許鳳，李紅梅，王樂平 （齊齊哈爾醫(yī)學院藥學院，黑龍江齊齊哈爾161006）

頭孢菌素類藥物是臨床上應用較廣泛的抗菌類藥物，其中頭孢替唑鈉為第一代半合成的頭孢菌素衍生物，頭孢羥氨芐為半合成第一代口服頭孢菌素，頭孢呋辛鈉為第2代頭孢菌素類抗生素，頭孢他啶為第3代頭孢菌素類抗生素，均收載于中國藥典2010年版二部，目前這四種頭孢菌素類藥物市面上出現(xiàn)假藥較多，為了維護消費者權益，保護人民的生命安全，本文建立了能同時檢測頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢呋辛鈉和頭孢羥氨芐這4種藥品的薄層（TLC）快速藥檢分析方法，并與拉曼光譜圖法（Raman）聯(lián)用，效果較理想。

1 材料

1．1 儀器 UP50超聲波清洗器（南京壘君達超聲電子設備有限公司）；YOKO－ZF三用紫外線分析儀（武漢藥科新技術開發(fā)有限公司）；拉曼光譜儀NICOLET6700FT－IR NXR FTRAMAN MODULE（Thermo SCIENTIFIC）。

1．2 試藥 注射用頭孢他啶（上海新先鋒藥業(yè)有限公司，批號120313）；注射用頭孢他啶（上海新先鋒藥業(yè)有限公司，批號110701）；注射用頭孢替唑鈉（天津新豐制藥有限公司，批號110801）；注射用頭孢替唑鈉（天津新豐制藥有限公司，批號111201）；注射用頭孢呋辛鈉（深圳致君制藥有限公司，批號B20111001）；注射用頭孢呋辛鈉（深圳致君制藥有限公司，批號B20111008）；頭孢羥氨芐片（石藥集團歐意藥業(yè)有限公司，批號003101201）；頭孢羥氨芐顆粒（石藥集團歐意藥業(yè)有限公司；批號064110150）。頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢呋辛鈉、頭孢羥氨芐等對照品均由中國食品藥品檢定研究院提供；薄層層析硅膠GF254、羧甲基纖維素鈉、檸檬酸鈉、硝酸銀、醋酸乙酯、冰醋酸、丙酮、氨水、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉均為分析純。

2 方法

2．1 TLC法

2．1．1 溶液的配制 （1）對照品溶液：稱取頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢呋辛鈉和頭孢羥氨芐對照品各適量于不同的容量瓶中，分別加pH7．0磷酸鹽緩沖液［1］溶解制成每1 mL約含1 mg的溶液，作為對照品溶液。再稱取頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢呋辛鈉和頭孢羥氨芐對照品各適量置于同一量瓶中，加pH7．0磷酸鹽緩沖液溶解制成每1 mL各約含1 mg的溶液，作為對照品混合溶液。（2）供試品溶液：稱取頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢呋辛鈉和頭孢羥氨芐4個品種8個批次的藥品各適量置于不同量瓶中，加pH7．0磷酸鹽緩沖液溶解、振搖2 min后超聲提取5 min，按標示量制成每1 mL約含1 mg的溶液，作為供試品溶液。

2．1．2 色譜條件 固定相：硅膠 GF254－0．5%羧甲基纖維素鈉溶液（1∶3）研勻，濕法鋪板，晾干，105℃活化1 h后置干燥器中備用；展開劑：醋酸乙酯－冰醋酸－丙酮－水＝5∶2∶2∶1＋適量氨水作為掃尾劑；點樣量：2μL；顯色方法：于254 nm紫外燈下檢視。

2．1．3 系統(tǒng)適用性試驗 依法［2］，將4種對照品溶液與對照品混合溶液各點樣2μL于同一硅膠GF254薄層板上，飽和5～10 min后展開約20 min、展距約6～7 cm時分離效果較理想。將硅膠板取出晾干，于254 nm紫外燈下檢視，結果如圖1所示。

2．1．4 耐用性考查 在不同條件下，將對照品混合溶液作為考察對象，點樣量為2μL，測定方法同上，考察15，25，35，45，55℃等溫度和18%，32%，58%和88%等濕度對本展開系統(tǒng)是否有影響。最終結果顯示溫度和濕度的變化對本展開系統(tǒng)無影響，分離度及比移值均很理想。

2．1．5 測定 在“2．1．2”項的色譜條件下，在同一 GF245玻璃硅膠板上依次點對照品混合溶液、頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢呋辛鈉和頭孢羥氨芐等4個品種8個批次藥品的供試品溶液各2μL，在層析缸中飽和5～10 min，展開20 min后，在254 nm下檢視，結果如圖2所示。

2．2 Raman法驗證

2．2．1 掃描條件 FTIR掃描范圍：400～4000 cm－1；拉曼光譜儀激光源：1064 nm，拉曼位移波數(shù)范圍：100～3750 cm－1，掃描次數(shù)：32次，分辨率：8 cm－1。

2．2．2 測定 在圖2～圖5中的薄層板上的對照品斑點處與相應樣品的斑點處點上自制的納米銀溶膠［3］，在“2．2．1”的掃描條件下進行Raman掃描，部分結果如圖6～9。

3 結果

3．1 TLC法結果

3．1．1 系統(tǒng)適用性試驗 將展開、晾干后的GF254硅膠板在紫外燈254 nm下檢視，結果如圖1所示，4點分離很好，比移值Rf0．2～0．8，也很理想。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗TLC圖Fig 1 TLC chromatograph of system suitability test

3．1．2 供試品測定結果 如圖2所示，頭孢羥氨芐顆粒劑斑點有拖尾現(xiàn)象，其產生原因主要是因為顆粒劑中輔料較多，除常用的稀釋劑，潤滑劑外還添加糖類做矯味劑，這些添加可能影響頭孢羥氨芐的展開，使其斑點拖尾。

根據(jù)圖2中Rf值和斑點顏色能夠初步判定所檢測的頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢呋辛鈉和頭孢羥氨芐等4個品種8個批次的藥品都為正品。

圖2 供試品TLC圖Fig 2 TLC chromatograph of ceftazidine samples

3．2 Raman法結果

圖3 頭孢他啶Raman圖Fig 3 Raman spectrum of ceftazidine

圖4 頭孢替唑鈉Raman圖Fig 4 Raman spectrum of ceftezole sodium

圖5 頭孢呋辛鈉Raman圖Fig 5 Raman spectrum of cefuroxime sodium

圖6 頭孢羥氨芐Raman圖Fig 6 Raman spectrum of cefuroxime sodium

根據(jù)Raman圖能夠判定所檢測的頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢呋辛鈉、頭孢羥氨芐等4個品種8個批次的藥品都為正品，此結果與TLC檢測結果相符。

4 討論

頭孢菌素類抗生素是分子中含有頭孢烯的半合成抗生素。中國藥典2010年版二部中收載的頭孢菌素類藥物制劑主要用化學法和HPLC法進行鑒別，都存在專屬性不高的缺點。而現(xiàn)有文獻所介紹的TLC法［4－6］固定相使用的是硅膠G或H、需要噴以顯色劑方可顯色，方法繁瑣費時。在本研究中，因考慮到頭孢菌素類藥物結構中有共軛結構對紫外光有吸收，所以選用了硅膠GF254為固定相，在紫外燈254 nm下檢視即可，方便省時。

因頭孢菌素類藥物分子結構非常相似，通常一個展開系統(tǒng)只能展開一種此類藥物，欲將幾種此類藥物區(qū)分開來，在固定相確定后，流動相的選擇至關重要。而現(xiàn)有文獻所介紹的TLC法［1］流動相中使用了較大比例（70%）的四氫呋喃，雖然分離效果較理想，但因四氫呋喃為二類有毒試劑，對環(huán)境和人體傷害較大，本研究選用了毒性較小的醋酸乙酯∶冰醋酸∶丙酮∶水＝5∶2∶2∶1＋適量氨水為展開劑，由實驗結果可知此TLC系統(tǒng)可同時檢測頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢呋辛鈉和頭孢羥氨芐4種藥物且展開速度較快，適用于基層藥品檢驗。

以上TLC方法專屬性仍不是很高，可用于該類藥品的初篩，其結果需要做進一步分析驗證。作為一種近年來發(fā)展迅速的光譜分析方法，拉曼光譜在某些方面有著獨特的優(yōu)勢。使用拉曼光譜對樣品進行分析，具有測試樣品非接觸性、非破壞性、時間短、樣品所需量小及樣品無需制備等優(yōu)點［7－8］。拉曼光譜法專屬性雖然很高，但對物質的純度要求也較高，若為制劑，則輔料會對主成分的Raman光譜產生干擾，不利于主成分的識別［9］。而文獻報道的薄層色譜制備技術［10］操作較繁瑣，不利于基層快檢。本研究在展開的薄層板上的對照品與對應樣品的斑點處點上自制的納米銀溶膠以增強Raman響應信號［11］，再進行Raman掃描，既利用了TLC法分離的優(yōu)勢，又利用了Raman專屬性高的特點，簡便、快速。由檢測結果可知Raman法適用于該類藥物的定性鑒別。本研究不僅可以用于該頭孢類藥品的鑒別，而且將會在中藥保健品中非法添加西藥的鑒別方面有較大的發(fā)展空間。

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