高世華，池細(xì)俤 ，陳家龍，李國玉，呂春燕

（福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平第一醫(yī)院 檢驗科，福建 南平353000）

鮑曼不動桿菌（Acinetobacter baumannii AB）是醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌，尤其是多重耐藥鮑曼不 動 桿 菌 （Multi－drug resistance Acinetobacter baumannii MDRAB），已成為醫(yī)院內(nèi)感染暴發(fā)流行的重要病原菌 ，多見于ICU病區(qū)、神經(jīng)外科、呼吸科、骨科等，給臨床治療帶來很大困難。早期快速的病原學(xué)診斷，對及時有效地治療該菌引起的感染、抗菌藥物的合理使用等方面有重要意義。

目前，臨床上主要應(yīng)用傳統(tǒng)培養(yǎng)法進(jìn)行MDRAB診斷，但其耗時較長不利于早期診斷。CHROM－agar篩選平板法主要根據(jù)待篩查的目標(biāo)病原體的生化、生理特點在培養(yǎng)基中添加相應(yīng)的物質(zhì)，通過目標(biāo)病原體對相應(yīng)物質(zhì)的代謝發(fā)生顏色變化，實現(xiàn)快速檢測的目的，檢測時間約18小時，目前國內(nèi)醫(yī)學(xué)界主要用于真菌、沙門菌、ESBL等病原體的快速檢測。用于MDRAB的臨床檢測的，目前暫無報道，國外的研究也較少［1］。

1 材料與方法

1．1 菌株來源 2011年至2012年本院住院及門診患者的各類臨床標(biāo)本，其中非MDRAB 69株（包括痰62株、尿液1株、血液1株、傷口分泌物等4株、膽汁1株）；MDRAB 75株（包括痰63株、尿液5株、傷口分泌物等6株、腦脊液1株）。MDRAB是指對常用的7類抗假單胞菌的抗生素（包括：抗假單孢的青霉素類、頭孢菌素類、氨基糖苷類、喹諾酮類、碳青霉烯類、四環(huán)素類、磺胺類）中的至少5類耐藥的菌株。

1．2 細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定 按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》培養(yǎng)分離菌種；用Bact／Alert120進(jìn)行血培養(yǎng)；菌種鑒定用VITEK 2COMPACT全自動微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行菌株鑒定。

1．3 藥物敏感試驗及結(jié)果判定 用K－B（紙片擴(kuò)散）法進(jìn)行及VITEK 2COMPACT全自動微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行。藥敏紙片和M－H培養(yǎng)基購自英國OXOID 公司，質(zhì)控菌株為 ATCC 25923、ATCC 27853、ATCC 25922，采用 NCCLS（2000年）標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果。

1．4 CHROM－agar篩選平板制備方法 按說明書稱取CHROM－agar干粉加入無菌水及液體增補(bǔ)劑、加熱滅菌，降溫到45℃左右，加入MDR增補(bǔ)劑攪拌后倒入平皿，放冷備用，兩周內(nèi)用完。

1．5 CHROM－agar篩選平板法的應(yīng)用 在接種標(biāo)本時增加接種1個CHROM－agar篩選平板，37℃培養(yǎng)18小時觀察結(jié)果。

2 結(jié)果

2．1 CHROM－agar篩選平板性能試驗 取已知非MDRAB及MDRAB菌株接種于CHROM－agar篩選平板37℃培養(yǎng)18小時觀察結(jié)果，MDRAB在CHROM－agar篩選平板顯棕紅色菌落，非MDRAB的AB菌株則不生長。

2．2 CHROM－agar篩選平板特異性試驗 取大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌、白色念球菌菌株接種于CHROM－agar篩選平板；取普通痰標(biāo)本及含MDRAB痰標(biāo)本接種于CHROM－agar篩選平板，37℃培養(yǎng)18小時觀察結(jié)果，MDRAB在平板顯棕紅色菌落，非MDRAB菌株則基本不生長，特異性較好。

2．3 69株非MDRAB顯色結(jié)果 69株非MDRAB的藥敏試驗的抗菌藥物為：TZP、SAM、CRO、FEP、CAZ、TOB、GN、CIP、LEV、IMI、SXT、MH。不同耐藥性的MDRAB菌株均不生長不產(chǎn)色，即陰性預(yù)測值為100%。

2．4 75株MDRAB的耐藥性 SS抗假單胞青霉＋ 酶抑制劑 （PRL、SAM、AMC、TIM、TZP）92%；頭孢菌素類（KZ、CXM、CRO、CTX、CAZ、CFP、FEP）100%；頭孢＋酶（SCF）86．7%；碳青烯（IMI、MEM、ETP）94．7%；頭 霉 素 類 （FOX）100%；ATM 100%；氨基糖（GN、AK）97．3%；喹諾酮類（CIP、LEV）100%；SXT 100%；MH 6．7%，75株MDRAB生長顯色反應(yīng)均陽性，即陽性預(yù)測值為100%，顯示敏感性較好。

3 討論

3．1 CHROM－agar篩選平板法對MDRAB檢測的速度較快，陰性預(yù)測值及陽性預(yù)測值較好均達(dá)100%，是臨床實驗室檢測MDRAB較理想的快速篩查方法［2］。

3．2 目前MDRAB的實驗室診斷，多采用傳統(tǒng)常規(guī)培養(yǎng)法：采集標(biāo)本 －＞ 培養(yǎng) －＞ 鑒定藥敏 －＞ 報告，至少耗時約3天；一些實驗室為提高檢測速度常通過PCR法檢測OXA51或OXA23基因確定MDRAB：采集標(biāo)本 －＞ 培養(yǎng) －＞PCR試驗及報告，耗時約2天（48小時），但該法假陽性、假陰性性較高［3］，操作復(fù)雜，不適合實驗室常規(guī)開展。應(yīng)用CHROM－agar篩選平板法進(jìn)行MDRAB的篩查較上述兩種方法有一定的優(yōu)勢，研究國內(nèi)尚屬空白，國外的研究也較少。

3．3 CHROM－agar篩選平板法的應(yīng)用可大幅縮短MDRAB的病原學(xué)診斷時間，對該菌感染病人的早期病原診斷、及時地治療該菌引起的感染、快速制定院感防控策略等方面有重要意義。

［1］陳佰義，何禮賢，胡必杰，等．中國鮑曼不動桿菌感染診治與防控專家共識［J］．中華醫(yī)學(xué)雜志，2012，92（2）：76．

［2］Gordon NG，Wareham DW，et al．Evaluation of CHROM－agar Acinetobacter for Detection of Enteric Carriage of Multidrug－Resistant Acinetobacter baumannii in Samples from Critically Ill Patients［J］．J Clin Microbiol，2009，47：2249．

［3］胡 源，何利華，張建中．bla＿OXA＿51＿like碳青霉烯酶基因 PCR擴(kuò)增用于鮑曼不動桿菌檢測的可行性評價［J］．中國病原生物學(xué)雜志，2009，4（10）：730．