)-1，4-二甲基-7-(1-甲基乙基)-甘菊環(huán) 602 C15H18 198 0.14 21 30.87 β-Vatireneneβ-朱欒 812 C15H22 202 2.01 22 32.49 cis-Z-α-Bisabolene epoxidcis-Z-α-紅沒藥烯氧化物 779 C15H22O 218 0.09 23 33.48 β-Elemeneβ-欖香烯 719 C15H24 204 0.01 24 36.82 Alloaromadendrene oxide-(1)別香橙烯氧化物-(1) 762 C15H24O 220 0.08 25 37.37 Icosapent 二十碳五烯酸 767 C20H30O2 302 0.02 26 40.049，12-Octadecadienoic acid，methyl ester9，12-十八碳二烯酸甲酯(亞油酸甲酯) 769 C19H34O 294 1.12 27 40.28 10，12-Octadecadienoic acid10，12-十八碳二烯酸 808 C18H34 250 0.11 28 41.49 Hexadecanoic acid，methyl ester 棕櫚酸甲酯 626 C17H34O2 270 44.92 20 44.12 Octadecanoic acid，methyl ester 十八碳酸甲酯 743 C19H38O2 298 0.67 30 45.75 Cholestan-3-ol，2-methylene-，(3a，5a)-(3a，5a)-3-羥基-2-亞甲基膽甾烷 752 C28H48O 400 0.05 31 46.24 2，3-Dihydroxypropyl elaidate2，3-二羥丙基反油酸丙酯 754 C21H40O4 356 0.54 32 46.42 9，12，15-Octadecatrienoic acid，2，3-dihydroxypropyl ester，(Z，Z，Z)-(Z，Z，Z)-9，12，15-十八碳三烯酸-2，3-二羥丙基酯 731 C21H36O4 352 0.22 33 47.19 Nonadecanoic acid，methyl ester 十九碳酸甲酯 725 C20H40O2 312 7.18 34 49.82 Eicosanoic acid，methyl ester 二十碳酸甲酯 721 C21H42O2 326 0.14 35 52.60 Heneicosanoic acid，methyl ester 二十一碳酸甲酯 715 C22H44O2 340 2.50 36 53.24 Phenol，2，2'-methylenebis［6-(1，1-dimethylethyl)-4-methyl-2，2'-亞甲基-雙(4-甲基-6-叔丁基)苯酚 853 C23H32O2 340 0.28 37 55.24 Octacosane 二十八烷 843 C28H58 394 0.58 38 56.02 Docosanoic acid，methyl ester 二十二碳酸甲酯 765 C23H46O2 354 0.65 39 56.43 1，2-Benzenedicarboxylic acid，diisooctyl ester 鄰苯二甲酸二異辛酯 896 C24H38O4 390 0.17 40 57.71 Tricosanoic acid，methyl ester 二十三碳酸甲酯 721 C24H48O2 368 2.84 41 59.63 1-Heptatriacotanol 三十七醇 718 C37H76O 536 0.02

42 60.28 Hentriacontane 三十一烷 43 60.92 Tetracosanoic acid，methyl ester 二十四碳酸甲酯44 62.51 Pentacosanoic acid，methyl ester 二十五碳酸甲酯45 65.16 Tetratetracontane 四十四烷 46 65.52 Hexacosanoic acid，methyl ester 二十六碳酸甲酯47 66.91 Heptacosanoic acid，methyl ester 二十七碳酸甲酯48 68.30 5，8，11-Heptadecatriynoic acid，methyl ester5，8，11-十七碳-870 C31H64 436 1.78 742 C25H50O2 382 0.69 712 C26H52O2 396 4.21 831 C44H90 617 7.54 714 C27H54O2 410 0.05 746 C28H56O2 424 0.97三炔酸甲酯 726 C18H24O2 272 0.44 49 69.12 Hexatriacontane 三十六烷 824 C36H74 506 1.63 50 69.70 Vitamin E 維生素E 667 C29H50O2 430 0.01 51 73.31 β-Sitosterolβ-谷甾醇 691 C29H50O 414 0.03 52 75.10 Stigmasta-3，5-dien-7-one 豆甾-3，5-二烯-7-酮 736 C29H46O 410 0.27

從冬青葉兔唇花地上部分非極性成分中分離、鑒定了52 個(gè)化合物，占色譜峰總面積的92.61%。GC-MS 分析表明，冬青葉兔唇花地上部分非極性成分種類豐富，其主要成分包括脂肪酸酯類、長鏈烷烴、倍半萜等，其相對(duì)百分含量分別達(dá)到了67.19%、11.53%、7.44%;其中含量最高的為棕櫚酸甲酯，占44.92%;其次為四十四烷(7.54%)、十九碳酸甲酯(7.18%)、二十五碳酸甲酯(4.21%)、(+ )-花 側(cè) 柏 烯(3. 70%)、二 十 三 碳 酸 甲 酯(2.84%)、β-朱欒(2.01%)，同時(shí)還有較多的三十一烷(1.78%)、三十六烷(1.63%)、β-紫羅酮(1.34%)、亞油酸甲酯(1.12%)等。我們利用GC-MS 聯(lián)用技術(shù)首次對(duì)冬青葉兔唇花地上部分的非極性成分進(jìn)行了分析，并利用峰面積歸一化法測定了各成分的相對(duì)含量，一方面豐富了兔唇花屬植物的化學(xué)成分，另外對(duì)改屬植物資源的合理開發(fā)應(yīng)用提供了參考。

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